第三章 灭菌制剂与无菌制剂(改)

1、 第三章第三章灭菌灭菌制剂与无菌制剂制剂与无菌制剂 第一节第一节 概述概述 第二节第二节 灭菌制剂与无菌制剂的相关技术灭菌制剂与无菌制剂的相关技术 第三节第三节 注射剂注射剂 第四节第四节 输液输液 第五节第五节 注射用无菌粉末注射用无菌粉末 第六节第六节 眼用制剂眼用制剂 第一节第一节 概述概述v一、灭菌制剂与无菌制剂的一、灭菌制剂与无菌制剂的定义定义v二、灭菌制剂与无菌制剂的二、灭菌制剂与无菌制剂的分类分类v三、灭菌制剂与无菌制剂的三、灭菌制剂与无菌制剂的质量要求质量要求一、定义一、定义灭菌制剂灭菌制剂（sterilized preparationsterilized preparatio

2、n）：是指采用某）：是指采用某一物理、化学方法杀灭或除去制剂中一物理、化学方法杀灭或除去制剂中所有活的微生物所有活的微生物的一类药物制剂。的一类药物制剂。无菌制剂无菌制剂（sterile preparationsterile preparation）：是指在无菌环）：是指在无菌环境中采用无菌操作方法或无菌技术制备的不含任何活境中采用无菌操作方法或无菌技术制备的不含任何活的微生物的一类药物制剂。的微生物的一类药物制剂。适应对象适应对象：热稳定性差的药物热稳定性差的药物活体：活体：微生物的繁殖体和芽孢微生物的繁殖体和芽孢二、分类二、分类注射用制剂：注射用制剂：注射剂、输液、注射粉针等；注射剂、输液

3、、注射粉针等； 眼用制剂：眼用制剂：滴眼剂、眼用膜剂、软膏剂、凝胶剂等；滴眼剂、眼用膜剂、软膏剂、凝胶剂等； 植入型制剂：植入型制剂：植入片等；植入片等； 局部用外用制剂：局部用外用制剂：溃疡、烧伤及外伤用溶液、软膏溃疡、烧伤及外伤用溶液、软膏剂、气雾剂等。剂、气雾剂等。 手术用制剂：手术用制剂：止血海绵剂和骨蜡等。止血海绵剂和骨蜡等。 无菌无菌 无热原无热原 静脉注射、脊椎腔注射、一次用量超过静脉注射、脊椎腔注射、一次用量超过5ml5ml的的注射剂注射剂 可见异物和不溶性微粒可见异物和不溶性微粒 应符合药典规定应符合药典规定 安全性安全性 非水溶剂和附加剂，须经动物实验证实无刺激非水溶剂和附

4、加剂，须经动物实验证实无刺激性和毒性性和毒性 渗透压渗透压 pH pH 与血液和组织相近与血液和组织相近 稳定性稳定性 物理、化学和生物稳定性物理、化学和生物稳定性 降压物质降压物质 须符合规定须符合规定三、质量要求三、质量要求 第二节第二节 灭菌制剂与无菌制剂相关技术灭菌制剂与无菌制剂相关技术v一、水处理技术一、水处理技术v二、液体过滤技术二、液体过滤技术v三、热原去除技术三、热原去除技术v四、渗透压调节技术四、渗透压调节技术v五、灭菌和无菌操作技术五、灭菌和无菌操作技术v六、空气净化技术六、空气净化技术一、水处理技术一、水处理技术制药用水：制药用水： 包括包括饮用水饮用水、纯化水纯化水、注

5、射用水注射用水及及灭菌注射用水灭菌注射用水v 饮用水饮用水：药材的漂洗、制药用具的粗洗：药材的漂洗、制药用具的粗洗v 纯化水纯化水：配制：配制普通制剂的溶剂普通制剂的溶剂或或试验用水试验用水、灭菌或非灭菌灭菌或非灭菌制剂用药材的提取溶剂、非灭菌制剂用具的清洗制剂用药材的提取溶剂、非灭菌制剂用具的清洗v 注射用水注射用水：重蒸馏水，：重蒸馏水，去除细菌内毒素，无热原，去除细菌内毒素，无热原，注射剂、注射剂、输液、眼用制剂的配制及其容器的清洗输液、眼用制剂的配制及其容器的清洗v 灭菌注射用水灭菌注射用水：直接用于：直接用于临床临床，如注射用灭菌粉末的溶剂、，如注射用灭菌粉末的溶剂、注射剂的稀释剂或

6、伤口冲洗注射剂的稀释剂或伤口冲洗原水原水原水处理技术：原水处理技术： 包括包括过滤过滤、电渗析法电渗析法、反渗透法反渗透法及及离子交换法离子交换法v过滤过滤：初滤和精滤，：初滤和精滤，石英砂滤器石英砂滤器活性炭滤器活性炭滤器细过滤器（细过滤器（5um）v电渗析法电渗析法：是指利用具有选择渗透性和导电性良：是指利用具有选择渗透性和导电性良好的离子渗透膜，在外加电场的作用下，水中的好的离子渗透膜，在外加电场的作用下，水中的杂质离子分别通过阳杂质离子分别通过阳阴离子渗透膜，使水纯化。阴离子渗透膜，使水纯化。电渗析法电渗析法电渗析工作原理电渗析工作原理阳阳极极阴阴极极依据在电场作用下离子依据在电场作用

7、下离子定向迁移定向迁移及交换膜的及交换膜的选择性选择性透过透过而设计的。而设计的。处理原水效率不高。处理原水效率不高。应用：应用：原水的预处理，海水淡化。原水的预处理，海水淡化。电渗析装置电渗析装置反渗透法反渗透法 耗能低、水质好、设备使用语保养方便耗能低、水质好、设备使用语保养方便反渗透装置反渗透装置离子交换法离子交换法v离子交换法离子交换法：是利用离子是利用离子交换交换树脂将水中的树脂将水中的阴、阳离子除去。阴、阳离子除去。OH-H+离子交换法离子交换法 离子交换树脂离子交换树脂: : 是用有机合成方法制成是用有机合成方法制成, ,常用的原料为苯乙烯或常用的原料为苯乙烯或丙烯酸丙烯酸( (

8、酯酯) )，通过聚合，通过聚合反应生成具有三维空间反应生成具有三维空间立体网络结构的骨架，立体网络结构的骨架，再在骨架上导入再在骨架上导入不同类不同类型的化学活性基团型的化学活性基团( (通常通常为为酸性或碱性基团酸性或碱性基团) )而制而制成成, ,离子交换树脂是一种离子交换树脂是一种带有功能基的带有功能基的网状高聚网状高聚物电解质物电解质。离子交换树脂的结构：离子交换树脂的结构：1.1.高聚大分子骨架高聚大分子骨架, ,它具有它具有空间网状结构；空间网状结构；2.2.连接在骨架上的功能基；连接在骨架上的功能基；3.3.功能基上所带电荷相反的功能基上所带电荷相反的可交换离子。可交换离子。R-

9、SO3-H+骨架骨架功能基功能基交换离子交换离子离子交换法离子交换法阳离子阳离子交换交换树脂的工作树脂的工作原理：原理：阴离子阴离子交换交换树脂的工作树脂的工作原理：原理： 设备简单，耗能小，成本低设备简单，耗能小，成本低 水纯度水纯度高高，可除去部分的阴、阳离子，可除去部分的阴、阳离子 对热原、细菌有一定的清除作用对热原、细菌有一定的清除作用 对树脂需要进行对树脂需要进行预处理预处理、再生处理再生处理，需用到，需用到大量的酸碱大量的酸碱 当原水含盐量高达3000mg/L时，不宜采用离子交换法制备纯化水，但电渗析法仍适用。它不用酸碱处理，较离子交换法经济。 电渗析法常用于原水预处理，供离子交换

10、法使用，以减轻离子交换树脂的负担。离子交换水的应用范围离子交换水的应用范围 主要供主要供蒸馏法制备注射用水蒸馏法制备注射用水 用于用于洗瓶洗瓶等也较多等也较多 目前目前不能达到注射用水不能达到注射用水的标准的标准注射用水制备技术：注射用水制备技术： 可用可用蒸馏法蒸馏法、反渗透法及综合法、反渗透法及综合法v蒸馏法蒸馏法：将纯化水进行蒸馏，去除水中所有不挥：将纯化水进行蒸馏，去除水中所有不挥发性微粒、可溶性小分子无机盐、有机盐，可溶发性微粒、可溶性小分子无机盐、有机盐，可溶性高分子材料，是最经典、最可靠的制备注射用性高分子材料，是最经典、最可靠的制备注射用水的方法。水的方法。水源的要求：以水源的

11、要求：以去离子水去离子水为水源为水源一般过程：纯化水一般过程：纯化水蒸发蒸发隔膜装置隔膜装置冷凝冷凝 加热蒸发加热蒸发冷凝冷凝蒸馏设备蒸馏设备 小量生产小量生产 塔式和亭式蒸馏水器塔式和亭式蒸馏水器 大量生产大量生产 多效蒸馏水机或汽压式蒸馏水器多效蒸馏水机或汽压式蒸馏水器多效蒸馏水机多效蒸馏水机三效蒸馏水机工作原理三效蒸馏水机工作原理1-原水泵原水泵;2-加热蒸汽加热蒸汽;3-二次蒸二次蒸汽汽;4-蒸汽蒸汽(去冷凝为产品去冷凝为产品);5-浓浓水水;6-冷凝水冷凝水多效蒸馏水机特点：耗能低、产量高、质量优。气压式蒸馏水器气压式蒸馏水器它是以输入部分外界能量而将低温热能转化为高温热能的原理来生

12、产蒸馏水。注射用水制备技术：注射用水制备技术： 可用蒸馏法、可用蒸馏法、反渗透法反渗透法及综合法及综合法v反渗透法反渗透法：美国药典美国药典收载，采用收载，采用二次反渗透二次反渗透。p 一般情况，一般情况，一级反渗透一级反渗透装置能除去装置能除去一价离子一价离子90-95%90-95%，二价二价离子离子98-99%98-99%，同时能除去微生物和病毒，但除去，同时能除去微生物和病毒，但除去氯离子氯离子的的能力达不到药典要求；能力达不到药典要求；p 二级反渗透二级反渗透装置能彻底除去装置能彻底除去氯离子氯离子。注射用水制备技术：注射用水制备技术： 可用蒸馏法、反渗透法及可用蒸馏法、反渗透法及综合

13、法综合法v综合法：综合法：将各种水处理技术按照各自的特点进行将各种水处理技术按照各自的特点进行有效组合有效组合。饮用水饮用水纯化水纯化水注射用水注射用水电渗析或反渗透装置电渗析或反渗透装置细过滤器细过滤器阳离子树脂床阳离子树脂床阴离子树脂床阴离子树脂床脱气塔脱气塔多效蒸馏水机或气压式蒸馏水机多效蒸馏水机或气压式蒸馏水机混合树脂床混合树脂床热贮水器（热贮水器（8080）或）或7070以上保温循环或以上保温循环或44以下无菌状态贮存以下无菌状态贮存注射用水的收集与贮存注射用水的收集与贮存 1. 初馏液不要 2. 检查合格后带有无菌过滤装置的密闭系统收集 3. 80以上保温、70以上保温循环或于4

14、以下无菌状态下贮存 4. 12内小时用完 注射用水的质量检查注射用水的质量检查 常规检查项目：常规检查项目：酸碱度、氨、氯化物、硫酸酸碱度、氨、氯化物、硫酸盐与钙盐、重金属等盐与钙盐、重金属等 注射用水：注射用水：内毒素含量内毒素含量0.25EU/mL0.25EU/mL， pHpH值值5.0-7.0,5.0-7.0,氨含量氨含量0.000020.00002二、液体过滤技术二、液体过滤技术 过滤：过滤：借助多孔性材料把借助多孔性材料把固体固体微粒阻留微粒阻留而使而使液体液体通过，将固体通过，将固体微粒与液体微粒与液体分离分离的过程的过程 滤材滤材 滤浆滤浆 滤饼滤饼 滤液滤液滤材滤材滤浆滤浆滤饼

15、滤饼滤液滤液v介质过滤介质过滤：是指靠介质的拦截作用而进行的：是指靠介质的拦截作用而进行的固固液分离的操作。依据截留方式不同分为表液分离的操作。依据截留方式不同分为表面过滤和深层过滤。面过滤和深层过滤。v滤饼过滤：滤饼过滤：过滤时，被截留的固体粒子聚集在过滤时，被截留的固体粒子聚集在过滤介质表面形成滤饼，过滤的拦截作用主要过滤介质表面形成滤饼，过滤的拦截作用主要由滤饼产生。由滤饼产生。过滤机制：过滤机制：固体粒子在滤材中固体粒子在滤材中截留方式截留方式。 过滤过程过滤过程介质过滤介质过滤表面过滤表面过滤深层过滤深层过滤滤饼过滤滤饼过滤截留在介质表面截留在介质表面分离度高分离度高微孔滤膜、超滤膜

16、微孔滤膜、超滤膜和反渗透膜和反渗透膜截留在介质截留在介质“内部内部”惯性、重力、扩散惯性、重力、扩散“架桥架桥”；被吸附被吸附沙滤棒、垂熔玻璃漏斗、沙滤棒、垂熔玻璃漏斗、多孔陶瓷、石棉过滤多孔陶瓷、石棉过滤l固体粒子聚集在过滤介质表面聚集在过滤介质表面形成滤饼。l滤饼：滤饼：起拦截作用l过滤介质：过滤介质：支撑滤饼的作用架桥现象架桥现象滤饼过滤滤饼过滤深层过滤深层过滤影响过滤的因素影响过滤的因素 液体的流动遵循公式：液体的流动遵循公式： V= V=P P r r4 4t/8t/8 L L V V单位面积上的过滤容量；单位面积上的过滤容量； P P操作压力；操作压力； r r流过层中流过层中毛细

17、管毛细管半径；半径； t t过滤时间；过滤时间； 液体粘度；液体粘度； L L毛细管毛细管长度；长度； V/t V/t过滤速度。过滤速度。 操作压力操作压力越大，滤速越快越大，滤速越快 孔径孔径越窄，阻力越大，滤速越慢越窄，阻力越大，滤速越慢 粘度粘度愈大，滤速愈慢愈大，滤速愈慢 滤速与滤速与毛细管长度毛细管长度成反比，沉积成反比，沉积的滤饼量愈多，滤速愈慢的滤饼量愈多，滤速愈慢增加滤速的方法：增加滤速的方法：提高压力差提高压力差升温降低温黏度升温降低温黏度预滤减少滤饼厚度预滤减少滤饼厚度使颗粒变粗使颗粒变粗过滤器和过滤装置：过滤器和过滤装置：v砂滤棒过滤器砂滤棒过滤器：硅藻土烧结、白陶土烧结

18、，用于：硅藻土烧结、白陶土烧结，用于粗滤。粗滤。v垂熔玻璃滤器：垂熔玻璃滤器：硬质玻璃细粉烧结，按过滤介质硬质玻璃细粉烧结，按过滤介质孔径大小，分为孔径大小，分为6种规格。种规格。v微孔滤膜过滤器：微孔滤膜过滤器：以高分子材料为过滤介质。以高分子材料为过滤介质。适于低粘度药液；难清洗适于低粘度药液；难清洗截留能力强；易堵塞截留能力强；易堵塞滤过方式滤过方式常用二级过滤：常用二级过滤： 砂滤棒砂滤棒垂熔玻璃滤器垂熔玻璃滤器微孔膜滤器微孔膜滤器滤过动力：滤过动力： a.a.高位静压：压力稳定，滤速较慢高位静压：压力稳定，滤速较慢 b.b.加压滤过：压力稳定，滤速快加压滤过：压力稳定，滤速快 c.c

19、.减压滤过：压力不稳减压滤过：压力不稳板框式压滤机板框式压滤机( (多用于注射剂预滤多用于注射剂预滤) ) 面积大，截留量多，用于面积大，截留量多，用于粘性大、滤饼可压缩粘性大、滤饼可压缩物料；物料；装配和清洗麻烦。装配和清洗麻烦。 框框 板板 框框 板板洗涤板洗涤板非洗涤板非洗涤板悬浮液悬浮液滤液滤液板板非洗涤板非洗涤板洗涤液洗涤液洗出液洗出液框框 板板 框框 板板洗涤板洗涤板非洗涤板非洗涤板板板非洗涤板非洗涤板三、热原去除技术三、热原去除技术q热原热原（pyrogenspyrogens）：注射后能引起人体特殊注射后能引起人体特殊致热反应致热反应的物的物质，是微生物产生的一种质，是微生物产生

20、的一种内毒素内毒素。q产生来源：产生来源：大多数细菌（革兰氏阴性杆菌致热能力最强）、大多数细菌（革兰氏阴性杆菌致热能力最强）、霉菌、病毒。霉菌、病毒。q组成：组成：热原热原 = = 内毒素（内毒素（endotoxinendotoxin） = = 脂多糖脂多糖( (具有很强的具有很强的热原活性热原活性) ) 、磷脂、蛋白质磷脂、蛋白质q致热反应：致热反应：发冷、寒战、体温升高、恶心呕吐等不良反应，发冷、寒战、体温升高、恶心呕吐等不良反应，有时体温可升至有时体温可升至4040，严重者出现昏迷、虚脱，有生命危险。，严重者出现昏迷、虚脱，有生命危险。热原的性质：热原的性质：P178P178 1.1.耐

21、热性耐热性 2.2.滤过性滤过性 3.3.吸附性吸附性 4.4.不挥发性不挥发性 5.5.水溶性水溶性 6.6.强酸、强碱、强氧化剂的破坏性强酸、强碱、强氧化剂的破坏性热原的主要污染途径：热原的主要污染途径： 1.1.溶剂溶剂 2.2.原辅料原辅料 3.3.容器、用具、管道与设备容器、用具、管道与设备 4.4.制造过程与生产环境制造过程与生产环境 5.5.注射器具注射器具 热原的去除方法：热原的去除方法： 1. 1.高温法高温法：250250加热加热3030分钟以上分钟以上 2.2.酸碱法酸碱法：重铬酸钾硫酸洗液或稀氢氧化钠溶液处理重铬酸钾硫酸洗液或稀氢氧化钠溶液处理 3. 3.吸附法吸附法：

22、活性炭活性炭 4.4.蒸馏法蒸馏法：利用热原的不挥发性利用热原的不挥发性 5. 5.离子交换法离子交换法：一般不可靠一般不可靠 6. 6.凝胶过滤法凝胶过滤法：二氨基乙基葡聚糖凝胶二氨基乙基葡聚糖凝胶 7. 7.反渗透法反渗透法：三醋酸纤维素膜三醋酸纤维素膜 8. 8.超滤法超滤法：3-15nm3-15nm超滤膜超滤膜 9.9.其他其他: :二次以上湿热灭菌二次以上湿热灭菌四、渗透压调节技术四、渗透压调节技术 等渗与等张的概念等渗与等张的概念 (1)(1)等渗溶液等渗溶液(isoosmotic solution)(isoosmotic solution)：系指与血浆渗透压系指与血浆渗透压相等的

23、溶液。相等的溶液。低渗溶液低渗溶液红细胞破裂，溶血现象红细胞破裂，溶血现象 高渗溶液高渗溶液红细胞萎缩红细胞萎缩肌内注射可耐受肌内注射可耐受0.50.53 3个等渗度的溶液，静脉输液要求等渗，个等渗度的溶液，静脉输液要求等渗，脊髓腔内注射必须调节至等渗。脊髓腔内注射必须调节至等渗。 (2)(2)等张溶液等张溶液(isotonic solution)(isotonic solution)：系指渗透压与红细胞膜系指渗透压与红细胞膜张力相等的溶液。张力相等的溶液。在等张溶液中既不会发生红细胞体积改变，更不会发生溶血。在等张溶液中既不会发生红细胞体积改变，更不会发生溶血。 芽孢的特性。芽孢的特性。 用

24、自己的话说明电渗析法、反渗透法、用自己的话说明电渗析法、反渗透法、离子交换法的原理。离子交换法的原理。 滤饼过滤原理。滤饼过滤原理。五、灭菌与无菌操作技术五、灭菌与无菌操作技术 灭菌：灭菌：杀灭和除去所有微生物的繁殖体和芽孢方法杀灭和除去所有微生物的繁殖体和芽孢方法 无菌：无菌：不存在任何活的微生物不存在任何活的微生物 无菌操作：无菌操作：整个过程在无菌环境中制备整个过程在无菌环境中制备 防腐：防腐：抑制微生物的生长和繁殖的手段抑制微生物的生长和繁殖的手段 消毒：消毒：杀灭和除去杀灭和除去芽孢芽孢以外的病原微生物以外的病原微生物灭菌的目的灭菌的目的 杀灭或除去所有杀灭或除去所有微生物繁殖体微生

25、物繁殖体和和芽孢芽孢 最大限度地最大限度地提高提高药物制剂的药物制剂的安全性安全性 保护保护制剂的制剂的稳定性稳定性 保证保证制剂的临床制剂的临床疗效疗效（一）物理灭菌法（一）物理灭菌法1 1）干热灭菌法）干热灭菌法 火焰灭菌法：火焰灭菌法：火焰直接灼烧火焰直接灼烧灭菌灭菌 适用范围：适用范围：迅速、可靠、简便，适用于耐火焰材质迅速、可靠、简便，适用于耐火焰材质( (如金属、如金属、玻璃及瓷器等玻璃及瓷器等) )的物品与用具，的物品与用具，不适合于药物的灭菌不适合于药物的灭菌。 干热空气灭菌法：干热空气灭菌法：高温干热空气高温干热空气灭菌灭菌 条件：条件：160-170160-170，2-42

26、-4h h； 1 170-18070-180，1 1h h以上；以上； 250 250灭菌灭菌45min45min 适用范围：适用范围：耐高温的玻璃和金属制品以及不允许耐高温的玻璃和金属制品以及不允许湿气湿气穿透的穿透的油脂类油脂类( (如油性软膏基质、注射用油等如油性软膏基质、注射用油等) )和耐高温的粉末化学和耐高温的粉末化学药品等的灭菌。药品等的灭菌。从灭菌物品全达到从灭菌物品全达到特定特定温度温度后开始计时后开始计时缺点：缺点：在干燥状态下，热穿透力弱，温度不易均匀，由于灭菌温度过高，在干燥状态下，热穿透力弱，温度不易均匀，由于灭菌温度过高，不适用橡胶、塑料及大部分药品。不适用橡胶、塑

27、料及大部分药品。2 2）湿热灭菌法）湿热灭菌法定义：定义：高温高湿环境中灭菌。高温高湿环境中灭菌。 如，如，饱和蒸汽、沸水或流通蒸汽饱和蒸汽、沸水或流通蒸汽优点：优点：蒸气比热大，穿透力强，蒸气比热大，穿透力强，容易使蛋白变性；灭菌容易使蛋白变性；灭菌效率高，操作简便，应用最广泛的方法。效率高，操作简便，应用最广泛的方法。类别：类别：包括包括热压灭菌法、流通蒸气灭菌法、煮沸灭菌法热压灭菌法、流通蒸气灭菌法、煮沸灭菌法和低温间歇灭菌和低温间歇灭菌等方法，根据药品性质进行选用合适的等方法，根据药品性质进行选用合适的方法。方法。热压灭菌法热压灭菌法 定义：定义：高压饱和水蒸汽高压饱和水蒸汽加热杀灭微

28、生物的方法。加热杀灭微生物的方法。 本法一般公认为本法一般公认为最可靠最可靠的湿热灭菌法。的湿热灭菌法。 灭菌条件：灭菌条件： 1) 111) 1166，1.71.7atm(67kPaatm(67kPa，7.1kg/cm7.1kg/cm2 2) )，4 40min0min； 2) 121 2) 121，2.0atm(97kPa2.0atm(97kPa，11kg/cm11kg/cm2 2) )，3 30min0min； 3) 126 3) 126，2.4atm(139kPa2.4atm(139kPa，14.1kg/cm14.1kg/cm2 2) )，15min15min。 适用范围：适用范围：耐

29、耐高温和耐高压蒸气高温和耐高压蒸气的所有药物制剂、容器等。的所有药物制剂、容器等。流通蒸气灭菌法流通蒸气灭菌法 定义：定义：常压下，采用常压下，采用100100流通蒸气杀灭微生物的方法。流通蒸气杀灭微生物的方法。 灭菌条件：灭菌条件：常压下（常压下（1.0 atm1.0 atm），），100100流通蒸气，流通蒸气， 时间时间30-6030-60minmin。 适用范围适用范围：消毒及不耐高热制剂的灭菌。：消毒及不耐高热制剂的灭菌。 缺点：缺点：不能保证不能保证杀灭所有的芽孢，如破伤风等厌气性菌的杀灭所有的芽孢，如破伤风等厌气性菌的芽孢，是芽孢，是非可靠非可靠的灭菌法。一般作为辅助灭菌手段。的

30、灭菌法。一般作为辅助灭菌手段。煮沸灭菌法煮沸灭菌法定义：定义：置沸水中置沸水中加热灭菌。加热灭菌。灭菌条件：灭菌条件：沸水，时间沸水，时间30-6030-60minmin。适用范围：适用范围：常用于安瓿、注射器、注射针头等器皿的消毒常用于安瓿、注射器、注射针头等器皿的消毒。 缺点：缺点：灭菌效果差，必要时加入抑菌剂，如三氯叔丁醇、灭菌效果差，必要时加入抑菌剂，如三氯叔丁醇、甲酚等。甲酚等。低温间歇灭菌法低温间歇灭菌法定义：定义：置置60-8060-80的水或流通蒸汽中加热的水或流通蒸汽中加热60min60min，杀灭微，杀灭微生物生物繁殖体繁殖体后，在室温条件下后，在室温条件下放置放置2424

31、h h；让待灭菌物中的；让待灭菌物中的芽孢发育成繁殖体芽孢发育成繁殖体，再次再次加热灭菌、放置，反复多次，加热灭菌、放置，反复多次，直至杀灭所有芽孢。直至杀灭所有芽孢。适用范围：适用范围：适合于不耐高温、热敏感物料和制剂。适合于不耐高温、热敏感物料和制剂。 缺点：缺点：费时、工效低、灭菌效果低。加适量抑菌剂，以费时、工效低、灭菌效果低。加适量抑菌剂，以增加灭菌效力。增加灭菌效力。除本身具有抑菌能力者外，须加适量除本身具有抑菌能力者外，须加适量抑菌剂抑菌剂，以增加灭，以增加灭菌效力。菌效力。影响湿热灭菌的因素影响湿热灭菌的因素1)1)微生物的种类和数量：微生物的种类和数量：芽孢繁殖体衰老体芽孢繁

32、殖体衰老体最初菌数愈少，达到灭菌时间愈短。最初菌数愈少，达到灭菌时间愈短。 整个过程尽可能避免微生物污染。整个过程尽可能避免微生物污染。 2)2)蒸气性质：蒸气性质：饱和饱和、湿饱和、过热蒸汽。、湿饱和、过热蒸汽。3)3)灭菌时间与温度：灭菌时间与温度：需要考虑需要考虑杀死细菌杀死细菌和保证和保证药物有效性药物有效性两个方面。即，两个方面。即，达到灭菌的前提下，尽可能降低灭菌温度，达到灭菌的前提下，尽可能降低灭菌温度，缩短灭菌时间。缩短灭菌时间。 4)4)介质介质pHpH：中性中性液，耐热性最大；液，耐热性最大；碱性碱性溶液中次之，溶液中次之，酸性酸性不利不利于微生物的发育。于微生物的发育。定

33、义：定义：通过无菌的通过无菌的除菌过滤器除菌过滤器，除去，除去活的活的或或死的死的微生物微生物而得到不含微生物的滤液。属于而得到不含微生物的滤液。属于机械机械除菌方法。除菌方法。 滤膜的材质分亲水性和疏水性两种，根据过滤物品的性滤膜的材质分亲水性和疏水性两种，根据过滤物品的性质及过滤目的来选材质。质及过滤目的来选材质。适用范围：适用范围：适于适于对热不稳定对热不稳定的药物溶液、气体、水等物的药物溶液、气体、水等物品的灭菌。品的灭菌。滤器要求：滤器要求：孔径，不吸附、不脱落、易清洗、易操作。孔径，不吸附、不脱落、易清洗、易操作。3 3）过滤除菌）过滤除菌紫外线灭菌法紫外线灭菌法定义：定义：采用采

34、用紫外线（能量）照射紫外线（能量）照射杀灭微生物和芽孢的方杀灭微生物和芽孢的方法。属于表面灭菌。法。属于表面灭菌。 灭菌条件：灭菌条件：一般用于灭菌的紫外线波长是一般用于灭菌的紫外线波长是200-300200-300nmnm，灭菌力最灭菌力最强强的是波长为的是波长为254254nmnm的紫外线。的紫外线。 适用范围：适用范围：紫外线进行直线传播，其强度与距离平方成紫外线进行直线传播，其强度与距离平方成比例地减弱，并可被不同的表面反射。适合于照射物比例地减弱，并可被不同的表面反射。适合于照射物表表面面灭菌、无菌室空气及蒸馏水的灭菌；不适合于药液的灭菌、无菌室空气及蒸馏水的灭菌；不适合于药液的灭菌

35、及固体物料深部的灭菌。灭菌及固体物料深部的灭菌。4 4）射线灭菌法）射线灭菌法穿透能力弱穿透能力弱紫外线对人体如照射过久，能产生紫外线对人体如照射过久，能产生结合膜炎结合膜炎及及皮肤烧灼皮肤烧灼等现象。一般均在操作前开启紫外线灯约半小时至一小等现象。一般均在操作前开启紫外线灯约半小时至一小时，然后进行操作。时，然后进行操作。微波灭菌法微波灭菌法定义：定义：微波微波( (频率为频率为300300MHz-300kMHz)MHz-300kMHz)照射产生的照射产生的热能热能杀灭杀灭微生物和芽孢微生物和芽孢的方法。的方法。 适用范围：适用范围：液体和固体物料，对固体物料具有干燥作用。液体和固体物料，对

36、固体物料具有干燥作用。 特点：特点：微波能穿透到介质和物料的微波能穿透到介质和物料的深部深部，表里加热一致，表里加热一致，且具有低温、常压、高效、快速且具有低温、常压、高效、快速(2-3(2-3min)min)、低能耗、无污低能耗、无污染、易操作、易维护，产品保质期长染、易操作、易维护，产品保质期长( (可延长可延长1/31/3以上以上) )等。等。辐射灭菌法辐射灭菌法 定义：定义：放射性同位素放射性同位素 ( (6060CoCo和和137137Cs)Cs)放射的放射的 射线射线杀灭微生杀灭微生物和芽孢的方法。物和芽孢的方法。适用范围：适用范围：适合于适合于热敏热敏物料和制剂，常用于维生素、抗

37、物料和制剂，常用于维生素、抗生素、激素、生物制品、中药材和中药制剂、医疗器械、生素、激素、生物制品、中药材和中药制剂、医疗器械、药用包装材料及药用高分子材料等物质的灭菌。药用包装材料及药用高分子材料等物质的灭菌。特点：特点：不升高产品温度，穿透力强，灭菌效率高，但设不升高产品温度，穿透力强，灭菌效率高，但设备贵，有潜在危险性，备贵，有潜在危险性， 对某些药物对某些药物( (特别是溶液型特别是溶液型) ) 可可能产生能产生药效降低药效降低或产生毒性物质和发热物质等。或产生毒性物质和发热物质等。分类分类灭菌法灭菌法物理灭菌法物理灭菌法化学灭菌法化学灭菌法无菌操作法无菌操作法干热灭菌法（干热灭菌法（

38、2种）种）湿热灭菌法（湿热灭菌法（4种）种）过滤灭菌法过滤灭菌法射线灭菌法（射线灭菌法（3种）种）气体灭菌法气体灭菌法药液灭菌法药液灭菌法定义：定义：化学药品直接作用于微生物而将其杀灭的方法，同化学药品直接作用于微生物而将其杀灭的方法，同时不应损害制品的质量。时不应损害制品的质量。杀菌剂：杀菌剂：气体杀菌剂和液体杀菌剂。气体杀菌剂和液体杀菌剂。不能杀死芽孢不能杀死芽孢，仅对，仅对繁殖体有效。繁殖体有效。影响杀菌效果的因素：影响杀菌效果的因素：微生物的种类与数量、物体表面状微生物的种类与数量、物体表面状况、杀菌剂的性质。况、杀菌剂的性质。化学杀菌的目的：化学杀菌的目的：减少微生物的数目，控制无菌

39、状态。减少微生物的数目，控制无菌状态。常用的方法：常用的方法：（1 1）气体灭菌法）气体灭菌法和和（2 2）药液灭菌法。）药液灭菌法。（二）化学灭菌法（二）化学灭菌法气体灭菌法气体灭菌法 定义：定义：气态杀菌剂进行灭菌的方法。气态杀菌剂进行灭菌的方法。适用范围：适用范围：适合适合环境消毒环境消毒以及以及不耐加热灭菌不耐加热灭菌的医用器的医用器具、设备和设施等的消毒，粉末注射剂。应注意杀菌具、设备和设施等的消毒，粉末注射剂。应注意杀菌剂的残留量和与药物的相互作用。剂的残留量和与药物的相互作用。品种：品种：环氧乙烷、甲醛、过氧乙酸等环氧乙烷、甲醛、过氧乙酸等环氧乙烷环氧乙烷 性质：性质：沸点沸点1

40、0.910.9，室温下为气体，水中溶解度为，室温下为气体，水中溶解度为1ml1ml水中可溶水中可溶195ml(20195ml(20，760mmHg)760mmHg)，易穿透塑料，纸板及易穿透塑料，纸板及固体粉末固体粉末。暴露于空气中，环氧乙烷就可从这些物质消。暴露于空气中，环氧乙烷就可从这些物质消散，对大多数固体呈惰性。散，对大多数固体呈惰性。杀菌作用：杀菌作用：由于其为烷化剂的性质，使菌体蛋白的由于其为烷化剂的性质，使菌体蛋白的- -COOHCOOH、-NH-NH2 2、-SH-SH、-OH-OH的的H H，被，被-CH-CH2 2-CH-CH2 2-OH-OH所取代，从所取代，从而变性失活

41、。而变性失活。适用范围：适用范围：可用于塑料容器、对热敏感的固体药物、纸或可用于塑料容器、对热敏感的固体药物、纸或塑料包装的药物、橡胶制品、注射筒、注射针头、衣着敷塑料包装的药物、橡胶制品、注射筒、注射针头、衣着敷料及器械等的灭菌。但是，一些塑料、皮革及橡胶与环氧料及器械等的灭菌。但是，一些塑料、皮革及橡胶与环氧乙烷有强亲和力，故需长达乙烷有强亲和力，故需长达12-24h12-24h通空气驱除。通空气驱除。环氧乙烷具环氧乙烷具可燃可爆可燃可爆，用时需用惰性气体二氧化碳或氟利，用时需用惰性气体二氧化碳或氟利昂稀释。昂稀释。 环氧乙烷的环氧乙烷的吸入毒性吸入毒性较大，与氨相近，但无氨样的剌激嗅较大

42、，与氨相近，但无氨样的剌激嗅味，损害皮肤及眼粘膜，可产生水泡或结膜炎，故应用时味，损害皮肤及眼粘膜，可产生水泡或结膜炎，故应用时要注意。要注意。甲醛甲醛 加热熏蒸甲醛溶液，每立方米空间用加热熏蒸甲醛溶液，每立方米空间用4040甲醛溶液甲醛溶液30 30 mlml，室内相对湿度宜高，以增进甲醛气体灭菌效果。，室内相对湿度宜高，以增进甲醛气体灭菌效果。 丙二醇丙二醇 丙二醇用于室内空气灭菌具有不挥发性和无引火性等特丙二醇用于室内空气灭菌具有不挥发性和无引火性等特点，灭菌用量为点，灭菌用量为1ml/m1ml/m3 3。乳酸乳酸 灭菌用量为灭菌用量为2ml/m2ml/m3 3，杀菌力不及甲醛，但对人无

43、害。，杀菌力不及甲醛，但对人无害。 过氧乙酸过氧乙酸 过氧乙酸用于车间灭菌，效力比相同浓度的甲醛大两倍过氧乙酸用于车间灭菌，效力比相同浓度的甲醛大两倍半，对粘膜，眼部无剌激性，对木制品、金属制品、医半，对粘膜，眼部无剌激性，对木制品、金属制品、医疗器械均无影响。疗器械均无影响。药液灭菌法药液灭菌法定义：定义：杀菌剂杀菌剂溶液溶液进行灭菌的方法。进行灭菌的方法。适用范围：适用范围：常应用于其他灭菌法的辅助措施，适合于常应用于其他灭菌法的辅助措施，适合于皮肤、无菌器具和设备的消毒。皮肤、无菌器具和设备的消毒。常用品种：常用品种：0.10.1-0.2-0.2新洁尔灭溶液、新洁尔灭溶液、7575乙醇、

44、乙醇、1 1聚维酮碘溶液、酚或煤酚皂溶液等。聚维酮碘溶液、酚或煤酚皂溶液等。 使用注意：使用注意：由于化学杀菌剂常施用于物体表面，也要由于化学杀菌剂常施用于物体表面，也要注意其浓度不要过高，以防其化学腐蚀作用。注意其浓度不要过高，以防其化学腐蚀作用。 巴氏灭菌法？巴氏灭菌法？定义定义：无菌条件无菌条件下进行的一种操作方法，下进行的一种操作方法，该方法在技术该方法在技术上并上并非灭菌操作非灭菌操作。 适用范围：适用范围：适用于一些不耐热药物的注射剂、眼用制剂、适用于一些不耐热药物的注射剂、眼用制剂、皮试液、海绵剂和创伤制剂的制备。皮试液、海绵剂和创伤制剂的制备。避箘操作：避箘操作：尽量避免微生物

45、污染。尽量避免微生物污染。（三）无菌操作法（三）无菌操作法无菌操作室的灭菌无菌操作室的灭菌 无菌操作室的灭菌采用无菌操作室的灭菌采用 灭菌灭菌和和除菌除菌相结合的方式相结合的方式流动空气：流动空气：采用采用过滤介质过滤介质除菌法除菌法静止环境空气：静止环境空气：采用采用气体和液体气体和液体灭菌法、灭菌法、紫外线空气紫外线空气灭菌法。灭菌法。 甲醛溶液加热熏蒸法甲醛溶液加热熏蒸法 气体灭菌法之一气体灭菌法之一 紫外线灭菌法紫外线灭菌法 用于间歇和连续操作过程。用于间歇和连续操作过程。 液体灭菌法液体灭菌法 辅助灭菌方法辅助灭菌方法 臭氧灭菌法臭氧灭菌法 GMPGMP验证指南验证指南推荐的方法。推

46、荐的方法。无菌操作场所无菌操作场所无菌操作室层流洁净工作台无菌操作柜无菌操作室层流洁净工作台无菌操作柜无菌操作室要求达到无菌操作室要求达到100100级级空气净化的条件。空气净化的条件。无菌操作所用的一切用具、材料以及环境均需按前述灭无菌操作所用的一切用具、材料以及环境均需按前述灭菌法灭菌。菌法灭菌。操作人员进入操作之前要洗澡并换上已经灭菌的工作服操作人员进入操作之前要洗澡并换上已经灭菌的工作服和清洁的鞋子，不使头发等露出来，以免造成污染机会。和清洁的鞋子，不使头发等露出来，以免造成污染机会。无菌检查无菌检查药剂或药品经灭菌或无菌操作法处理后，需经药剂或药品经灭菌或无菌操作法处理后，需经无菌检

47、无菌检验验证实已无微生物生存，方能使用。证实已无微生物生存，方能使用。 灭菌效果，应以杀死灭菌效果，应以杀死芽孢芽孢为标准。为标准。 法定的无菌检查法：法定的无菌检查法：包括试管接种法和薄膜过滤法。包括试管接种法和薄膜过滤法。 （四）灭菌效力的检查方法与（四）灭菌效力的检查方法与F0值值1. D1. D值值 D D值是指在一定温度下，杀灭微生物数值是指在一定温度下，杀灭微生物数90%90%所需的时间。所需的时间。微生物死亡速度属一级过程，即（研究结果）：微生物死亡速度属一级过程，即（研究结果）： 当当lgNlgN0 0-lgN-lgNt tlg100-lg10lg100-lg101 1时，时，

48、 D=t/(lg100-lg10)=tD=t/(lg100-lg10)=t dN/dt = -kNdN/dt = -kN lgN lgNt t= lgN= lgN0 0-(kt/2.303)-(kt/2.303) 斜率斜率 = -k/2.303= -k/2.303 令斜率的负倒数为令斜率的负倒数为 D D 值值 D=2.303/k=t/D=2.303/k=t/（lgNlgN0 0-lgN-lgNt t） N N0 0/N/Nt t=10/1=10/1时，时，D=tD=tD D值因微生物的值因微生物的种类种类、环境环境、灭菌温度灭菌温度不同而异不同而异影响因素影响因素 不同微生物具有不同不同微生

49、物具有不同D D值。值。D D值越小，证明微生物抗热性越值越小，证明微生物抗热性越弱。弱。曝热时间较短即可杀灭九成。曝热时间较短即可杀灭九成。 同一微生物，曝热温度同一微生物，曝热温度T T越高，越高，D D值越低值越低D1D3D2121lgN1251150t1TT，lgNlgN下降得快，下降得快，D D小；小； T T，lgNlgN下降得慢，下降得慢，D D大大 环境条件（介质）环境条件（介质） 介质对介质对D D值的影响值的影响嗜热脂肪嗜热脂肪杆菌杆菌T介质介质D（min）121葡萄糖2.4121 葡萄糖乳酸林格氏液2.1121注射用水3.02. Z2. Z值值Z Z值：值：为为D D值降

50、低一个对数值所需值降低一个对数值所需升高升高的温度数，即灭菌时的温度数，即灭菌时间减少到原来的间减少到原来的1/101/10时所需升高的温度或在相同灭菌时间时所需升高的温度或在相同灭菌时间内，杀灭内，杀灭90%90%的微生物所需要提高的的微生物所需要提高的温度温度。 Z=(TZ=(T2 2-T-T1 1)/(lgD)/(lgD2 2-lgD-lgD1 1) )即即D D2 2/D/D1 1=10=10(T2-T1)/Z(T2-T1)/Z 当当lgDlgD2 2-lgD-lgD1 11 1时，即时，即 Z ZT T2 2-T-T1 1在不同温度下对特定的微生物在特定介质或环境中求得在不同温度下对特定的微生物在特定介质或环境中求得D D值值后，再计算后，再计算Z Z值。值。Z Z值通常在值通常在湿热灭菌湿热灭菌时取时取1010，在，在干热灭菌干热灭菌时取时取2020。Z值反应了微生物对值反应了微生物对热热的敏感程度。的敏感程度。Z Z值越小，斜率越大，值越小，斜率越大，TDTD值变化大值变化大Z Z值越大，斜率越小，值越大，斜率越小，TDTD值变化小值变化小即即Z Z值越大，此微生物对温度变化的敏感性越弱，企值越大，此微生物对温度变化的敏感性越弱，企图通过升高温度来加速杀灭微生物的效果就不明显。图通过升高温度来加速杀