实验二、重金属污染对植物叶绿素含量

1、实实 验验 二二重金属污染对植物叶绿素含量的影响重金属污染对植物叶绿素含量的影响实验目的实验目的l掌握叶绿素含量的测定掌握叶绿素含量的测定l了解重金属污染对叶绿素含量的影响了解重金属污染对叶绿素含量的影响l了解在重金属胁迫条件下的变化趋势了解在重金属胁迫条件下的变化趋势实验原理实验原理l植物叶绿素分叶绿素植物叶绿素分叶绿素a和叶绿素和叶绿素b，其含量，其含量的高低是反映植物光合作用能力的一个重的高低是反映植物光合作用能力的一个重要指标要指标l叶绿素含量的变化可以反映污染对植物光叶绿素含量的变化可以反映污染对植物光合作用的影响合作用的影响实验仪器与材料实验仪器与材料l仪器：研钵、滤纸、漏斗、仪器

2、：研钵、滤纸、漏斗、5 mL移液管、分移液管、分光光度计等光光度计等l材料：小麦材料：小麦l试剂：丙酮（试剂：丙酮（80%） 、石英砂、氯化铬、石英砂、氯化铬（Cd 2+）系列溶液（）系列溶液（0、5、10、25、50mg/L）实验步骤实验步骤1：实验材料培养：实验材料培养将大小比例均匀的种子用蒸馏水浸泡、吸将大小比例均匀的种子用蒸馏水浸泡、吸胀后，移入铺有胀后，移入铺有2层滤纸的培养皿中，置层滤纸的培养皿中，置入光照培养箱中培养（入光照培养箱中培养（22 25）实验步骤实验步骤2：分组染毒处理：分组染毒处理l在种子长出在种子长出2片真叶后，分别用片真叶后，分别用5个不同个不同浓度的重金属浓度

3、的重金属氯化铬氯化铬溶液处理溶液处理l每组每组3个平行处理个平行处理实验步骤实验步骤2：分组染毒处理：分组染毒处理l每天用蒸馏水冲洗每天用蒸馏水冲洗1次，再用原组重金次，再用原组重金属溶液培养属溶液培养l培养培养1周后，即可用周后，即可用实验步骤实验步骤3：叶片中叶绿素提取：叶片中叶绿素提取l取新鲜植物叶片取新鲜植物叶片0.1g (5株等长植物株等长植物)l剪碎，放入研钵中，加入剪碎，放入研钵中，加入80%丙酮丙酮2.5mL和和少量少量(3 4粒）石英砂研成糊状，再加粒）石英砂研成糊状，再加3mL 80%的丙酮的丙酮,继续研磨至组织变白继续研磨至组织变白实验步骤实验步骤3：叶片中叶绿素提取：叶

4、片中叶绿素提取l在暗处静置在暗处静置3 5min后，用一层滤后，用一层滤纸过滤到纸过滤到30mL烧杯中烧杯中l用滴管吸取用滴管吸取80%丙酮将研钵和滤纸丙酮将研钵和滤纸周围洗脱色素周围洗脱色素l待滤纸和残渣全部变白后，用待滤纸和残渣全部变白后，用80%丙酮定容至丙酮定容至20mL实验步骤实验步骤4：测定吸光度：测定吸光度l先用少量色素提取液清洗比色皿先用少量色素提取液清洗比色皿2 3次，次，然后将色素提取液倒入比色皿中然后将色素提取液倒入比色皿中l80%丙酮作空白对照丙酮作空白对照l在波长分别为在波长分别为663nm、645nm条件下测定条件下测定提取液的吸光度。如果浓度较高，适当稀提取液的吸

5、光度。如果浓度较高，适当稀释后比色定量。释后比色定量。计算叶绿素含量计算叶绿素含量 叶绿素叶绿素a和和b及总叶绿素的浓度分别为：及总叶绿素的浓度分别为：Ca、Cb和和CT，可根据下式计算：，可根据下式计算： Ca=12.7A663-2.69A645 Cb=22.9A645-4.68A663 CT=8.02A663+20.21A645式中：式中：A663、A645分别为提取液在波长分别为提取液在波长663nm、645nm下的下的吸光度。吸光度。数据处理与实验结果分析：数据处理与实验结果分析： 每个处理组的平行测定结果用平均数每个处理组的平行测定结果用平均数标准误（标准误（ SE）表示，用）表示，用One