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文档简介

1、TTC法一、实验目的一、实验目的学习掌握学习掌握TTC法快速测定种子活力的原理和方法。法快速测定种子活力的原理和方法。二、实验二、实验原理原理 有活力种胚有活力种胚中的脱氢酶可以将中的脱氢酶可以将2,3,5氯化三苯氯化三苯基四氮唑基四氮唑 (TTC)还原成不溶性的还原成不溶性的红色红色三苯基甲三苯基甲(TTF),),如果种胚死亡如果种胚死亡或或种胚生活力衰退种胚生活力衰退,则则不不能染色或能染色或染色较浅染色较浅,因此因此,可以根据种胚染色的部可以根据种胚染色的部位或染色的深浅程度来鉴定种子的生活力。位或染色的深浅程度来鉴定种子的生活力。三、实验材料三、实验材料四、实验步骤四、实验步骤1. 将

2、将小麦小麦种子用温水种子用温水(3035)浸泡浸泡26h,使种子充分使种子充分吸胀。吸胀。2. 随机取种子随机取种子100粒粒,沿种胚中央准确切开沿种胚中央准确切开,取其一半取其一半备备用。用。3. 将准备好的种子将准备好的种子放入培养皿,放入培养皿,浸于浸于TTC试剂中试剂中,于恒于恒温箱温箱(3035)中保温中保温30min。4. 倒出倒出TTC溶液溶液,再用清水将种子冲洗再用清水将种子冲洗12次次,观察种观察种胚被染色的情况胚被染色的情况。 当当TTC溶液渗入种胚的活细胞内,并作为氢受体被脱氢辅溶液渗入种胚的活细胞内,并作为氢受体被脱氢辅酶(酶(NADH或或NADPH)还原时,可产生红色

3、的三苯甲腙)还原时,可产生红色的三苯甲腙(TTF),胚染成),胚染成红色红色。 如果种胚死亡则如果种胚死亡则不能染色不能染色,种胚生命力衰退或部分丧失生,种胚生命力衰退或部分丧失生活力则活力则染色较浅或局部被染色。染色较浅或局部被染色。因此,可以根据种胚染色的部位或染色的深浅程度来鉴定因此,可以根据种胚染色的部位或染色的深浅程度来鉴定种子的生命力。种子的生命力。 五、注意事项五、注意事项 1. TTC溶液最好现配现用,如需贮藏则需贮存于棕色溶液最好现配现用,如需贮藏则需贮存于棕色瓶中,放在阴凉黑暗处,如溶液变红则不可再用。瓶中,放在阴凉黑暗处,如溶液变红则不可再用。2. TTC反应温度一般以反

4、应温度一般以3035为宜。为宜。3. TTC反应结束,从黑暗处取出后立即观察,因光下反应结束,从黑暗处取出后立即观察,因光下久放久放TTC本身会变色。本身会变色。4. 显色时要使漂浮的种子全部浸入试剂中。显色时要使漂浮的种子全部浸入试剂中。一、种子净度的概念:一、种子净度的概念: 种子净度是指种子清洁干净的程度。种子净度是指种子清洁干净的程度。 具具体讲是:样品中除去杂质和其他植物种子后,留下的本作物的体讲是:样品中除去杂质和其他植物种子后,留下的本作物的净种子的重量占分析样品总重量的百分率。净种子的重量占分析样品总重量的百分率。 种子净度是衡量种子净度是衡量种子质量的一项重要指标。种子质量的

5、一项重要指标。二、净度分析的目的:二、净度分析的目的: 1、通过对样品中净种子、其他植物种子、杂质的分析,、通过对样品中净种子、其他植物种子、杂质的分析,推断该种子批组成情况,为种子精选、质量分级提供依据。推断该种子批组成情况,为种子精选、质量分级提供依据。 (净度是非常重要的一个指标,影响商品性,影响发芽率。玉(净度是非常重要的一个指标,影响商品性,影响发芽率。玉米、小麦等为米、小麦等为99.0,达不到需精选),达不到需精选) 2、分离出的净种子为种子质量的进一步分析提供样品。、分离出的净种子为种子质量的进一步分析提供样品。 (如发芽率测定、纯度测定都需要净种子)(如发芽率测定、纯度测定都需

6、要净种子) 三、净度分析的意义(了解) 1、(种子净度低)影响种子的安全贮藏。 如种子堆内细小的泥沙等杂质不利于种子的通风换气。茎秆、稃壳吸 湿性强,容易发热。破碎粒多,易被仓库害虫利用、易吸湿。 2、净度低影响作物的生长发育和产量。 杂草种子、其他植物种子与本作物争肥水,影响作物的生长发育。 3、净度低含有毒杂草种子,影响人畜健康。 如毒麦:混入小麦达4,即可造成人中毒。 因此,净度分析是非常必要的。1、取样与试样称重、取样与试样称重 采用四分法进行小麦送验样品的分取。试样的分取是从采用四分法进行小麦送验样品的分取。试样的分取是从500g左左右送验样品中,用直尺分取规定重量的试样两份。第一份

7、试样右送验样品中,用直尺分取规定重量的试样两份。第一份试样取出后,将剩下部分重新混匀再分取第二份试样。当试样样品取出后,将剩下部分重新混匀再分取第二份试样。当试样样品分至接近规定的最低重量时即可称重。要求精确的小数位数是分至接近规定的最低重量时即可称重。要求精确的小数位数是一位小数。一位小数。 .2、试样分离、试样分离 试样称重后,将样品倒在分析台上,利用镊子按顺序逐粒观察试样称重后,将样品倒在分析台上,利用镊子按顺序逐粒观察鉴定,将试样分离成净种子、其他植物种子和杂质三种成分,鉴定,将试样分离成净种子、其他植物种子和杂质三种成分,分别放入相应的容器内,并编号。分别放入相应的容器内,并编号。3

8、、称重、称重 将分离后的各成分分别称重,以将分离后的各成分分别称重,以g表示,并做好记录。表示,并做好记录。 1.净种子重量净种子重量= g 2.其他植物种子重量其他植物种子重量= g 3.杂质重量杂质重量= g4、计算、计算 1.核查各种成分重量之和与样品原来的重量之差是否超过核查各种成分重量之和与样品原来的重量之差是否超过5%。 各种成分重量之和各种成分重量之和= g 增失差(增失差(%)=(样品原来的重量(样品原来的重量各种成分重量之和)各种成分重量之和)/样品原来的重量样品原来的重量100% 根据分离后各成分的重量,分别计算其百分率。根据分离后各成分的重量,分别计算其百分率。 (1)种

9、子净度()种子净度(%)=(净种子重量(净种子重量/各种成分重量之和)各种成分重量之和)100% (2)其他植物种子百分率()其他植物种子百分率(%)=(其他植物种子重量(其他植物种子重量/各种成分重量之和)各种成分重量之和)100% (3)杂质百分率()杂质百分率(%)=(杂质重量(杂质重量/各种成分重量之和)各种成分重量之和)100%千 粒 重千粒重是以克表示的一千粒种子的重量,千粒重是以克表示的一千粒种子的重量,它是体现种子大小与饱满程度的一项指标,它是体现种子大小与饱满程度的一项指标,是检验种子质量和作物考种的内容,也是是检验种子质量和作物考种的内容,也是田间预测产量时的重要依据。一般

10、测定小田间预测产量时的重要依据。一般测定小粒种子千粒重时是随机数出三个一千粒种粒种子千粒重时是随机数出三个一千粒种子,分别称重,求其平均值。大粒种子可子,分别称重,求其平均值。大粒种子可取三个一百粒分别称重,取其平均值,称取三个一百粒分别称重,取其平均值,称百粒重。百粒重。千粒重测定法:千粒重测定法: 方法方法:从除去杂质的净粮中,用分样器或四公法分:从除去杂质的净粮中,用分样器或四公法分样,将样品分至接近规定的重量,准确称重样,将样品分至接近规定的重量,准确称重(W),然后,然后计数,得粒数计数,得粒数m。 方法方法:从除去杂质的净粮中,不加挑选地数出两组:从除去杂质的净粮中,不加挑选地数出

11、两组试样,大粒粮每组试样,大粒粮每组500粒,中、小粒粮每组粒,中、小粒粮每组1000粒,粒,按组分别称重按组分别称重(准确至准确至0.1g)。 以上二种方法可任意选用,但方法以上二种方法可任意选用,但方法中应剔除不完整粒。中应剔除不完整粒。 自然水分千粒重按公式自然水分千粒重按公式(1)计算:计算: W 千粒重千粒重(g/1000粒粒) = 1000 .(1) m 标准水分千粒重按公式标准水分千粒重按公式(2)计算:计算: G(100 - M) 千粒重千粒重(g/1000粒粒) = .(2) 100 - M 干态千粒重按公式干态千粒重按公式(3)计算:计算: G (100-M) 干态千粒重干态千粒重(g/1000粒粒) = .(3) 100 式中:式中:W-实测试样重量,实测试样重量,g; m-实测试样粒数;实测试

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