实验12 透射比浊法测定C反应蛋白

1、实验 12 透射比浊法测定C反应蛋白 1实验目的 掌握：透射比浊法测定C反应蛋白（CRP）原理。熟悉：透射比浊法测定CRP试剂成分。2实验原理 光线通过浑浊介质溶液时，一部分被混浊颗粒吸收，吸收的多少与混浊颗粒的量成正比，这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。 免疫透射比浊法是利用抗原和抗体的特异性结合形成复合物，通过测定复合物形成量的多少对抗原或抗体进行定量的方法。 使用抗CRP抗体和样品中的CRP进行抗原-抗体反应。反应完成后，用透射比浊法检测吸光度的变化反映CRP浓度。3试剂与器材 1试剂（R1） 100 mmol/L Tris缓冲液（pH7.5）； 聚乙二醇； 0.95g/L叠氮钠。2

2、试剂（R2） 100 mmol/L Tris缓冲液（pH8.0）； 羊抗人CRP抗血清； 0.95g/L叠氮钠。 3仪器 自动生化分析仪。4操作步骤 按表3-5操作加入物(l)空白管（B）测定管（U）血清标本15生理盐水15试剂 250250混合， 375 min，在波长340nm，生理盐水调零，读各管吸光度(A1B，A1U)试剂5050混合， 375 min，在波长340nm，生理盐水调零，读各管吸光度(A2B，A2U)表3-5 免疫透射比浊法测定C反应蛋白操作步骤5计算 式中265/315是进行体积校正参数，265为加入试剂前体积，315为加入试剂后体积。 按照试剂配套标准品使用要求，用5

3、个不同水平的标准液，并以生理盐水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型如Logit-Log，拟合成校准曲线。校准仪器后，仪器直接报告检测结果。6参考范围 新生儿：血清CRP0.6mg/L；出生后l周至l个月婴儿：血清CRP1.6mg/L；孕妇：血清CRP47mg/L；成人和儿童：血清CRP（0.0688.2）mg/L。7临床意义 CRP是机体对炎性刺激或组织损伤发生的急性时相反应时出现的一种急性时相蛋白。1各种细菌感染 急性化脓性炎症、肺炎、心内膜炎、尿路感染等，风湿热，传染性单核细胞性增多症等炎症性疾病，血清CRP升高。2组织损伤 心肌梗塞、外伤、烧伤等，恶性肿瘤，风湿

4、性疾病，肉芽肿，何杰金氏病，肾移植排异反应等疾病。 8临床意义 3鉴别诊断 CRP测定在鉴别有明显的炎症或组织损伤的疾病与无炎症或炎症极轻的疾病、鉴别细菌性或病毒性炎症时很有价值。4评估病情及疗效 CRP升高标志病情发展，由升高变为下降，标志病情趋于稳定，是评价风湿热等疾病病情活动性的最佳参数之一，也是某些疾病治疗有无效果的参考指标。5用于器官移植排异反应的检测 排异反应时血清CRP水平持续升高。 9注意事项1CRP参考值范围随测定方法、试剂不同而异，请参照不同试剂盒说明书。2不同的厂家，不同批号的试剂不能混用。10评价 1测定CRP的方法：灵敏度较低的免疫扩散法、火箭电泳法、胶乳凝集试验；高

5、灵敏度、高精密度的放射免疫、酶免疫、免疫比浊等定量试验；其他方法如ELISA、免疫发光法和化学发光法，虽然灵敏度和精确度都较高，但其成本也较高。 免疫比浊法具有试剂稳定、操作简便、流程短、重复性和精确性好的优势，适合CRP定量测定。11评价 2前带限制 CRP浓度2 000mg/L时无前带现象。抗原与抗体反应时如果抗原抗体比例适当可形成大的抗原抗体复合物，反应体系出现浑浊；当待测物质（抗原）含量过高时，抗原与抗体的比例不适合，所形成的结合物少且小，反应体系不出现浑浊称为前带现象。3特异性/干扰 当样品中Vc浓度1 704mol/L、胆红素浓度684mol/L、血红蛋白浓度5g/L、甘油三酯浓度22.6mmol/L时无干扰。12评价 4灵敏度/检测限 本试剂的检测限为2mg/L。5超敏C反应蛋白（Hs-CRP） 是根据测定方法更敏感而命名。临床测定CRP的方法检测线性一般为2 mg/L 250mg/L，缺乏较高的灵敏性。胶乳增强的免疫比浊法等技术大大提高了分析的灵敏度（检测低限为0.005 mg/L 0.1mg/L），可检测出低水平（0.1mg/L10mg/L）的CRP浓度。Hs-CRP可作为一种急性炎症的标志物，而且可区别在