反相高效液相色谱法对茯苓饮片指纹图谱的研究

1、反相高效液相色谱法对茯苓饮片指纹图谱的研究【摘要】目的建立茯苓饮片的指纹图谱。方法采用高效液相色谱法测定，乙腈-0.05%磷酸水，梯度洗脱，流速：1.0l/in，柱温：30，紫外检测波长：242n。结果茯苓饮片中有11个共有峰被确定为指纹峰，采用“hrafingerV0.9beta软件评价12批茯苓饮片指纹图谱的相似性，相关系数法大于0.8403，夹角余弦法大于0.9068。结论该方法简便，稳定，精细度高，重复性好，可用于茯苓饮片的鉴别，可以有效控制饮片质量。【关键词】茯苓饮片；高效液相色谱法；指纹图谱Abstrat：bjetiveTestablishHPLfingerprintfPriash

2、erbs.ethdsHPLasndutedandthebilephasensistedfaetnitrile-0.05%phsphriaid-ateraselutedingradientelutin.Theflrateas1.0l/in.Thelunteperatureasat30andthedetetinavelengthas242n.ResultsTheelevennpeaksfPriasherbseredeterinedasfingerprintpeaks.SiilarityasanalyzedbyhrafingerV0.9betafingerprintanalysissftare.Th

3、eresultsshedthatsiilarityasrethan84.03%byrrelatineffiientethdandsiilarityasrethan90.68%bysineethd.nlusinThisethdissiple,stableandreprduible.ItanbeusedtidentifyandeffetivelyntrlqualityfPriasherbs.Keyrds：Priasherbs；HPL；Fingerprint茯苓为多孔菌科真菌茯苓Prias(Sh.)lf的枯燥菌核1，具有利水渗湿、健脾安神之成效。主要用于小便不利、水肿；脾虚腹泻、日久不止；痰饮停溜、

4、食欲不振；惊悸、失眠等症。对于茯苓的指纹图谱研究，段启等2曾对不同产地茯苓药材进展过高效液相色谱HPL指纹图谱研究，而对于茯苓饮片尤其是经过标准化炮制加工的饮片HPL指纹图谱研究未见相关报道。因此，本实验对标准化炮制工艺加工的茯苓饮片进展了指纹图谱研究，以期对其质量控制和评价提供有效方法3。1仪器与试药1.1仪器L-20AT高效液相色谱仪日本岛津；大连伊利特Hypersil-DS(4.6250)高效液相色谱柱；工作站：B-102；检测器：SPD-20A；TP600超声波提取器北京天鹏电子新技术；BS210S型电子天平北京塞多利斯公司。1.2试剂乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯，水为双蒸水经0.45微

5、孔滤膜滤过，其他试剂均为分析纯。1.3药材茯苓药材分别采集于宛西制药GAP基地、河南商城等地共12批样品来源及编号见表1。按照本课题组研究的标准化炮制工艺进展浸泡、润蒸并切制成不同规格。表1样品来源及编号略2方法与结果2.1色谱条件大连伊利特Hypersil-DS(4.6250)高效液相色谱柱；检测器：SPD-20A；工作站：B-102；流动相：乙腈-0.05%磷酸水，梯度洗脱见表2；流速：1.0l/in；柱温：30；检测波长：242n。表2流动相梯度洗脱程序略2.2供试品溶液的制备取茯苓饮片，粉碎，过40目筛。取粉末约1.0g，精细称定，置于具塞锥形瓶中，加95%乙醇25l，超声提取20in

6、，过滤，残渣加95%乙醇重复提取两次，合并滤液并挥干乙醇，用色谱甲醇定容于10l容量瓶中，临用前用0.45微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。2.3方法学考察2.3.1精细度实验精细称取编号3药材，制备供试品溶液，连续进样5次，共有峰的相对保存时间RSD0.452%，相对峰面积RSD2.084%，结果说明仪器精细度良好。2.3.2稳定性实验精细称取编号3药材，制备供试品溶液，24h内连续进样5次，共有峰的相对保存时间RSD0.636%，相对峰面积RSD1.166%，结果说明常温下茯苓药材的供试品溶液24h内稳定性良好。2.3.3重复性实验精细称取编号3药材5份，制备供试品溶液，连续进样，共有峰的相对

7、保存时间RSD0.454%，相对峰面积RSD2.122%，结果说明重复性良好。转贴于论文联盟.ll.2.4茯苓饮片HPL指纹图谱及技术参数2.4.1指纹图谱选择及特征峰的标定4测定12批茯苓饮片60in内指纹图谱，获得11个共有峰，由指纹图谱可以看出10号峰峰面积积分百分比拟大，别离度及峰形较好，因此选择10号峰作为参照峰，标号为S，其他特征峰依次标号为1，2，3，S，11。根据结果采用“hrafingerV0.9beta软件建立了茯苓饮片的色谱指纹图谱共有形式和茯苓饮片色谱叠加图结果见图12。2.4.2茯苓饮片指纹图谱特征峰相对保存时间和相对峰面积采用12批茯苓饮片的指纹图谱，选用10号峰作

8、为参照峰，选取12批样品的共有峰共11个，计算相对保存时间和相对峰面积。结果见表34。表312批茯苓饮片共有峰相对保存时间，表412批茯苓饮片共有峰相对峰面积略。2.4.3指纹图谱相似度的计算采用“hrafingerV0.9beta软件对12批茯苓饮片指纹图谱进展处理得到茯苓饮片相似度分析结果。结果见表5。表5茯苓饮片指纹图谱相似度分析结果略3讨论实验中考察了超声提取的时间和溶剂，用醋酸乙酯、丙酮作为溶剂所得提取液的指纹图谱上特征峰数目较少，且峰形较差；用正丁醇、95%乙醇和甲醇作为溶剂所得提取液的指纹图谱无明显的差异，特征峰数目较多，且峰形较好，但考虑到甲醇有较大的毒性，正丁醇由于粘度大，过

9、滤困难，应选用95%乙醇作为提取溶剂。超声不同的时间所得供试品溶液的指纹图谱无明显差异，但超声20in提取供试品溶液所得的指纹图谱特征峰的峰面积之和大于超声30in，超声40in的峰面积之和，同时考虑到提取时间较短，应选用超声时间为20in。从12批茯苓饮片的分析结果来看，样本整体相似度较高，其中样本11的相似度偏低，其主要原因可能是样品11来自于新疆茯苓药材，地理位置、气候、土壤等因素的差异造成茯苓药材成分的差异，从而导致炮制加工的茯苓饮片存在差异，但是差异不是很显著相关系数法大于0.8403，夹角余弦法大于0.9068。本研究根据12批茯苓饮片检测结果，选择11个共有峰标定茯苓饮片的指纹图谱，具有良好的系统性、特征性和重现性。经过相似度评价，所选择的12批茯苓饮片的指纹图谱相似度较高，具有良好的相关性。该方法可靠、简便，可作为茯苓饮片质量控制的参考方法。【参考文献】1国家药典委员会.中国药典，部S.北京:化学工业出版社，2022：166.2段启，王跃生，王少军，等.不同产地茯苓药材高