复方胆通片高效液相色谱指纹谱的研究

1、复方胆通片高效液相色谱指纹谱的研究【关键词】复方胆通片；,高效液相色谱；,色谱指纹谱摘要：目的建立复方胆通片的高效液相色谱HPL指纹谱，对不同厂家消费的复方胆通片所含的组分以绿原酸为参照进展综合评价，为复方胆通片的质量鉴定提供根据。方法采用HPL法，将获得的色谱数据转化为指纹谱，据此对复方胆通片的质量进展分析鉴别。结果确定了12强峰和21个色谱峰为复方胆通片的特征指纹峰。结论不同厂家消费的复方胆通片中绿原酸的含量相差较大。该方法专属性强、重现性好，可为复方胆通片的质量控制提供根据。关键词：复方胆通片；高效液相色谱；色谱指纹谱StudynHPLFingerprinthratgrafFufangd

2、antngTabletsAbstrat：bjetiveTestablishtheHPLfingerprintspetrufFufangdantngtabletsfrdifferentareas.ethdsHPLresultsfFufangdantngTabletsereusedtevaluateanddistinguishareasFufangdantngTabletsfrdifferentfatry.ResultsThereare21ajrfeaturesfHPLfingerprintand12strngpeaksftheFufangdantngtablets.nlusinThereared

3、ifferentareasfthEirhlrgeniaidquantityntained.Thisethdisgdatitsspeializatinandrestratin,anditanprvidesientifireferenetntrllingthequalityfFufangdantngTabletsfrdifferentareas.Keyrds：FufangdantngTablets；HPL；Fingerprintspetru复方胆通片是临床常用的治疗急慢性胆囊炎、胆管炎、胆囊、胆管结石并感染、胆囊术后综合征、胆道综合性疾患等的中成药。具有清热利胆，解痉止痛的作用。由茵陈、胆通、溪黄

4、草、穿心莲、大黄组成。茵陈是方剂中的君药，其具有利胆作用的有效成分为篙属香豆精(sparne)，即6，7二甲氧基香豆精(6，7diethXyuarin)、绿原酸等，而其制剂中的胆通即为篙属香豆精，所以我们采用HPL技术对不同厂家消费的复方胆通片所含的组分以绿原酸为参照进展了横向比拟，建立了复方胆通片指纹谱，为复方胆通片真伪鉴别和品质评价提供根据。1仪器与材料HPll00高效液相色谱系统(脱气机、四元泵、柱温箱、紫外检测器，HPll003D化学工作站，美国Agilent公司产品)，乙腈为色谱纯(天津科密欧)，磷酸为分析纯(河北省保定化学试剂厂)，水为三蒸水，0.45针筒式滤器(购自北京超声技术开

5、发公司)，绿原酸标准品购自中国药品生物制品检定所，各厂家消费的复方胆通片购自张家口市各药店。2方法2.1HPL指纹谱原理13在给定的条件下，样品中各组分的相对保存值，相对峰面积值为各组分所特有，如利用各样品的相对保存值和相对峰面积值建立样品的HPL相对保存值指纹谱，通过对样品HPL色谱的数据化可产生一系列的参数，包括重叠率，n强峰，特征峰群及特征指纹峰检出率等，为鉴定药品真伪和区分药品的品质提供客观根据。2.1.1相对保存值a的计算我们选择出峰时间居中，峰面积较大，各样品均存在的绿原酸的色谱峰为参照峰，其a值为1，求出样品所有峰的相对保存值a。a=tRitRa(tRi一各组分的出峰时间，tRa

6、一绿原酸的出峰时间)2.1.2a值窗口的设定由于保存时间受各种实验因素的影响，每一次实验数据不可能完全一致，故对每个峰位的a值设定窗口为2，也是每个峰位a值取可信限在2的范围内。2.1.3指纹谱的建立按a值大小次序排列，在每个a项下标出该组分的相对面积值(RA)。RA是以1#复方胆通片的总面积为分母，样品中各色谱峰面积为分子，计算得到各色谱峰的相对面积值。各样品中具有一样a值的组分，通过RA的比拟，就可以清楚地理解各种样品中该组分的含量多少。这样，由a值和RA值组成样品的相对保存指纹谱。RA=(样品中各峰的面积值/1#复方胆通片的总面积)1002.1.4峰重叠率峰重叠率是在2个互相比拟样品的各

7、自峰数及两者共有峰(指a值一样的峰)的根底上，考虑从质的角度上说其相关性，计算方法是以某样品的指纹谱为基准，以其峰数与被比拟样品的峰数之和为分母，两者共有峰的两倍为分子，求得百分率即为峰的重叠率。2.2色谱条件色谱柱，Hypersil18(2004.6，5)，检测波长280n，柱温30，流动相A液0.4磷酸水溶液，B液乙腈，进样量20l，按表l进展洗脱。表1流动相线性略2.3绿原酸标准溶液制备精细称取一定量的绿原酸标准品，用0.4磷酸水溶液乙腈955定容至，配成0.1200gl1的原液备用。转贴于论文联盟.ll.2.4供试液的制备将不同厂家消费的复方胆通片碾碎，精细称取各样品粉末1.000g，

8、用0.4磷酸水溶液乙腈=955定容至10l，超声提取50in，过0.45针筒式滤器，放4冰箱备用。2.5样品分析将不同厂家消费的复方胆通片制成的供试液，按上述色谱条件进样分析(图1)，得各样品的HPL图谱及各色谱峰的数值。3结果3.1相对保存值指纹谱的建立根据上述公式计算各样品色谱峰的a值和RA值，但凡a值一样或相近，最大吸收波长、比吸收值都相等的峰，即可认为同一化合物峰，将各个样品每个峰的RA列在相应的a值项下，某a值项无相应峰的样品其RA值为0，得到相对保存值指纹谱。结果见表2。表2不同厂家复方胆通片HPL相对保存值指纹谱略3.2样品之间的相似性计算各个样品两两之间的峰重叠率并列表，组成反

9、映样品间相似性的峰重叠率矩阵，该矩阵为对称矩阵，只列出一半即可。结果见表3。3.3样品的HPL的12强峰每个样品均选出其中峰面积最大的12个峰排列成表，得样品的12强峰。结果见表4。3.4特征指纹峰根据样品中的12强峰及各色谱峰出现的频率，选出a值为0.24，0.42，0.60，0.74，1，1.08，1.22，1.27，1.38，1.42，1.53，1.63，1.70，1.81.92，2.12，2.18，2.28，2.36，2.44，2.87共21个峰为本实验所研究复方胆通片的特征指纹峰。现将样品的特征指纹峰检出情况列于表5中。表3复方胆通片HPL峰重叠率略表4复方胆通片HPL12强峰略表5不同厂家复方胆通片HPL特征指纹峰检出率略4讨论本研究采用了HPL技术，建立了复方胆通片的指纹谱。在实验色谱条件下，能得到较多的色谱峰且别离效果好，椐此所得的相对保存值也非常稳定，所建立的色谱指纹谱具有较大的稳定性和可控性。我们认为该方法能得到复方胆通片所含组分的大量信息，其指纹谱能反映复方胆通片的内在品质。从上述各表可以看出，不同厂家消费的复方胆通片的化学组分和含量相差较大。可能受方剂中各味中草药的产地、采收时期及其