限食对老龄大鼠抗衰老效应的影响

1、限食对老龄大鼠抗衰老效应的影响【关键词】膳食限制；衰老；肝细胞凋亡；生物学效应膳食限制dietaryrestritin，DR，即在满足机体对各种营养素需要量的前提下，适当限制食物的摄入，能明显延缓衰老的速度，延长实验动物的寿命。许多实验不断证实，啮齿类动物从幼年开场，每天限制正常摄食量的10%30%，不但不会引起营养不良，还可以比正常摄食组延长10%30%的平均和最高寿命。从成年开场限食，可以延长小鼠的最高寿限10%20%1。对于老龄期动物的限食研究却较少有报道。本研究采用老龄期大鼠开场限食，讨论其机体内假设干生物学效应的改变及可能机制，为抗衰老的研究提供新的实验根据。1材料与方法1.1分组本

2、实验采用清洁级SD大鼠，1011月龄，由中山大学实验动物中心提供。将68只大鼠随机分为三组。对照组，自由摄食，20只，雌雄各半；限食20组，食量摄入为对照组的80%，24只，雌雄各半；限食40组，食量摄入为对照组的60%，24只，雌雄各半；单笼饲养6个月，至1617月龄。动物饲养6个月后经股动脉放血处死。低温别离血清，-20保存，大鼠处死后在75%乙醇中浸泡35in,无菌环境中取出脑组织、肝脏组织等，称重后迅速置于液氮中，后移入80冰箱保存备用。1.2动物饲料本实验以食物配方饲料作为动物根底饲料。每天称量对照组动物实际饲料摄入克数，并以此计算第2天实验组动物的饲料用量，调整实验组饲料中维生素和

3、无机盐的百分含量，保证各组动物除食量摄入差异外，无机盐和维生素等微量营养素每天摄入的克数均一致。见表1。表1大鼠食物饲料配方(略)1.3试剂1.4指标测定1.5细胞凋亡检测取适量冷冻的肝组织，用T包埋，制成6厚的冰冻切片，丙酮固定20in,凋亡检测采用末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法TUNEL。结果判断：在光学显微镜400倍视野下，每张切片随机选择5个阳性视野，每个视野计数200个肝组织细胞中的阳性细胞核数，以平均计算阳性细胞所占百分比，求其均数值作为凋亡细胞阳性指数(AI。1.6统计学分析采用SPSS13.0软件包建立数据库，并进展统计分析。所有资料均先进展正态性检验。多

4、组间均数比拟采用单因素方差分析；各组间的两两比拟采用LSD法。2结果2.1动物的一般情况实验组大鼠在初期烦躁不安，毛蓬乱少光泽，随后逐渐正常。实验组大鼠明显活泼好动，反响灵敏，对照组大鼠那么显得迟钝少动，反响缓慢，缺少灵敏性。在实验期间，实验组大鼠由于限食，与初始体重比拟，终末体重有不同程度的下降P0.05，而对照组大鼠体重明显增加，因此对照组和实验组大鼠最终体重有显著差异P0.01。见表2。表2各组大鼠初始和终末期体重变化比拟(略)2.2不同组大鼠血清SD和DA程度变化雌性大鼠各组SD活性比拟显示，限食40和限食20组SD活性显著高于对照组,有统计学意义(P0.05；各组血清DA含量比拟显示

5、，限食40组和限食20组均显著低于对照组(P0.01，P0.05)，且限食20和限食40组间血清SD活性和DA含量的差异亦有统计学意义P0.01。转贴于论文联盟.ll.雄性大鼠各组SD活性比拟显示，限食40组SD活性显著高于对照组P0.01，限食20组SD活性也明显高于对照组，有统计学意义P0.05，限食20%和限食40间血清SD活性的差异也有统计学意义(P0.01)；各组雄性大鼠血清DA含量比拟显示，限食40组和限食20组均显著低于对照组(P0.01)。见表3。表3各组大鼠血清SD和DA含量变化比拟(略)2.4肝细胞形态学变化光学显微镜下可见正常肝细胞核呈蓝色，凋亡细胞的染色特征为，阳性细胞

6、细胞核染色呈棕褐色，细胞变小发生皱缩，核质浓缩，凋亡小体形成。老年对照组可见TUNEL阳性的肝细胞，而限食组凋亡细胞较少。见图1。3讨论营养物质缺乏、营养过剩和营养素之间的比例失调，都可能加速机体的衰老2。膳食为机体维持生命活动所必需，但能量的摄入应限制在一定的程度上，对于老年个体也应如此。随着增龄，抗氧化酶的活性减低，机体去除自由基的才能减弱，使自由基的产生过多或去除障碍，机体内氧化抗氧化的平衡状态被打破，引起正常细胞功能的退化，是促使机体衰老的重要原因3。SD是生物体内氧自由基去除系统的重要酶系，DA是自由基代谢的最终产物。在限食20%和40%两种剂量效应下，血清SD活性均明显高于老年对照组，血清DA含量均显著低于老年对照组。与国外Yu等4的研究结果一致，说明限食可以进步机体内抗氧化酶的活性，增强机体去除自由基的才能。目前，对于细胞凋亡和衰老的相关性研究说明，细胞凋亡通过破坏重要的不可替代的细胞对衰老起负面影响,老年肝的储藏才能降低,肝的生物转化才能降低,血浆白蛋白明显减少等变化,均与老年肝组织细胞数目的减少有关9。本研究结果显示出，老龄大鼠体内肝细胞的凋亡增多，而限食组的大鼠肝细胞凋亡明显减少。Higai等1