HPLC法测定清开灵注射液中猪去氧胆酸的含量

1、HPLC法测定清开灵注射液中猪去氧胆酸的含量【摘要】目的建立清开灵注射液中猪去氧胆酸的含量测定方法。方法采用hpl法,色谱柱为ultiatexb-18(5,2504.6),流动相为乙腈-水-磷酸(35650.1),流速为1l/in,柱温为40,检测波长为192n。结果猪去氧胆酸在0.202151.00675g/l范围内线性关系良好,r0.9996,平均加样回收率为98.25%,rsd1.26%。结论方法准确、可靠,重复性好,可用于清开灵注射液的质量控制。【关键词】高效液相色谱法；清开灵注射液；猪去氧胆酸keyrds：hpl；qingkailinginjetin；hydexyhliaid清开灵为

2、安宫牛黄丸改良的复方注射液,具有清热解毒、化痰通络、醒神开窍之功,用于热病神昏、中风偏瘫、神志不清,亦可用于急慢性肝炎、乙型肝炎、上呼吸道感染、肺炎、高烧以及脑血栓形成、脑出血见上述证候者。其原方中牛黄具有镇静开窍的作用,主要成分为胆酸和猪去氧胆酸,二者具有与牛黄相似的药效活性1。清开灵注射液已收录于2022版?中华人民共和国药典?(一部),其中含量测定包含了胆酸的测定方法2。由于胆酸和猪去氧胆酸均为清开灵注射液的活性成分,且构造相似,故而研究了同时测定胆酸和猪去氧胆酸的含量的方法,结果较好。1仪器与试药aters2695高效液相色谱仪。胆酸对照品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用,批号1

3、0078-0013),猪去氧胆酸对照品(siga,纯度98%)；清开灵注射液(市售样品3批,10l/支,吉林省集安益盛药业股份消费)。乙腈为色谱纯,其余所用试剂均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件参考2022版?中华人民共和国药典?(一部)清开灵注射液中胆酸含量测定的色谱条件2。经比较色谱峰别离情况以及别离度,确定的色谱条件为色谱柱ultiatexb-18(5,2504.6),流动相为乙腈-水-磷酸(35650.1),流速为1l/in,柱温为40,检测波长为192n。2.2溶液制备精细称取猪去氧胆酸对照品适量,加60%乙腈制成每1l含2.0135g的溶液,作为对照品溶液。精细量取本品10l,

4、加稀盐酸0.5l,用醋酸乙酯提取4次(20、20、15、15l),合并醋酸乙酯液,蒸干,残渣加60%乙腈适量使溶解,并转移至25l量瓶中,用60%乙腈稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45)滤过,取续滤液,即得。取缺胆酸、猪去氧胆酸的阴性制剂,按供试液溶液制备方法制备,即得。2.3专属性试验分别汲取猪去氧胆酸对照品溶液、供试品溶液与阴性溶液,按上述色谱条件进展检测,结果供试品、猪去氧胆酸对照品在相应时间出现猪去氧胆酸特征吸收峰,阴性溶液无干扰吸收峰。结果见图1。2.4标准曲线及线性范围分别精细汲取猪去氧胆酸对照品溶液1、2、3、4、5l,加60%乙腈稀释至10l,在上述色谱条件下,进样10l,

5、测定峰面积值。以峰面积平均值和对照品溶液浓度进展回归处理,回归方程为：a5.755101052.114200103,r0.9996；猪去氧胆酸在0.202151.00675g/l浓度范围内与峰面积呈良好线性关系。2.5最低检测限取0.20215g/l的对照品溶液用60%乙腈稀释1倍,得0.101675g/l的溶液,取10l进样测定,s/n3,故最低检测限为1g。2.6精细度试验取浓度为0.60405g/l对照品溶液10l进样测定,连续6次,结果rsd1.6%。2.7重复性试验2.8稳定性试验取供试品溶液,每隔2.0h进样10l,测定猪去氧胆酸12h内的峰面积值,结果rsd2.8%。2.9加样回

6、收率试验精细称取猪去氧胆酸对照品,配制成浓度为2.0135g/l对照品溶液。另取清开灵注射液(批号060102)5l,平行试验9份,分别参加对照品溶液,按上述色谱条件测定,结果见表1。表1加样回收率试验结果(略)2.10样品含量测定取本品3批(批号分别为060101、060102、060103),按供试品溶液制备方法制备供试液,测定猪去氧胆酸的含量,结果见表2。表23批样品中猪去氧胆酸的含量测定结果(略)3讨论醋酸乙酯振摇提取次数对猪去氧胆酸提取有一定影响,经试验考察,振摇提取3次可提取98%,提取4次可提取完全,结果与?中华人民共和国药典?中胆酸的提取相一致。经试验,在上述色谱条件下,胆酸与

7、猪去氧胆酸的别离度为3.7,可完全别离,因此,可同时测定这两个成分,更利于清开灵注射液的质量控制。本试验胆酸、猪去氧胆酸的含量测定方法均与药典中胆酸含量测定方法一致,考虑到胆酸含量测定方法已经比较成熟,因此,未做胆酸含量测定的方法学考察。因胆酸和猪去氧胆酸的检测波长为192n,为末端吸收,基线噪音较大。清开灵注射液中胆酸、猪去氧胆酸的含量较高,受到的影响较小,含量测定较准确。如为含量较低的药品,所受影响较大,可考虑采用高效液相色谱-蒸发光散射法测定,已有文献报道,该方法猪去氧胆酸的最低检测限为5ng3。对此,我们将做进一步研究。【参考文献】1北京中医学院.北京中医学院三十年论文选.北京：中医古籍出版社,19