干细胞的体外培养概述

1、干细胞体外培养第1页一、干细胞概念干细胞(stem cells, SC)是一类含有自我复制能力(self-renewing)多潜能细胞，在一定条件下，它能够分化成各种功效细胞。干细胞是一个未充分分化，尚不成熟细胞，含有再生各种组织器官和人体潜在功效，医学界称之为“万用细胞”。 第2页干细胞几个主要特征含有自我更新能力与自我维持能力，能够无限增殖分裂。干细胞一旦形成，在机体内终生都含有自我更新能力，以维持本身数目标恒定。既含有生理性更新能力，也含有对损伤或疾病造成反应有修复能力，如骨髓间充质干细胞等。 干细胞维持自稳性机制：对称分裂和不对称分裂第3页 4 干细胞对称分裂和不对称分裂对称分裂 （s

2、ymmetry division）不对称分裂 （asymmetry division）干细胞 分 化 细 胞 干细胞 分化细胞第4页干细胞几个主要特征干细胞本身不是终末分化细胞；含有多向分化能力（多能性或全能性），即能够分化发育成各种胚层组织细胞（ES细胞），或能够分化成为本系统各谱系细胞（特定组织干细胞，如造血干细胞）。第5页干细胞几个主要特征干细胞自我更新与分化需要特定微环境，也就是说干细胞往哪一个方向分化，必须在该细胞生存特定微环境前提下进行分化。已经有很多试验表明，如将ES细胞种植入小鼠大脑内，这些干细胞将向神经系统分化。在不一样生长因子刺激下干细胞可表现出不一样分化潜能第6页干细胞几

3、个主要特征干细胞分裂产生子细胞只能有两种命运保持为干细胞或分化为特定细胞。第7页二、干细胞分类1、按分化潜能大小来分类:全能干细胞（ Totipotent stem cell ）：能分化成全部组织和器官干细胞，它含有形成完整个体分化潜能。如受精卵，胚胎干细胞。多能干细胞（ pluripotent stem cell ），含有分化出各种组 织细胞潜能，但却失去了发育成完整个体能力，发育 潜能受到一定限制。如骨髓多能造血干细胞是经典例 子，它可分化出最少十二种血细胞 。专能干细胞（ unipotent stem cell ），这类干细胞只能向 一个类型或亲密相关两种类型细胞分化，如上皮组织 基底层

4、干细胞、肌肉中成肌细胞等。第8页2、依据起源来分: 起源于胚胎- 胚胎干细胞 ESC （Embryonic Stem Cell ） 胚胎性生殖细胞 EGC （Embryonic Germ Cell ） 起源于成体组织- 成体干细胞 ASC （Adult-derived Stem Cell ）第9页胚胎干细胞指从着床前胚胎内细胞团（桑椹胚）或原始生殖细胞取得一个含有多潜能性、可发育成为各种细胞、同时可保持不分化状态而连续生长克隆细胞系。它能够无限增殖并分化成为全身200各种细胞类型，深入形成机体全部组织、器官。为全能干细胞。 第10页成体干细胞是成体组织内含有自我更新及分化一个或一个以上子细胞未

5、成熟细胞。起源于成年组织或器官，普通含有组织特异性，只能分化成特定细胞或组织。为多能干细胞或单能干细胞，如造血干细胞和上皮干细胞等。 第11页3、依据干细胞组织发生名称进行分类:胎胎干细胞造血干细胞骨髓间质干细胞肌肉干细胞成骨干细胞内胚层干细胞视网膜干细胞胰腺干细胞第12页三、干细胞研究历史情况 1959年，美国首次报道了经过体外受精（IVF）动物。 60年代，几个近亲种系小鼠睾丸畸胎瘤研究表明其起源于胚胎生殖细胞（embryonic germ cells, EG细胞）,此工作确立了胚胎癌细胞（embryonic carcinoma cells, EC细胞）是一个干细胞。 1968年，Edwa

6、rds 和Bavister 在体外取得了第一个人卵子。 70年代，EC细胞注入小鼠胚泡产生杂合小鼠。培养EC细胞作为胚胎发育模型，即使其染色体数目属于异常。1978年，第一个试管婴儿在英国诞生。 第13页1981年，从小鼠胚泡内细胞团分离出小鼠ES细胞，并建立了小鼠ES细胞体外培养条件。将ES细胞注入小鼠，能诱导形成畸胎瘤。 1984-1988年，Anderews 等人从人睾丸畸胎瘤细胞系Tera-2中产生出多能、可判定（克隆化）细胞，称之为胚胎癌细胞（embryonic carcinoma cells, EC细胞）。克隆人EC细胞在视黄酸作用下分化形成神经元样细胞和其它类型细胞。 1989年

7、，Pera 等分离了一个人EC细胞系，此细胞系能产生出三个胚层组织。这些细胞是非整倍体（比正常细胞染色体多或少），他们在体外分化潜能是有限。 第14页1998年美国有两个小组分别培养出了人多能干细胞： James A. Thomson在 Wisconsin大学领导研究小组方法是：人卵体外受精后，将胚胎培育到囊胚阶段，提取 inner cell mass细胞，建立细胞株。 John D. Gearhart在 Johns Hopkins大学领导另一个研究小组方法是：从受精后59周人工流产胚胎中提取生殖母细胞( primordial germ cell )，建立细胞株。1999年12月，美国科学家在

8、美国科学院院刊汇报说，小鼠肌肉组织成体干细胞能够“横向分化”为血液细胞。随即，世界各国科学家相继证实，成体干细胞，包含人类成体干细胞含有可塑性。1999年12月，干细胞研究进展被科学杂志评选为该年度世界十大科学进展之首。日本Yamanaka研究小组和美国James Thomson 研究小组分别取得诱导多能性干细胞 （induced pluripotent stem cell，iPS细胞）。 第15页至今已分离得到胚胎干细胞物种有：小鼠胚胎干细胞（1981）金黄地鼠（1988）、貂（1993）、猪（1994，1997）、鸡（1996）、恒河猴（1995）、绒猴（1996）。分离得到人胚胎干细胞（

9、1998），胚胎生殖细胞（1998），当前不停报道成年组织起源干细胞。第16页四、胚胎干细胞体外培养（一）技术原理基本标准：促进ES增殖同时，维持其未分化二倍体状态。有喂养层（feeder layer）培养法：以小鼠成纤维细胞耐硫代鸟嘌呤和耐乌苯苷亚系（STO）或小鼠胚胎成纤维细胞（ Mouse Embryo Firbroblasts, MEF）制备喂养细胞单层，主要是利用其分泌生长因子FGF和抑制干细胞分化因子白血病抑制因子（LIF）共同作用，保持干细胞在体外克隆而不分化。无喂养层培养法：利用各种能分泌抑制分化因子细胞制备条件培养基或在基础培养基中加入重组LIF制备条件培养基。第17页（二）

10、基本过程喂养层细胞制备或条件培养基制备胚胎制备和培养胚胎干细胞分离胚胎干细胞培养胚胎干细胞判定冻存与复苏细胞克隆形态碱性磷酸酶检测核型判定分化能力观察嵌合能力测定第18页1、喂养层细胞培养小鼠胚胎成纤维细胞（ MEF）：取孕12.5-14.5 d鼠胚胎躯干，以植块培养法或分散细胞培养法制备，取第三代至第五代细胞作为喂养层细胞。STO细胞：按照普通已建细胞系培养方法。DMEM加10%小牛血清作为培养液。采取胎数多小鼠一次大量培养MEF冻存，用时复苏。第19页 MEF和STO优缺点：MEF分泌促进胚胎干细胞增殖和抑制分化因子能力比STO强，STO作喂养细胞时常需在培养基中加入LIF。MEF不能长久

11、传代，需经常准备怀孕小鼠制备第三代至第五代细胞，STO则可长久传代培养。MEF不具耐药性，不能作为转染外源性基因胚胎干细胞筛选取。SNL细胞为转染了neor抗性基因和LIF基因STO细胞，可分泌足够抑制分化因子，并因带有neor抗性基因可用于转基因胚胎干细胞筛选。胚胎干细胞培养过程中，死亡MEF或STO染色体可能造成胚胎干细胞突变及影响正常核型保持。不易取得纯胚胎干细胞作为生化和分子生物学方面分析。使用前如用丝裂霉素C处理，如清洗不彻底，残余丝裂霉素C会影响胚胎干细胞增殖。第20页报道人源性滋养层细胞：人骨髓起源间充质干细胞胎儿肌肉或胎儿皮肤细胞新生儿包皮成纤维细胞成人子宫内膜细胞人胎盘成纤维

12、细胞人胚胎干细胞经体内分化获取间充质干细胞第21页2、喂养单层制备MEF或STO连成一片，以含10g/ml丝裂霉素培养液370C作用2-3 h（如细胞层较薄，也可缩短至30min-1.5h），或射线照射（剂量为30-100Gy）。弃含丝裂霉素培养液，PBS洗5次， 射线处理者不用清洗。消化细胞，制备悬液种植至用0.1%明胶处理过（0.1%明胶水溶液覆盖培养瓶表面，室温2h以上）培养瓶，种植细胞数：MEF7.5104-105个/cm2，STO为5104个/cm2。培养至细胞连成一片没有间隙（中间可补加处理过细胞），制备好喂养单层置培养箱，5天内使用，使用前换成干细胞培养液。第22页观察：好喂养单

13、层，细胞连成一片，无间隙，死亡细胞和杂细胞极少。MEF和STO产生抑制分化因子一部分分泌到培养液中，一部分锚定在细胞外基质上。无间隙喂养单层确保了胚胎干细胞都能与喂养层细胞接触而到达最正确效果。第23页3、用于培养胚胎干细胞条件培养基直接在胚胎干细胞培养液中加入重组LIF，使终浓度为1000U/ml。Baffalo大鼠肝细胞株BRL条件培养基（BRL-CM):能分泌抑制畸胎癌（瘤）和胚胎干细胞分化因子DIF。搜集培养72h培养液，过滤除菌，用前6-7份+3-4份胚胎干细胞培养液，再添加8-10%胎牛血清。年纪 2-3周大鼠心肌细胞条件培养基（RH-CM）：分泌抑制胚胎干细胞分化因子。搜集1-6

14、代细胞培养液，过滤除菌，用前6份+3份胚胎干细胞培养液+1份胎牛血清。第24页4、胚胎干细胞分离和培养（1）培养液配制培养液要用超纯水或五蒸水，不能有细菌内毒素污染，水要现用现制。高糖DMEM作为基础培养基，葡萄糖浓度为（4.5g/L）：有利于囊胚贴壁、内细胞团增殖及胚胎干细胞集落形成。使用前还要添加-巯基乙醇（0.1mmol/L）或单硫甘油（ 0.15mmol/L）：保护细胞内酶和蛋白质中巯基不被氧化，促进胚胎干细胞贴壁和克隆形成。使用前要添加15%胎牛血清：必不可少，但也有缺点。第25页血清缺点：成份复杂，不利于整合到胚胎干细胞基因组中外源性基因功效测定；可能含有一些未知促进胚胎干细胞分化

15、因子；含有微量血红蛋白和内毒素，干扰胚胎干细胞生长。无血清胚胎干细胞培养液无上述缺点，但细胞贴附力不如有血清培养基。第26页（2）胚胎干细胞分离小鼠：母小鼠超数排卵交配（注射孕马血清促性腺激素和人绒毛膜促性腺激素）胚胎采集：取孕3.5d（囊胚期或桑椹期）母小鼠取胚胎胚胎培养：培养皿内制备直径0.5cm左右露滴状培养液液滴，并覆盖透明石蜡油，胚胎置于液滴中培养胚胎干细胞分离：普通分离法、免疫外科法，弃除滋胚层细胞，取得内细胞团（inner cell mass，ICM），并分散为3-4个细胞在一起细胞团第27页人胚胎干细胞起源 a.自终止妊娠（5-9周人工流产）胎儿中提取生殖母细胞( primor

16、dial germ cell )。 28 Gearhart法第28页29 b.取自体外受精胚胎囊胚期内层细胞。用这种方法，每个胚胎可取得1520个细胞用于培养。 Thomson法第29页c.经过体细胞核转移技术（SCNT技术）获取30 第30页其它干细胞分离与纯化 干细胞表面有许多特殊标识，以造血系统为例，干细胞表面标志有Sca-1和c-kit等。另外各种成体干细胞还有各自独特标识物，如人造血干细胞表现为CD34+和Thy10+而CD10，CD14，CD15，CD16，CD19，CD20皆为阴性另外干细胞还有不一样于普通分化细胞物理特征，比如干细胞不被染料Hoechst33324和Rhodam

17、ine123染色。利用这些特征及表面标志，采取荧光细胞分离器从单细胞悬液中即可分离纯化干细胞。 第31页（3）胚胎干细胞培养有喂养层细胞培养：将内细胞团吸置处理过喂养层上，一个内细胞团放置一个孔，370C、5%CO2、饱和湿度培养2d后出现小集落，并逐步增大，6-10d可消化传代，消化时，消化30s后弃消化液，残余消化液继续作用，当喂养单层出现裂隙（或显微镜下细胞之间分开），终止消化，普通为2-3min加适量培养液，轻轻吹打成单细胞悬液，接种新喂养层扩大培养。无喂养层培养：明胶包被培养板，条件培养基。已建系胚胎干细胞：将已培养2-3d生长旺盛干细胞消化成单细胞悬液，添加新培养液，按照1：3或1

18、：6百分比转钟。第32页注意事项：最初分离内细胞团以3-4个细胞团为宜，但集落形成后，传代过程中一定要消化成单细胞，不然胚胎干细胞会相互诱导，易于分化。培养条件要一直如一。为了增强胚胎干细胞粘附力，除明胶包被外，还能够用纤维连接蛋白和多聚赖氨酸等促进粘附。第33页（4）培养结果hES细胞集落（10）胚胎干细胞呈集落状（岛屿状）生长，边缘整齐，表面平滑，结构致密，隆起生长，细胞之间界限不清。消化成单细胞后细胞小而圆，核大，胞浆小。第34页A phase contrast image of the pluripotent murine embryonic germ cell第35页A cultur

19、e dish containing hundreds of colonies of murine embryonic germ cells. Each red-stained spot represents an individual colony comprised of hundreds or thousands of stem cells.第36页5、胚胎干细胞冻存和复苏冻存液：胚胎干细胞培养液+10%-15%DMSO。冻存细胞密度：106-107个/ml冻存与复苏方法同普通细胞。LIF条件培养基培养细胞，依然用不含LIF胚胎干细胞培养液冻存。第37页（三）胚胎干细胞判定1、 ES细胞生

20、物学特征（1）ES细胞形态结构及核型ES细胞含有与早期胚胎细胞相同形态结构，胞体体积小，核大，有一个或几个核仁。细胞中多为常染色质，胞质结构简单，散布着大量核糖体和线粒体，核型正常，保留了二倍体性质。正常ES细胞染色体正常，如发生异常则其极难发育分化形成动物个体。 第38页（2）ES细胞生长特征ES细胞在体外分化抑制培养中，呈克隆状生长，细胞紧密地聚集在一起，形似鸟巢，细胞界限不清，克隆周围有时可见单个ES细胞和分化扁平状上皮细胞。 ES细胞增殖快速，每1824 h分裂增殖 1次。另外，其还能够在体外进行选择、操作、冻存。冻存细胞可在需要时随时解冻，继续培养不失其原有特征，而且来自一个克隆细胞

21、含有一样特征。第39页40 人胚胎干细胞(hES)特点 形态：圆形或椭圆，体积较小，核质比较大，体外抑制分化培养时呈鸟巢状，集落生长并紧密堆积，细胞界限不显著。第40页 （3）ES细胞高度分化潜能 ES细胞在体外需在喂养层细胞上培养才能维持其未分 化状态，一旦脱离喂养层就自发地进行分化。在单层培养时细胞自发分化成各种细胞， 悬浮培养中： “简单类胚体” “囊状胚体” 细胞分化物。ES细胞可进行诱导分化 *用RA（维生素A酸或视黄酸）作诱导90以上ES细胞 分化为神经胶质细胞， *聚集培养ES细胞诱导分化则可分化为有节律性收缩 心肌细胞。 *将ES细胞注射到同源动物皮下，可形成组织瘤，其细胞 组

22、成可代表3个胚层细胞。 *用ES细胞作核供体进行细胞核移植，能够得到可发育重 构胚和动物个体。第41页 （4）碱性磷酸酶表示 许多资料表明，小鼠、大鼠桑椹胚细胞和囊胚细胞都有碱性磷酸酶（AKP）表示，小鼠EC细胞和ES细胞中均含有丰富AKP。而在已分化EC细胞和ES细胞中AKP呈弱阳性或阴性。猪、兔桑椹胚和早期囊胚AKP呈阳性。所以，AKP惯用来作为判定EC细胞或ES细胞分化是否标志之一。第42页 （5）胚胎阶段特异性细胞表面抗原表示 早期胚胎细胞表面均表示胚胎阶段特异性表面抗原（SSEA-1）。在胚胎原始外胚层细胞、ES细胞、EC细胞和原始生殖细胞表面均可检测到SSEA-1表示。小鼠SSEA

23、-1表示自8细胞期开始，直到原始外胚层形成期。早期囊胚ICM细胞全部呈强阳性，晚期囊胚中部分ICM呈强阳性，部分呈弱阳性，少部分为阴性。所以，SSEA也常作为ES细胞判定一个标志。第43页 2、ES细胞全能性主要表达在以下几方面： 形成畸胎瘤。将ES细胞注人同源动物皮下可形成畸胎瘤，包含三个胚层细胞； 形成类胚体。培养ES细胞在非粘附底物中悬浮生长，或控制增殖细胞数目，能够使之生成类胚体，它是一个与畸胎瘤相同各种细胞系混杂集合体、含有三个胚层组织； 第44页 直系分化。经过控制ES细胞生长环境，或遗传操纵特定基因表示，ES细胞可直接分化成某特定种系细胞，比如将神经决定基因NeuroD2和Neu

24、roD3转人ES细胞，可使之分化为神经细胞； 形成嵌合体。将ES细胞注射到同种动物囊胚腔中后，能够形成嵌合体（chimera），ES细胞能够参加嵌合体各个器官包含生殖腺发育。这是检验一个细胞系是否为ES细胞标准。 第45页3、ES细胞判定- 细胞形态结构- 核型分析- 碱性磷酸酶（AKP）染色- SSEA-I 免疫荧光标识- 分化能力检测 体外分化试验 体内分化试验 嵌合体形成试验 核移植试验第46页 （1）ES细胞形态学判定 依ES细胞形态结构（胞体体积小，核大、有一个或几个核仁）和生长特征（呈克隆状生长，细胞紧密聚集，形似鸟巢，界限不清）对ES细胞进行初步判定。第47页 （2）核型分析 E

25、S细胞含有正常二倍体核型，可用核型分析进行检验第48页 （3）碱性磷酸酶（AKP）染色原理：AKP在碱性条件（pH9.0-9.6）下能使孵育液中-磷酸奈酚钠水解，产生-奈酚，然后再与偶氮盐偶联，形成不溶性染料而展现颜色。步骤：生长胚胎干细胞克隆盖片以无水乙醇或冷丙酮固定10-15min水洗滴加孵育液室温5-10min水洗10min复染（甲基绿等） 10min。结果：未分化胚胎干细胞颜色以所用偶氮盐品种而异，分化者则为复染液颜色。对照：以已建系ES细胞（或小鼠脱带桑椹胚或囊胚）作为阳性对照，作用液中不含-萘酚磷酸钠为阴性对照。 第49页第50页（4）胚胎干细胞特异表面抗原表示免疫荧光检测SSEA

26、胚胎阶段特异性抗原:SSEA-1 SSEA-3 SSEA-4 Thmoson分离hES 阴性 弱阳性 强阳性Gearhart分离hES 阳性 弱阳性 阳性小鼠ES 阳性 阴性 阴性鼠和人胚胎干细胞表示表面抗原有种属差异。RT-PCR检测转录因子Oct-4表示 Oct-4只限定在多潜能细胞中表示。人和小鼠胚胎干细胞都表示转录因子Oct-4，当胚胎干细胞分化时，其表示能力大大降低。第51页52第52页（5）分化能力检测体外分化能力观察:无喂养层和无抑制分化因子条件下培养，胚胎干细胞会分化成各种细胞或发育成胚胎体：3d “简单类胚体” 5-10d“囊状胚体” 贴壁细胞为细胞分化物。第53页体内分化能

27、力观察：ES细胞接种同一品系小鼠腹股沟（107个细胞）或裸鼠、SCID小鼠（106个细胞）约2周后出现肿块，4-5周深入增大，摘除肿块固定切片染色：见三个胚层组织，为畸胎瘤结构裸鼠和SCID小鼠可接种异种细胞和组织移植也可接种腹腔，2-3周后观察肿瘤第54页嵌合能力测定：野灰色小鼠品系（如129鼠）ES注射白化体小鼠（BALB/c小鼠）或纯合非野灰色小鼠（C57BL/6小鼠）着床前胚胎内，或未起源于白化体小鼠ES注射野灰色小鼠或纯合非野灰色小鼠着床前胚胎内，再移植到假孕母鼠子宫内，使之发育成个体。 如ES含有嵌合能力，则会融合到宿主胚胎细胞中，并共同发育形成各种组织细胞并产生个体小鼠即为嵌合体

28、，其毛色应是ES细胞起源品系小鼠和胚胎供体小鼠毛色杂合，即有白色皮毛也有野灰色或黑色皮毛。 除毛色观察，也可检测同工酶遗传标识，或采取PCR和小卫星DNA方法等判定嵌合体。第55页六、成体干细胞优点获取相对轻易 源于患者本身成体干细胞在应用时不存在组织相容性问题，防止了移植排斥反应和使用免疫抑制剂 理论上，成体干细胞致瘤风险很低，而且所受伦理学争议较少 成体干细胞还含有多向分化潜能 第56页但胚胎干细胞也存在本身优势： 胚胎干细胞能永生化，能够传代建系，且增殖能力强，起源充沛。 即使成体干细胞含有向多系分化能力，但这种分化“效率”尚不理想。经过体外扩增培养能提升转化效率，不过体外转化是否会引发

29、成体干细胞遗传改变还有待证实，而且这种分化是否是成体干细胞多系分化结果尚无法必定。成体干细胞和胚胎干细胞各有本身优势和缺点。同时开展对二者研究，能互为裨益，相得益彰。二者研究对干细胞领域而言都是必要。 第57页成体干细胞判定方法：科学家还未就成体干细胞判定标准达成一致，经常被采取判定方法包含： 利用分子标识在活体组织中对细胞进行标识，然后确定它们所产生特定细胞类型。 将细胞从活体动物上分离出来，在对其进行细胞培养过程中进行标识，之后将细胞移植入另一个动物体内，观察该细胞是否能够再生其起源组织。 分离细胞，进行细胞培养，并对其分化进行控制，通常采取加入生长因子或向细胞内引入新基因方法，进而观察细

30、胞分化方向。 第58页 当前研究成体干细胞 （Adult Stem Cells）Bone Marrow Heamatopoietic Stem Cells( HSC )Peripheral Blood Stem Cells ( PBSC )Fetal Liver Stem CellsUmbilical Cord Blood Stem CellsNeural Stem Cells 第59页造血干细胞作为干细胞研究与应用突破口1. 造血细胞是细胞增殖分化最正确模型。2. 造血干祖细胞及各系血细胞表面标志较为清 楚，细胞表型特征可进行定量分析，且可分选。3. 造血干细胞增殖及向各系分化主要诱导因 子

31、、受体、信号转导、微环境等原因较为清楚。4. 造血细胞发挥功效可相对游离，不需“生物支架”、 神经、血管、外科移植等复杂“下游”工艺，因 此便于直接应用于临床。第60页神经干细胞(nural stem cell，NSC) NSC可增殖分化出中枢神经系统三种基本细胞：神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。 神经干细胞生化标识为巢素蛋白及波形蛋白。因为分离神经干细胞所需胎儿脑组织较难取材，神经干细胞研究仍处于初级阶段。 第61页五、当前干细胞研究热点人体干细胞建株；干细胞保持不分化培养；干细胞定向诱导分化；干细胞应用法律、伦理道德问题；干细胞、组织工程、器官工程；胚胎组织种植及定向诱导分化。第62页

32、 六、胚胎干细胞研究应用前景ES细胞在哺乳动物个体发生发育规律研究中极有价值工具；ES细胞是研究细胞分化理想伎俩；ES细胞是研究基因功效首选细胞；ES细胞作为生产转基因动物主要路径之一；ES细胞治疗技术将引发一场医学革命；ES细胞可用于研究细胞癌变机理和新药品筛选。第63页 Human Disease modelHepatocytesBlood Cells药品开发、毒性测试临床医疗应用基础医学研究Human disease model胚胎干細胞基础医学研发与临床应用第64页起源于干细胞组织可能用于治疗疾病 细胞类型 治疗疾病神经细胞 中风、帕金森氏病、老年痴呆症、 脊髓损伤、多发性硬化病心肌细胞 心脏病发作、充血性心脏病产生胰岛素细胞 糖尿病软骨细胞 骨性关节炎血细胞