临床免疫学检验：凝集反应

1、 凝集反应 Agglutination test凝集反应的概念颗粒性抗原(细菌、螺旋体、红细胞等)或覆盖了可溶性抗原（或抗体）的载体颗粒与相应抗体（或抗原）结合后，在适当电解质存在下，出现的肉眼可见的凝集现象。1896年 Widal反应诊断伤寒病1900年Landsteriner在血凝现象的基础上发现人类ABO血型系统,并于1930年获得诺贝尔奖凝集原(agglutinogen)：凝集反应中的抗原凝集素(agglutinin)： 凝集反应的抗体凝集反应的特点定性或半定量试验根据凝集现象的出现与否定性判断抗原抗体是否对应；将血清标本倍比稀释后再进行反应，以出现凝集反应的最高稀释度作为抗体的滴度（

2、效价）。反应阶段：抗原抗体的特异性结合出现肉眼可见的凝集现象 可见反应形成凝集反应的类型直接凝集反应间接凝集反应 （正向）间接凝集反应 反向间接凝集反应 间接凝集抑制反应 协同凝集反应抗球蛋白试验直接凝集反应Direct agglutination reaction颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。分为玻片凝集反应和试管凝集反应玻片凝集试验在玻片上颗粒性抗原与相应抗体直接结合，出现肉眼可见的凝集现象。常用于菌种鉴定、血清学分型、血型鉴定等。+方法评价:定性试验、简便快速、敏感度低 试管凝集试验 在试管内颗粒性抗原与相应抗体直接结合，出现肉眼可见的凝集现象。多用

3、于测定抗体效价方法评价：特异性易受影响、敏感性不高临床意义：Weil-Felix reaction、Widalreaction、交叉配血试验 在临床上主要用已知的伤寒沙门菌O或H抗原检测血清中有无相应的特异性抗体及其效价，以协助诊断伤寒病或供流行病学调查。 临床上开展的外斐反应是利用与立克次体有共同耐热性多糖抗原的变形杆菌OX19、OX2、OXk菌株代替立克次体作为已知抗原，与患者血清进行凝集试验，以辅助诊断斑疹伤寒、恙虫病等立克次体疾病。 现给你OX19、OX2、OXk三种诊断菌液和待测血清，请写出利用试管凝集法进行的外斐试验的操作步骤。间接凝集反应将可溶性抗原(或抗体）先吸附或偶联于颗粒性

4、载体表面上，然后与相应抗体（或抗原）作用，在适宜电解质的参与下，出现的特异性凝集现象。载体(carrier)：试验体系中与免疫无关的颗粒。致敏颗粒（sensitized particle):吸附有已知抗原或抗体的颗粒。正向间接凝集试验载体可溶性抗原致敏致敏颗粒NS凝集颗粒待测抗体抗原致敏载体-检测抗体反向间接凝集试验载体已知抗体致敏致敏颗粒NS凝集颗粒待测抗原抗体致敏载体-检测抗原间接凝集抑制试验待测尿液(含HCG)抗HCG特异结合抗原抗体复合物NS致敏颗粒用抗原致敏载体及相应抗体作为诊断试剂，用于检测标本中是否存在与致敏载体相同的抗原无凝集颗粒为阳性以检测尿HCG(妊娠试验)为例 间接凝集抑

5、制试验待测尿液(无HCG)抗HCG无结合NS致敏颗粒有凝集颗粒为阴性载体:金黄色葡萄球菌 金葡菌细胞壁中含有蛋白A(SPA),SPA具有能与IgG Fc结合的特性, 利用该特性可将其与IgG抗体相连,使其成为抗体致敏的载体颗粒.协同凝集试验SPA与血清中的IgG类抗体的Fc段非特异性结合，而两个Fab段暴露在葡萄球菌菌体表面，仍然保持正常的抗体活性，与特异性抗原相遇时，能出现特异的凝集现象。协同凝集试验原理图IgGSPASPA- IgG 待测抗原SPA- IgG-待测抗原凝集颗粒混合 加入 间接凝集试验比较正向间接 已知抗原 无 抗体 胶乳凝集 凝集试验 致敏载体 RBC凝集 致敏颗粒 第二试

6、剂 待测物 阳性结果间接凝集 已知抗原 抗体 抗原 胶乳不凝集 抑制试验 （或抗体） （或抗原 ） 抗体 胶乳不凝集 致敏载体 阴性结果凝集反向间接 已知抗体 无 抗原 胶乳凝集 凝集试验 致敏载体 RBC凝集 * 间接凝集抑制试验：需要先加入已知与致敏颗粒相同的抗原(或抗体) 进行中和。载体种类及其处理方法红细胞（人O型红细胞、绵羊红细胞）新鲜红细胞吸附蛋白能力弱，易污染和溶血，不易保存醛化红细胞吸附蛋白能力强，不易溶血，-20C保存一年聚苯乙烯胶乳颗粒人工合成的载体，大小均一、直径0.8m的圆形颗粒明胶颗粒间接血凝试验以红细胞为载体的间接凝集试验 ： 敏感性较强、简便、快速、成本低廉红细胞

7、抗原致敏致敏红细胞NS红细胞凝集 间接血凝试验间接血凝试验原理待测抗体胶乳凝集试验以聚苯乙烯胶乳为载体的间接凝集试验胶乳颗粒的性能比RBC稳定、均一性好与抗原结合的能力及凝集性能不如RBC离心聚苯乙烯胶乳-抗原(或抗体)过量抗原(或抗体)抗原-聚苯乙烯胶乳的絮状凝集性能不稳定，容易解离 混合聚苯乙烯胶乳中和聚苯乙烯胶乳表面电荷除去游离配体胶乳颗粒物理吸附法缩合成聚苯乙烯胶乳-CO-NH-抗原(或抗体)抗原(或抗体)-NH2性能稳定，保存时间长，特异性、敏感性优于物理法。 混合羧化聚苯乙烯胶乳碳化二亚胺胶乳颗粒化学交联法明胶凝集试验 将病毒抗原或重组抗原吸附于粉红色明胶颗粒上，当致敏颗粒与样品血

8、清作用时，若血清含有抗病毒抗体则可形成肉眼可见的粉红色凝集。 间接凝集反应的应用抗原的检测 反向间接凝集试验可用于检测病原体的可溶性抗原，也可用于检测各种蛋白质成分。抗体的检测 检测细菌、病毒、寄生虫等感染后产生的抗体。 抗球蛋白试验抗球蛋白试验 又称Coombs试验 直接法作用：检测红细胞表面结合的不完全抗体。临床意义：新生儿溶血症和自身免疫性溶血性贫血的诊断。RBC为Rh+7S的IgG体内发生+抗IgG体外测试抽血 间接法作用：检测游离在血清中的不完全抗体。临床意义：输血前的交叉配血、不相溶输血后的抗体检测。检测母体 Rh（D）抗体有助于及早发现及避免新生儿溶血症。RBC为Rh+血清不完全抗体+抗IgG体外测试概念 冷凝集试验冷凝集素是红细胞某些抗原的自身抗体，只能在低温时与其相应的抗原