大肠菌群计数检验

1、大肠菌群计数检验第1页，共14页，2022年，5月20日，15点10分，星期二旧国家标准第2页，共14页，2022年，5月20日，15点10分，星期二第一法 大肠菌群MPN 计数法第3页，共14页，2022年，5月20日，15点10分，星期二第二法 大肠菌群平板计数法第4页，共14页，2022年，5月20日，15点10分，星期二第一天第1、3、5、7小组： 使用第一法（附带做第二法中，两个平板接种），以自来水为样品。 第2、4、6小组： 使用第二法（附带做第一法中，3个试管初发酵试验），以污水为样品。第5页，共14页，2022年，5月20日，15点10分，星期二第一法：检样稀释与初发酵试验MP

2、N：表示食品中大肠菌群数是以每100ML或克检样内大肠菌群最大可能数。一般采用9管法.一般样品25ML（克）+225ML生理盐水=1：10，从10-1取样1ML，接种到3管LST（月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤）中。从10-1取样1ML+9 ML生理盐水=1：100，从10-2取样1ML，接种到3管LST中。从10-2取样1ML+9 ML生理盐水=1：1000，从10-3取样1ML，接种到3管LST中。第6页，共14页，2022年，5月20日，15点10分，星期二第二法：检样稀释与平板计数检样稀释：同上。平板计数：1、每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1mL稀释样品，另外一个平皿加1mL生理盐水作空白

3、对照。2、及时将1520mLVRBA（结晶紫中性红胆盐琼脂）倾注每个平皿中。3、待琼脂凝固后，再加34mLVRBA覆盖表层。翻转平板培养。第7页，共14页，2022年，5月20日，15点10分，星期二第二天第一法 复发酵试验 用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中，361培养48h2h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。第8页，共14页，2022年，5月20日，15点10分，星期二第二法 平板菌落数的选择与证实试验平板菌落数的选择选取菌落数在15CFU150CFU 之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，

4、菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5mm 或更大。证实试验从VRBA 平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB 肉汤管内，36 1 培养24 h48 h，观察产气情况。凡BGLB 肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。第9页，共14页，2022年，5月20日，15点10分，星期二（2）原理溴甲酚紫，中性时呈蓝紫色，酸性时呈黄色，如果颜色不变（呈蓝紫色），说明无产酸的大肠菌群；如果颜色变黄色，说明可能出现能分解乳糖产酸的大肠菌群。胆盐可以抑制其它细菌生长繁殖。分解乳糖产酸产气的大肠菌群，看小倒管中的气体。第10页，共14页，2022年，5月20日，15点10分，星期二1

5、产气 2不产气杜氏发酵管产气情况第11页，共14页，2022年，5月20日，15点10分，星期二第12页，共14页，2022年，5月20日，15点10分，星期二第四天：大肠菌群计数报告第一法：确证大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表（见附录），报告每g（mL）样品中大肠菌群的MPN值。第13页，共14页，2022年，5月20日，15点10分，星期二第二法：经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每g（mL）样品中大肠菌群数。例：10-4样品稀释液1mL，在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性