免疫分析技术生化分析

1、 脊髓灰质炎 Polio 狂犬病Rabies风疹 Rubella肝炎 Hepatitis A肝炎 Hepatitis B 流感Influenza白喉 diphtheria 天花Smallpox virus轮状病毒 RotavirusPertussis 百日咳第一页，共四十页。Comparison of maximum and current morbidity for vaccine-preventable diseasesDiseaseMaximum casesYear1992Percentage change白喉 Diphtheria麻疹 Measles腮腺炎 Mumps百日咳 pertu

2、ssis脊髓灰质炎 Polio (paralytic)风疹 RubellaCRS破伤风 Tetanus乙型流感 Heamophilusinfluenzae type B乙型肝炎 Hepatitis B206,939694,134152,209265,269 21,269 57,686 20,000 1,560 20,000 26,6111921194119681934195219691964, 65192319841985 4 2,237 2,572 4,083 4 160 11 45 1,41216,12699.9999.7598.3198.4699.9899.7299.9597.1292.

3、9439.40第二页，共四十页。疫苗的原理疫苗是将病原微生物及其代谢产物，经过人工减毒、灭活或利用基因工程等方法制成的用于预防传染病的自动免疫制剂。疫苗保留了病原菌刺激动物体免疫系统的特性。当动物体接触到这种不具伤害力的病原菌后，免疫系统便会产生一定的保护物质，如免疫激素、活性生理物质、特殊抗体等；当动物再次接触到这种病原菌时，动物体的免疫系统便会依循其原有的记忆，制造更多的保护物质来阻止病原菌的伤害。 免疫分析法是利用抗原抗体特异性结合反应检测各种物质（药物、激素、蛋白质、微生物等）的分析方法。第三页，共四十页。 第一节 抗原第四页，共四十页。抗原(Antigen，Ag)： 能够刺激机体产生

4、免疫应答，并且能与免疫应答产物(抗体或免疫效应细胞)特异性结合的物质。第五页，共四十页。抗原的两种基本特性： （1）免疫原性(immunogenecity)： 指抗原分子能够诱导机体产生免疫应答(产生特异性抗体及免疫效应细胞)的性质。 （2）抗原性(antigenicity，又称免疫反应性)： 指抗原分子与免疫应答产物(抗体或免疫效应细胞)发生特异性结合的性质。第六页，共四十页。 完全抗原（complete antigen)： 具有免疫原性和抗原性的物质，如：异种动物的血清、细菌、病毒等。 半抗原（hapten，又称不完全抗原incomplete antigen ）： 无免疫原性，只有抗原性的

5、物质，如：多为某些简单的小分子物质，如青霉素、磺胺。 载体（carrier）： 赋予半抗原以免疫原性的蛋白质。 半抗原 + 蛋白质 完全抗原第七页，共四十页。半抗原 +载体抗体BT完全抗原BBBT在青霉素进入体内后，如果其降解产物和组织蛋白结合，就获得了免疫原性，并刺激免疫系统产生抗青霉素抗体。当青霉素再次注射人体内时，抗青霉素抗体立即与青霉素结合，产生病理性免疫反应，出现皮疹或过敏性休克，甚至危及生命。 第八页，共四十页。第一部分 抗原的类型一根据抗原性质：完全抗原、半抗原第九页，共四十页。 二根据与人体的亲缘关系： 1.异种抗原（xenogenic Ag）： 来源于不同物种的抗原，如微生物

6、、动物蛋白对于人是异种抗原； 2.同种异型抗原（allogenic Ag）： 来源于同一物种的不同个体的抗原，如来自于另一个个体的血型抗原，主要组织相容性抗原等； 3.自身抗原（autoantigen）： 来自于自身的抗原，如眼晶状体蛋白等。第十页，共四十页。 三根据抗原的合成方式： 天然抗原：异己抗原 自身抗原 人工抗原：人工结合抗原 人工合成抗原 基因工程抗原第十一页，共四十页。第二部分 医学上重要的抗原一. 病原微生物： 1.细菌性抗原： 细胞壁：蛋白质、脂多糖等。 鞭毛：蛋白质 夹膜：多糖 2.病毒性抗原： 衣壳：蛋白 包膜：糖蛋白 3.其它：螺旋体、真菌等。第十二页，共四十页。痢疾杆

7、菌 霍乱弧菌伤寒杆菌链球菌大肠杆菌第十三页，共四十页。狂犬病病毒腺病毒口蹄疫病毒病毒（viruses）流感病毒第十四页，共四十页。真菌白色念珠菌 (1,000X oil) 疟原虫第十五页，共四十页。二细菌的外毒素与类毒素 外毒素：某些病原菌生长繁殖过程中分泌到菌体外的一种代谢产物，为次级代谢产物。其主要成分为可溶性蛋白质。 类毒素：经0.3%0.4%甲醛处理过的失去毒性保留免疫原性的外毒素。仍然具有刺激人体产生抗毒素，以起到机体从此对某疾病具有自动免疫的作用。它们广泛地应用于预防某些传染病、注射到动物体内用于制备抗毒素。 第十六页，共四十页。 三异种动物血清 异种动物的血清蛋白对人具有免疫原性

8、。 如：马的血清进入人的体内，马血清中的许多蛋白质就成为人的抗原物质。 第十七页，共四十页。四血型抗原： 已经发现并为国际输血协会承认的血型系统有30种 1. ABO血型系统： 血型 抗原（RBC） 抗体（血清） A型 A抗原 抗B抗体 B型 B抗原 抗A抗体 AB型 AB抗原 无抗A、抗B抗体 O型 无A、B抗原 抗A、抗B抗体 第十八页，共四十页。2.Rh血型系统： Rh是恒河猴（Rhesus Macacus）外文名称的头两个字母。兰德斯坦纳等科学家在1940年做动物实验时，发现恒河猴和多数人体内的红细胞上存在Rh血型的抗原物质，故而命名的。凡是人体血液红细胞上有Rh抗原（又称D抗原）的，

9、称为Rh阳性。 第十九页，共四十页。 实际意义 新生儿溶血症 孕妇(Rh-) 胎儿(Rh+) 抗Rh抗体 + 新生儿RBC (Rh+) 溶血反应 第二十页，共四十页。 第二节 抗体第二十一页，共四十页。抗体（antibody, Ab）: 机体免疫细胞被抗原激活后，由分化成熟的B细胞分泌的一类能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。免疫球蛋白（immunoglobulin, Ig）: 具有抗体活性或化学结构与抗体分子相似的球蛋白。 所有抗体都是Ig，但并非所有Ig都具抗体活性。第二十二页，共四十页。血清疗法：一种利用被动免疫的疗法。将已被免疫的动物血清（抗血清）注射到相应疾病的患者身上以达

10、到治疗的目的。这种血清称为治疗血清。恢复期病人的血清也可治疗其他病人。 第二十三页，共四十页。第二十四页，共四十页。第一部分 免疫球蛋白的结构 第二十五页，共四十页。N端C端可变区恒定区VHVLCH1CH2CH3CL铰链区V区：和抗原特异性结合的关键部位C区：决定抗体分子的异种抗原性第二十六页，共四十页。第二部分 单克隆抗体和基因工程抗体抗原决定簇：决定抗原性的特殊化学基团。大多存在于抗原物质的表面，有些存在于抗原物质的内部，须经酶或其他方式处理后才暴露出来。一个天然抗原物质可有多种和多个决定簇。如白喉类毒素有8个抗原决定簇，流感病毒有40多个抗原决定簇。 第二十七页，共四十页。一. 多克隆抗

11、体病原微生物含有多种抗原决定簇的抗原物质，此这些抗体制剂也是多种抗体的混合物，故称多克隆抗体，即针对多种抗原决定簇的抗体。易出现非特异性交叉反应。第二十八页，共四十页。二、单克隆抗体单克隆抗体是针对一个抗原决定簇的抗体，又是单一的B淋巴细胞克隆产生的。所有制备抗体的细胞都是同一个细胞的拷贝，因此其产生的抗体完全相同。第二十九页，共四十页。杂交细胞设计方案： 一个B淋巴细胞-只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞-能无限增殖第三十页，共四十页。单克隆抗体是大规模细胞培养的产物，而不是直接来自于动物血清。制备单克隆抗体的过程涉及到细胞培养、细胞融合等多种步骤。第三十一页，共四十页。杂交瘤技术产生的3

12、个技术关键1.B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的特性： B淋巴细胞（Blymphocytes）： 接受抗原刺激后，能分泌针对该抗原的特异性抗体，在体液免疫中具有重要功能。 B淋巴细胞本身是一种终末分化细胞，通常不再进行细胞分裂，存活一段时间后便会死亡-短命细胞第三十二页，共四十页。骨髓瘤细胞（myeloma cells）： 恶性增殖的转化细胞，只要营养条件适合可永远分裂和存活-长命细胞。 经筛选与驯化，现已建立多种骨髓瘤细胞株-没有抗体分泌物。第三十三页，共四十页。2.细胞融合技术：第三十四页，共四十页。3.杂交瘤细胞的筛选：不能合成DNA死亡不能合成DNA死亡第三十五页，共四十页。单克隆抗体的应用1检

13、验医学诊断试剂 作为检验医学实验室的诊断试剂，单克隆抗体有着特异性强、纯度高、均一性好等优点，并且很大程度上促进了商品化试剂盒的发展。目前，应用单克隆抗体制作的商品化试剂盒广泛应用于： 病原微生物抗原、抗体的检测肿瘤抗原的检测免疫细胞及其亚群的的检测 激素测定细胞因子的测定 第三十六页，共四十页。 1) 乙肝表面抗原检测试纸条 乙型肝炎是一种广泛的传染病。据报道, 全世界感染该病的人在两亿以上,我国乙肝表面抗原阳性者占人口的10%左右。该测试纸条能特异性地检测标本中的乙肝表面抗原, 重复性好, 质量稳定。第三十七页，共四十页。 2) 吗啡类毒品检测试纸条 吗啡是吗啡、鸦片和海洛因等吗啡类毒品的主要代谢物质, 一般在吸食后数天内可被检出。吗啡类毒品测试纸条是一种不需要任何设备的快速检测试剂, 它采用单克隆抗体技术及免疫竞争方法, 能非常方便且准确地检测样品中的吗啡。第三十八页，共四十页。2蛋白质的提纯 单克隆抗体是亲和层析中重要的配体。将单克隆抗体吸附在一个惰性的固相基质（如Speharose 2B、4B、6B等）上，并制备成层析柱。当样品流经层析柱时，待分离的抗原可与固相的单克隆抗体发生特异性结合，其余成