甘草酸防治小鼠哮喘的作用及其免疫学机理探讨

1、甘草酸防治小鼠哮喘的作用及其免疫学机理讨论【关键词】甘草酸；,支气管哮喘；,免疫调节摘要：目的观察甘草酸对小鼠哮喘的防治作用及对哮喘小鼠的血清IgE和IL4的影响。方法建立小鼠哮喘模型,观察甘草酸对小鼠哮喘模型及哮喘小鼠血清IgE和IL4影响。结果甘草酸治疗后与哮喘组小鼠相比拟小鼠肺组织的炎症病理变化明显减轻,血清IgE和IL4的程度均降低。结论甘草酸具有免疫抑制作用,可能通过调节机体的免疫功能，而发挥其抗支气管哮喘免疫炎症反响。关键词：甘草酸；支气管哮喘；免疫调节EffetfGlyyrrhizinniedelfBrnhialAsthaandIunlgyehanisAbstrat：bjetiv

2、eTexplretheeffetfglyyrrhizinniedelfbrnhialasthaandseruIgEandIL4.ethdsTheiedelfbrnhialasthaasbuiltup.Theeffetfglyyrrhizinniedelfbrnhialasthaerebserved,andthelevelfseruIgEandIL4eretested.Resultsparediththedelgrup,dereasedinthegrupfglyyrrhizlninflaataryellsinfiltratininpulnarytissuesliesftinybrnhialall

3、andseruIgEandIL4level.nlusinGlyyrrhizinhaveiunsuppressiveatin,andaninhibitbrnhialasthaiun-inflaatinbyregulatingrganisiunefuntin.Keyrds：Glyyrrhizin;Brnhialastha;Iunlgialregulatin甘草酸来源于中药甘草，是甘草的主要活性成分，已有报道证明甘草酸具有抗炎、抗过敏、抗病毒、抗变态反响、免疫调节等作用，并具有平安无毒的特点1。甘草酸可显著抑制抗原提呈细胞对T细胞的过度激活作用，抑制由TNF介导的细胞免疫作用，调节T细胞释放细胞因子

4、，使Th1/Th2保持平衡，从而调节免疫反响2。甘草酸在构造上与皮质激素相似，在体内可延长或增强泼尼松的作用，研究证明甘草是通过刺激下丘脑垂体肾上腺皮质轴发挥其皮质激素样作用3。甘草提取物甘草酸胺对超敏反响中的免疫亢进,如IgE，IgA和Ig等抗体的生成,免疫复合物的产生及活化淋巴细胞细胞因子的分泌等均有调节作用4。甘草酸那么对免疫调节介质的产生具有一定作用，并具有较强的补体抑制作用。甘草酸是一种有效的生物应答修饰剂，在增强机体免疫功能的同时抑制变态反响的发生5。临床上将甘草酸胺氯喘用于哮喘病的治疗。为了深化理解甘草酸是否有防治支气管哮喘作用，并讨论其平喘的免疫药理作用与IgE和IL4之间的关

5、系，本研究设计用卵蛋白建立小鼠哮喘模型，以泼尼松为阳性对照药，对甘草酸的平喘作用进展深化的研究。现报道如下。1材料与方法1.1动物及分组8周龄昆明种小鼠40只，雌性，体重(255)g。按随机原那么分4组，每组10只，分别为对照组、哮喘组、强的松组、甘草酸组。1.2试剂和仪器卵蛋白VA，V级，美国Siga，甘草酸：Adrih公司,IgE和IL4ELISA试剂盒深圳晶美生物工程，S-A型超声雾化器辽宁鞍山医疗电仪器厂、H202型电子天平日本TkyAD公司制造、酶标仪(美国BiRad450)。1.3小鼠过敏性哮喘动物模型的建立小鼠于第1，7，14天给予腹腔注射10g卵蛋白+2g氢氧化铝凝胶，用生理盐

6、水稀释到0.5l。第21天开场用1%卵蛋白雾化激发，通过人工调节雾化量使雾化吸入箱里卵蛋白颗粒浓度维持在1020g/3之间,1次/d，30in，连续7d。对照组小鼠用生理盐水腹腔注射和雾化。每次雾化前泼尼松组小鼠按1.5g/kg剂量给予泼尼松0.5l/只灌胃，甘草酸组小鼠给予50g/kg甘草酸0.5l/只灌胃,另两组小鼠给予0.5l/只生理盐水灌胃。1.4标本的搜集最后1次雾化吸入后6h，小鼠眼球取血,搜集血清,70保存备用。取左上肺HE染色，用作常规组织学检查。1.5对小鼠免疫器官的影响取小鼠胸腺和脾脏称重,并计算脾指数和胸腺指数。脾或胸腺指数=脾重或胸腺重(g)/体重(g)。1.6ELIS

7、A检测血清特异性lgE将小鼠血清100l分别参加待测品孔每孔中,将反响板充分混匀后置3760in,用洗涤液将反响板充分洗涤46次，向滤纸上印干。每孔加酶标抗体工作液100l,将反响板置3760in。再次洗板同前。每孔参加底物工作液100l，置37暗处反响1520in，每孔参加1滴终止液混匀，在492n处测吸光值。1.7ELISA检测白细胞介素4IL4分别将小鼠血清或不同浓度标准品100l/孔参加相应孔中，空白孔除外。用封板胶纸封住反响孔，37孵育90in，洗涤4次。除空白孔外，参加生物素化抗体工作液100l/孔，37孵育60in，洗涤4次，除空白孔外，参加酶结合物工作液100l/孔，37孵育3

8、0in，洗涤4次。参加显色剂100l/孔避光37孵育20in，参加终止液100l/孔混匀，在450n处测吸光值。1.8统计分析实验结果以表示,采用10.0统计分析软件计算相应的统计学参数。转贴于论文联盟.ll.2结果2.1哮喘小鼠肺组织病理学观察对照组图1:细、小支气管及肺泡构造正常,支气管粘膜上皮完好,未见炎症细胞浸润;哮喘模型组图2:支气管内可见黏液栓,气道上皮下有大量嗜酸性粒细胞及淋巴细胞浸润,气道黏膜下组织水肿,纤毛上皮剥离，平滑肌增厚。肺泡隔水肿、增厚。泼尼松组图3:病理变化根本接近于对照组,支气管及肺组织构造根本正常。病变与哮喘模型组比拟，炎症细胞浸润显著减少。甘草酸组图4:支气管

9、及肺组织构造根本正常,炎症细胞浸润减少。图1对照组(HE100)(略)图2哮喘模型组(HE100)(略)图3泼尼松组(HE100)(略)图4甘草酸组(HE100)(略)2.2甘草酸组对小鼠免疫器官指数的影响结果见表1。表1甘草酸对小鼠免疫器官指数的影响(略)与对照组比拟,*P0.05，与哮喘组比拟*P0.01；n=102.3甘草酸组对小鼠血清IgE和IL4的影响结果见表2。表2甘草酸对小鼠血清IgE和IL4的影响(略)与对照组比拟,*P0.05，与哮喘组比拟*P0.01；n=103讨论本研究应用卵蛋白致敏小鼠，再给予1%卵蛋白雾化吸入以激发哮喘。结果发现哮喘组小鼠在雾化过程中不同程度出现烦躁不

10、安、呼吸急促、腹肌抽搐、二便失禁等表现。HE染色切片支气管内可见黏液栓,气道上皮下有大量嗜酸性粒细胞及淋巴细胞浸润,气道黏膜下组织水肿,纤毛上皮剥离，平滑肌增厚。肺泡隔水肿、增厚。小鼠血清中IgE和IL4明显升高。以上结果充分说明本实验建立的小鼠哮喘模型是成功的。近年来随着分子免疫学、分子生物学的开展，越来越多的证据说明免疫学功能的改变在哮喘的发病机制中起着重要作用。支气管哮喘病主要表现为IgE介导的I型变态反响性炎症性疾病，IgE的增加与哮喘的触发有关，亦与哮喘的严重程度有关。机体正常状态时Th1和Th2细胞处于平衡状态，以维持正常的细胞免疫和体液免疫功能，而患者存在Th1/Th2细胞因子间

11、失衡是哮喘发病的关键机制6。目前对相关细胞因子参与哮喘炎症调控，其中，IL4是由T细胞Th2细胞为主、B细胞、ES等免疫细胞与过敏原结合释放出来，参与效应细胞的分化、趋化和激活。IL4又名B细胞生长因子和分化因子，在B细胞合成IgE和Th2细胞分化中起重要作用。IL4对于变态反响性哮喘的重要效应在于,它可以促进ES的生长和通过上调内皮血管细胞黏附分子的表达促进ES聚集到气道7。在本实验当中泼尼松可明显减轻小鼠哮喘病症，病理变化根本接近于对照组，支气管及肺组织构造根本正常。病变与哮喘模型组比拟，炎症细胞浸润显著减少,小鼠血清IgE和IL4明显降低。甘草酸治疗后,哮喘小鼠肺组织的炎症病理变化减轻，能降低哮喘小鼠血清IgE和IL4。泼尼松治疗组和与甘草酸用药组相似。哮喘小鼠使用泼尼松激素后免疫器官，脾指数和胸腺指数明显减少，甘草酸组脾指数和胸腺指数而无明显改变。以上研究说明甘草酸有效抑制哮喘产生的气道炎症,具有免疫抑制作用,可能通过调节机体的免疫功能，而发挥其抗支气管哮喘免疫炎症反响。参考文献：1ParkHY,ParkSH,YnHK,etal.Antiallergiativityf18beta-glyyrrhetiniaid30betaDgluurnideJ.ArhPharRes.2022,27(1):57.2李，金亦涛，邱蓉丽.甘草酸类药物的研究进展及作用J.抗感染药学，202