楮实提取物体外抗氧化活性的研究

1、楮实提取物体外抗氧化活性的研究【摘要】目的讨论楮实提取物的体外抗氧化活性。方法先用80%乙醇，然后用蒸馏水对楮实进展提龋其中醇提取物依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，水提局部经醇沉、枯燥后得到楮实粗多糖。运用羟基H自由基体系、二苯代苦味基肼DPPH自由基体系和对Fe3+的复原才能实验，比拟楮实各提取物的抗氧化活性。结果楮实提取物对H自由基和DPPH自由基均有较好的去除作用，其中总醇提取物对H自由基的去除才能最强，其I50值为0.28g/l；乙酸乙酯提取物对DPPH自由基的去除效果最好，其I50值到达0.08g/l；各提取物对Fe3+均有较强的复原才能，乙酸乙酯提取物复原效果最为明显。结

2、论楮实提取物具有一定的抗氧化活性，在抗衰老方面有广泛的应用前景。【关键词】楮实；抗氧化活性；去除自由基；复原力【Keyrds】Brussnetiapapyrifera;Antixidantativity;Radialsavenging;Dexidizatin楮实子具有活血理气、补肾清肝、明目、利尿的成效，多用于腰膝酸软、虚劳骨蒸、头晕目眩、目生翳膜、水肿胀满等症1，2。一些含楮实子的经典方药经多年临床验证具有确切的抗衰老、促智作用3。机体内氧化自由基增加是导致衰老的主要原因，去除自由基可起到延年益寿的作用4。近年来研究发现楮实子油及楮实子黄酮成分有显著的抗氧化和去除及抑制氧自由基作用5；楮实子

3、红色素能显著去除超氧阴离子及羟基(H)自由基，抑制H22诱导小鼠红细胞溶血和肝匀浆自氧化，对肝线粒体也有保护作用6。但目前还未见到对楮实聚花果进展抗氧化活性评价的报道。本实验运用水杨酸法、二苯代苦味基肼自由基(DPPH)法、Fe3+复原才能的方法对楮实不同极性溶剂提取物体外抗氧化才能进展评价，为楮实更广泛地应用于医药和开发新型保健品提供理论根据。1材料与方法1.1材料与试剂药材于2022年7月采自贵州省贵阳市药用植物园，经贵阳中医学院孙庆文教师鉴定为构树Brussnetiapapyrifera(L.)Vent.的成熟果实。DPPH(百灵威公司)；抗坏血酸V、无水乙醇、H22、水杨酸、硫酸亚铁、

4、铁氰化钾、三氯化铁、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、三氟乙酸均为国产分析纯试剂，乙醇为食用级。1.2仪器与设备1.3提取与制备楮实枯燥粉碎，80%乙醇回流提取5次，每次回流2h，乙醇提取液减压浓缩至无醇味，得楮实总醇提物。取适量醇提物用水混悬后依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，各萃取液及萃取后的水层局部减压浓缩至固体，真空枯燥后得石油醚提取物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物及水层局部，作为待测样品置于枯燥器中保存。将乙醇浸提后的药材残渣在室温下挥去乙醇，参加蒸馏水，沸水浴提取5次，每次2h。合并水提液减压浓缩至一定体积，参加乙醇沉淀多糖，乙醇最终浓度80%，沉淀真空枯燥后即为楮实水提

5、粗多糖，作为待测样品置枯燥器中保存备用。1.4抗氧化活性测定1.4.1去除H自由基7采用Fentn反响，利用H22与Fe2+混合产生H自由基，在该体系中参加水杨酸捕捉H自由基并产生有色物质，该物质在510n处有最大吸收。取各萃取物50g，用无水乙醇溶解并定容至25l；取粗多糖50g用蒸馏水溶解，定容至25l，配制得2g/l的各样品质量浓度，再以该质量浓度配制成所需浓度。依次参加样品4l，9l/LFeS40.5l，9l/L水杨酸0.5l，8.8l/LH220.5l。该体系于37水浴中加热30in，于510n处测定样品吸光度Ai。用4l蒸馏水代替体系中的样品，测定得空白吸光度A0。向体系中参加蒸馏

6、水0.5l代替8.8l/LH22，测定样品本底吸光度Aj。每个质量浓度样品做3个平行，取其平均值，以V作阳性对照，按下式计算去除率：K(%)=A0-(Ai-Aj)/A0100。1.4.2去除DPPH自由基8DPPH自由基是一种稳定的自由基，在有机溶剂中呈紫色，在517n波长有较大吸收，当参加抗氧化剂一局部自由基被去除，使得在该波长下吸收减弱，可借此来评价物质的抗氧化活性。取各萃取物50g，用无水乙醇溶解并定容至25l；取粗多糖50g，用蒸馏水溶解并定容至25l，配制得2g/l的各样品质量浓度，再以该质量浓度配制成所需浓度；以无水乙醇配制0.16l/LDPPH溶液，避光保存。取3l待测样品溶液参

7、加3lDPPH溶液于25水浴中加热15in，在517n测得试样吸光度Ai。取3l蒸馏水代替样品测得空白吸光度A0。向3l样品中参加3l蒸馏水测得样品本底吸光度Aj，每个质量浓度样品做3个平行，取平均值。以V作阳性对照，按下式计算去除率：K(%)=A0-(Ai-Aj)/A0100。1.4.3Fe3+复原才能测定9取2.5l不同质量浓度的样品乙醇溶液，参加0.2l/L磷酸缓冲液2.5l及1%铁氰化钾2.5l，50水浴反响20in后急速冷却，参加10%三氟乙酸溶液2.5l混匀，4000r/in离心10in，取上清液5l，参加4l蒸馏水及0.1%Fel31l，10in后于700n处测定吸光值。以V作为

8、阳性对照。转贴于论文联盟.ll.2结果2.1对H自由基的去除作用由图1可以看出，大局部提取物对H自由基都表现出一定程度的去除才能，并在实验浓度范围内呈明显的量效关系，但各局部提取物的去除才能都弱于V。去除才能大小依次为总醇提取物氯仿提取物正丁醇提取物粗多糖水层乙酸乙酯提取物。考虑到样品本底吸收的影响，本实验样品最高浓度为1g/l，未测定更高浓度样品的去除作用。石油醚提取局部效果不明显，故未对其进展比拟分析。楮实提取物对H自由基去除活性的半去除率浓度I50，g/l值顺序为：V(0.06)总醇提取物(0.28)氯仿提取物(0.31)正丁醇提取物(0.41)粗多糖(0.74)水层局部(1.01)乙酸

9、乙酯提取物12.44。半去除率浓度与去除才能大小成负相关，即半去除率浓度越小那么去除才能越强，除乙酸乙酯提取物外，醇提物的各提取局部的半去除率浓度随着提取溶剂极性增大而增大。2.2对DPPH自由基的去除作用DPPH自由基属于比拟稳定的有机物自由基，广泛应用于测定纯抗氧化剂或植物提取物的体外抗氧化活性。以抗氧化剂V作为参照，本研究利用该法比照了提取物的DPPH自由基去除效果。从图2可看出，各个局部对DPPH自由基都表现出较强的去除才能，并在实验浓度范围内呈明显量效关系，但各局部的去除才能都低于V，乙酸乙酯对DPPH自由基的去除才能最好。由于样品本身吸收的影响较大而未对更高质量浓度进展实验。去除才

10、能大小依次为V乙酸乙酯提取物氯仿提取物水层局部正丁醇提取物石油醚提取物总醇提取物粗多糖。对DPPH自由基去除作用的半去除率浓度I50，g/l大小依次为V(0.01)乙酸乙酯提取物(0.08)氯仿提取物(0.09)水层局部(0.20)正丁醇提取物(0.32)石油醚提取物(0.34)总醇提取物(0.54)粗多糖(0.77)。乙酸乙酯提取物的效果较好，但与V仍存在较大差距。2.3对Fe3+复原才能的测定复原才能的测定，可检验化合物是否为良好的电子供给体，它所提供的电子可以使Fe3+复原为Fe2+，从而使体系溶液颜色改变，即反映出体系中氧化复原状态的改变。吸光值越大，复原力越强，抗氧化效果愈佳。由图3

11、可看出，各提取物的复原才能与其质量浓度都成正的量效关系，在浓度为0.6g/l时，各局部的复原才能大小依次为V乙酸乙酯提取物水层局部氯仿提取物总醇提取物粗多糖正丁醇提取物石油醚提取物。3讨论楮实多指桑科植物构树Brussnetiapapyrifera(L.)Vent.的球形聚花果，肉质，熟时为橙红色，味酸甜，可食用。而通常所说的中药楮实子应为楮实聚花果内的小瘦果10。构树的树叶、果实、根、乳汁均有很高的药用价值，近几年局部省份开场对构树进展产业化开发11，如湖北省开展800万亩，贵州省种植100万亩构树林，广西种植200亩。假设按每亩构树年产鲜果800kg12计算，仅贵州省年产楮实可达80万吨，资源非常丰富，具有很好的开发利用前景。随着增龄，机体抗氧化系统的抗氧化才能下降，自由基代谢产物增加。自由基在细胞内可发生多位点损伤，这些损伤的积累会促使机体老化和引