仪器分析法导论

1、关于仪器分析法导论第1页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四 色谱法是一种分离技术； 装CaCO3的玻璃柱叫色谱柱； 其中的一相固定不动，称为固定相； 另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气体或液体），称为流动相。 试样混合物的分离过程也就是试样中各组分在色谱柱中的两相间不断进行着的分配过程。 色谱法的实质是分离，它是根据混合物各组分在互不相溶的两相固定相与流动相中吸附能力、分配系数或其它亲和作用性能的差异作为分离依据的。当混合物各组分随流动相通过固定相时，在流动相与固定相之间进行反复多次分配，使吸附性能或分配系数有微小差别的物质，在移动速度上产生较大差别，从而得到分

2、离。与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。第2页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四2. 按固定相的固定方式分类固定相装于柱内的色谱法柱色谱平板色谱固定相呈平板状的色谱法纸色谱薄层色谱第3页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四3. 按分离过程的机制分类吸附色谱：利用吸附剂表面对不同组分的物理吸附性能差异分配色谱：利用不同组分在两相分配系数不同离子交换色谱：利用离子交换原理排阻色谱：利用多孔性物质对不同大小分子的排阻作用第4页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四3.色谱法的特点（1）分离效率高 复杂混合物，有机同系物

3、、异构体。手性异构体。（2） 灵敏度高 可以检测出g.g-1(10-6)级甚至ng.g-1(10-12)级的物质量（3） 分析速度快 一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分析（4） 样品用量少 (5)可用于定性和定量 第5页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四第6页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四 蛋白质中含有碳、氢、氧、氮、硫等元素。其中，氮元素极为特别：氮在绝大多数蛋白质中含量相当接近，一般为1517，平均值为16左右。因此，丹麦化学家约翰凯达尔很巧妙地想到，既然氮元素含量稳定，只要准确测量出氮的含量，便能推算出其蛋白质含量。发表于1883

4、年的此方法，无疑为蛋白质的检测做出了巨大贡献。而凯氏定氮法亦有不足之处。最大的问题在于这种方法只能检测氮含量，并不能鉴定蛋白质真伪。不难想象，只要加入含氮量高的物质，就可以骗过凯氏定氮法，轻松获得“高蛋白含量”的称号。 以三聚氰胺为例，其分子式由3个碳原子、6个氢原子和6个氮原子组成，氮含量高达66.7。而牛乳蛋白氮含量只有15.7，大豆蛋白氮含量也仅有16。毋庸置疑，在氮含量比较上，三聚氰胺胜出。难怪，有人把三聚氰胺称做“蛋白精”。 第7页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四 三聚氰胺具有轻微的生物学毒性。早在1945年，美国纽约里德勒实验室两位毒理学专家便发表论文指出，

5、长期给大鼠、兔和狗喂食大剂量三聚氰胺后，会造成其生殖、泌尿系统的损害，以及膀胱、肾部结石，并可以进一步诱发膀胱癌。 国家标准规定了高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用法、液相色谱-质谱/质谱法三种方法为三聚氰胺的检测方法，检测定量限分别为2毫克/千克、0.05毫克/千克和0.01毫克/千克。标准适用于原料乳、乳制品以及含乳制品中三聚氰胺的定量测定。 第8页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四 用来衡量色谱峰宽度的参数，有三种表示方法：（1）峰底宽(Wb)：色谱峰两边转折点所画切线与基线相交截距；拐点位于0.607h处。（2）半峰宽(W1/2)：色谱峰高一半处的宽度 ；（3）标

6、准偏差()：拐点间距离的一半，即0.607倍峰高处色谱峰宽度的一半。3. 区域宽度Wb=4 ，W1/2 =2.354 第9页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四4. 峰面积 A峰与基线延长线所包面积，A=1.065hW1/214-2-3 保留值1. 用时间表示的保留值（2）保留时间（tR） 从进样开始到色谱峰出现极大值时所需的时间；组分的保留时间就是它通过色谱柱所需的时间，也就是组分在柱内运行的时间。（1）死时间（tM） 不被固定相保留的组分，从进样到出现峰极大值所需要的时间。实际是流动相流经色谱柱所需时间，或组分在流动相中消耗的时间。 对气相色谱，tM指从进样到空气峰（对

7、热导检测器）或甲烷峰（对氢火焰检测器）最高点所经过的时间。第10页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四 习惯上，tR2 tR1，故 1，标志两峰在色谱图中的相对位置。相对保留值只与柱温和固定相性质有关，与其他色谱操作条件无关，它表示了固定相对这两种组分的选择性。3. 相对保留值（选择性因子，ri,s 或） 组分2与组分1调整保留值之比： 1. 基准组分，可以是被测物中某一指定组分，也可人为配制；2. 组分 色谱分离是基于试样中各组分在两相间平衡分配的差异。平衡分配可用分配系数和容量因子表征。第11页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四14-2-4 分配系

8、数和容量因子 组分在固定相和流动相间发生的吸附、脱附，或溶解、挥发的过程叫做分配过程。在一定温度下，组分在两相间分配达到平衡时的浓度（单位：g/mL）比，称为分配系数，用 K 表示，即： K除了与温度、压力有关外，还和组分的性质、固定相和流动相的性质有关。分配系数是色谱分离的依据。不同组分的分配系数的差异，是实现色谱分离的先决条件，分配系数相差越大，越容易实现分离。1. 分配系数（partion factor） K例：组分A、B在某气液色谱柱上K分别为495，467，哪个先出峰？第12页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四2.容量因子(capacity factor) k

9、在实际工作中，也常用分配比来表征色谱分配平衡过程。分配比是指，在一定温度下，组分在两相间分配达到平衡时的质量比： 1. 分配系数与分配比都是与组分及固定相的热力学性质有关的常数，随分离柱温度、柱压的改变而变化。 2.分配系数与分配比都是衡量色谱柱对组分保留能力的参数，数值越大，该组分的保留时间越长。 3. 分配比可以由实验测得。 容量因子也称： 容量比（capacity factor）、分配比 （partion radio）msmm第13页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四 从色谱流出曲线上，得到信息是：（l）根据色谱峰的个数，可以判断样品中所含组份的最少个数（2）根据色

10、谱峰的保留值(或位置），可以进行定性分析（3）根据色谱峰下的面积或峰高，可以进行定量分析（4）色谱峰的保留值及其区域宽度，是评价色谱柱分离效能的依据（5）色谱峰两峰间的距离，是评价固定相(和流动相)选择是否合适的依据第14页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四第15页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四 减小A、B、C三项可提高柱效； 存在着最佳流速； A、B、C三项各与哪些因素有关？14-3-2 速率理论（rate theory）- 影响柱效的因素A：涡流扩散项；B：分子扩散系数；C：传质阻力项系数； ：流动相平均线速度（cms-1） 1956年，荷兰

11、学者Van Deemter等在研究气液色谱时，提出了色谱过程的动力学理论-速率理论。第16页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四1. 涡流扩散项A A = 2dp dp：载体颗粒的平均直径：填充不均匀因子（与载体颗粒大小、分布、填充均匀性等有关）第17页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四 (1) 存在着浓度差，产生纵向扩散; (2) 扩散导致色谱峰变宽，H(n)，分离变差; (3) 分子扩散项与流速有关，流速，滞留时间，扩散; (4) 扩散系数：Dg (M载气)-1/2 ； M载气，B值。2. 分子扩散项 B / （纵向扩散项） ：弯曲因子，反映固定相

12、颗粒的几何形状对分子扩散的阻碍情况，1。 Dm：组分分子在气相中的扩散系数（cm2s-1） B = 2Dm第18页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四3. 传质阻力项 Cu 组分在固相和液相两相间进行反复分配时，遇到阻力。传质阻力包括固相传质阻力Cg和液相传质阻力CL ，液相传质阻力大于固相传质阻力。即： C =（Cg + CL）第19页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四 范第姆特方程，也叫速率方程，对色谱分离条件的选则具有指导意义。它可说明，填充均匀程度、填充物粒度、流动相种类及流速、固定液膜厚度对柱效的影响。第20页，共86页，2022年，5月20

13、日，18点56分，星期四14-5 色谱法重要关系式小结 参数 符号 测定或计算 死时间(迁移时间)，不参与分配组分 Mt 色谱图 保留时间，组分1和2 21RRt，t 色谱图 调整保留时间，组分1 tR1 MRR1ttt1-= 峰宽，组分1和2 Wb1，Wb2色谱图 柱长 L 直接测量 流速 Fc 直接测量 流(固)定相体积 Vm，Vs 填充制备记录 流(固)定相浓度 cm，cs 分析和制备记录 第21页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四参数 符号 测定或计算 线速 Mt/Lu= 流动相体积 cMmFtV= 容量因子 MMRt/)tt(k-= msVKVk= 分配系数 s

14、mVkVK= msccK= 选择因子 MR1MR2tttt-=a 1212KKkk=a 分离度 b2b1R1R2WW)tt(2Rs+-= )k1k)(1(4nRs+-=aa 塔板数 2R)Wbt(16n= 222)kk1()1(Rs16n+-=aa 板高 nLH= 保留(分析)时间 2322rk)k1()1(uHR16t+-=aa 第22页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四14-6 色谱定性和定量分析 13-7-1 定性分析1.利用纯物质定性的方法 通过对比试样中具有与纯物质相同保留值的色谱峰，来确定试样中是否含有该物质及在色谱图中的位置。不适用于不同仪器上获得的数据之间

15、的对比。第23页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四2.利用相对保留值定性 指组分与基准物的tR的比值，它仅与柱温和固定液性质有关，与其他操作条件无关。因此比保留值定性更方便、可靠。基准物：选取易得到纯品的，而且与被分析组分保留值相近的物质，如：正丁烷、正戊烷、环己烷、苯、对二甲苯、环己醇、环己酮等。 在色谱手册中都列有各种物质在不同固定液上的保留数据，可以用来进行定性鉴定。 若未知样品较复杂，可将纯物质加入到试样中，观察各组分色谱峰的相对变化。 注意：当进样量很低时，若峰不重合，峰中出现转折，或半峰宽变宽，则一般可肯定试样中不含有与所加已知纯物质相同的化合物。3.加入已知

16、物增加峰高法 第24页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四5.用经验规律和文献值定性 当没有待测组分纯标准样品时，可用文献值定 性，或 用气相色谱中的经验规律定性。第25页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四6.双柱、多柱定性 对复杂样品，组分较多，在一根柱上可能出现两组分有相同的保留值，若使用双柱或多柱，则原来在一根柱上出现相同保留值的组分，在另一柱上就可能出现不同的保留值，从而实现定性。7.与其他方法结合 小型化的台式色质谱联用仪（GC-MS；LC-MS） 色谱-红外光谱仪联用仪； 组分的结构鉴定SampleSample 58901.0 DEG/MI

17、NHEWLETTPACKARDHEWLETTPACKARD5972AMass Selective DetectorDCBA ABCDGas Chromatograph (GC)Mass Spectrometer (MS)SeparationIdentificationBACD第26页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四13-7-2 定量分析 定量分析依据：操作条件一定时，被测组分的质量（或浓度）与检测器给出的响应信号成正比，即 定量分析要解决三个问题： 准确测量检测器的响应信号 峰面积或峰高； 准确求得比例常数 校正因子； 正确选择合适的定量计算方法，将测得的峰面积或峰高换

18、算为 组分的百分含量。第27页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四 （2）外标法外标法也称为标准曲线法。 外标法不使用校正因子，准确性较高； 操作条件变化对结果准确性影响较大； 对进样量的准确性控制要求较高，适用于大批量试样的快速分析。特点及要求：第28页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四（3）内标法 内标法是将一定量的纯物质作为内标物加入到准确称量的试样中，根据试样和内标物的质量以及被测组分和内标物的峰面积求出被测组分的含量。内标物要满足以下要求： 试样中不含有该物质，与被测组分性质比较接近，不与试样发生化学反应； 出峰位置应位于被测组分附近，且无组

19、分峰影响； 质量与被测物质接近，以保持色谱峰大小差不多。第29页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四内标法特点 准确性较高，操作条件和进样量的稍许变动对定量结果的影响不大； ms/m比值恒定，进样量不必准确； 适宜于低含量组分的分析，且不受归一法使用上的局限。 缺点：每次分析要准确称量内标物和试样的质量，对分离度的要求增高。第30页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四 （1）归一化法 特点及要求： 归一化法简便、准确； 进样量的准确性和操作条件的变动对测定结果影响不大； 仅适用于试样中所有组分全出峰的情况。3. 常用的几种定量方法 试样中所有组分的含量之

20、和按100%计算，以它们相应的色谱峰面积或峰高为定量参数。第31页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四色谱法导论小结 一.掌握 1.色谱过程、色谱图。 2.有关术语：基线、色谱峰、峰高、峰底宽度、半峰宽、 峰面积。 3.保留值和选择性、柱效率和峰扩展、分离度及分离度公式。 4.色谱定性和定量分析方法。 二.理解 1.塔板理论和塔板、板高和塔板数。 2.速率理论和涡流扩散、分子扩散、传质阻力。 3.范第姆特方程（速率方程）。 三.了解 1.色谱分类法、色谱法的发展。 2.色谱法分析的特点。第32页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四1.载气系统 : 形成干

21、净、有恒定压力和流速的载气流，包括气源、气体净化、气体流速控制和测 量 2.进样系统:进样器和汽化室，汽化室可控制温度为20400 3.色谱柱:完成样品的分离，包括柱箱、恒温控制装置 4.检测器:将浓度或质量信号 电信号，包括检测器，控温装置 5.记录系统:将电信号放大,记录出色谱图,经数据处理得出结果，现用色谱工作站3、气相色谱法气路色谱柱进样检测器数据记录与处理第33页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四二. 分离原理3、气相色谱法 气相色谱分离过程是在色谱柱内完成的。固定相固体吸附剂担体和固定液分离原理吸附与脱附溶解与挥发1. 分离原理 第34页，共86页，2022年

22、，5月20日，18点56分，星期四三. 气相色谱固定相及其选择有活性的多孔固体支持物(担体)+固定液气-固色谱固定相气-液色谱1. 气-固色谱活性多孔固体固体吸附剂 硅胶、氧化铝、碳质、分子筛等 高分子聚合物 以二乙烯基苯为单体交联聚合 而成的小球3、气相色谱法第35页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四2. 气-液色谱担体+固定液提供一个大的惰性表面，承载固定液。3）热稳定性好，有一定的机械强度1）多孔性，表面积大，颗粒及孔径均匀2）表面化学惰性，无吸附和催化性能 功能:要求：分类非硅藻土型担体硅藻土型担体红担体（天然硅藻土） 白担体（天然硅藻土 +CaCO3）3、气相色

23、谱法担体第36页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四固定液：(1) 要求操作温度下，呈液态，粘度低；挥发性小，热稳定性高；能牢固地吸附在担体表面，形成均匀和结构稳定的薄层；化学稳定性好，对组分有适当的溶解能力，并具有高选择性。一般是高沸点有机物3、气相色谱法第37页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四固定液类型极性应用特点固定液举例烃类最弱非极性化合物角鲨烷硅油类极性范围广应用范围广SE-30、SE-54聚乙二醇类强极性强极性化合物PEG-20M酯类中强极性价廉苯二甲酸二壬酯腈类强极性极性化合物3-一氧二丙腈特殊固定液分离异构体有机皂土3、气相色谱法(2

24、) 固定液分类及其应用第38页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四(4) 固定液的选择“相似相溶” 的原则非极性固定液按沸点由低至高出峰极性固定液按极性由小至大出峰中等极性固定液先非极性，后极性出峰氢键型固定液按氢键由弱至强出峰特殊固定液样品固定液试液出峰顺序非极性组分极性组分极性和非极性的混合物含氢键的组分复杂组分3、气相色谱法第39页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四3、气相色谱法2. 氢火焰离子化检测器（FID）(1) 特点 结构简单，选择性检测器，对有机物响应，灵敏度高，是目前应用最广泛的色谱检测器之一。(2) 结构第40页，共86页，2022

25、年，5月20日，18点56分，星期四3、气相色谱法第41页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四(3) 原理 蒸气分子受激发后被离子化，在电场作用下定向运动形成离子流，然后进行放大和记录。 (4) 操作条件的选择气体流量 载气:氢气:空气=1:1:10气体纯度：要求高使用温度：大于803、气相色谱法第42页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四2. 高效液相色谱法的特点高压：用高压泵使流动液能迅速通过色谱柱高效：与单位长度气相柱效能比高十多倍高灵敏度：最小检测量可达10-9 g，甚至10-11 g高速：配备高压输液设备，流速达1ml/min。应用范围广泛：可

26、分析80%有机化合物“四高” “一广” 4、高效液相色谱法可用于高沸点的、不能气化的、热不稳定的以及具有生理活性物质的分析 第43页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四自动进样100样品盘/机器手/自动洗针机械手样品盘自动进样器第44页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四柱温箱外挂架色谱柱第45页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四二. 高效液相色谱仪高压输液系统进样系统分离系统检测系统4、高效液相色谱法第46页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四色谱柱是液相色谱的心脏部件色谱柱柱管：固定相：不锈钢、铝、铜等柱长5

27、30cm，内径为45mm常用分离柱：柱体为直型不锈钢管4、高效液相色谱法第47页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四4检测系统 对被分离组分的物理或化学特性有响应，如紫外、荧光、折光指数测器等4、高效液相色谱法第48页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四1. 紫外检测器(2) 优点：是高效液相色谱仪的标准配置应用最广，对大部分有机化合物有响应。灵敏度高，可检测10-9gmL-1的物质线性范围宽，104105对温度及流动相的流速改变不敏感适合梯度洗提4、高效液相色谱法(1) 原理：朗伯比尔定律。第49页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期

28、四固定波长的紫外检测器可变波长的紫外检测器二极管阵列检测器(3) 紫外检测器分类4、高效液相色谱法第50页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四(A) 固定波长的紫外检测器4、高效液相色谱法第51页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四 (B) 可变波长的紫外检测器4、高效液相色谱法第52页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四(C) 光电二极管阵列检测器一系列光电二极管，一个二极管对应接受光谱上约1nm谱带宽的单色光，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图。4、高效液相色谱法第53页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，

29、星期四三. HPLC主要分离类型及其原理 化学键合相色谱法 液固色谱法 离子交换色谱法 体积排阻色谱法 4、高效液相色谱法第54页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四 利用化学反应将固定液的官能团键合在载体表面形成固定相的色谱法。 特点 1）固定相不易流失，使用周期长 2）固定相的稳定性好，化学性能好 3）柱效高；重现性好； 4）载样量大 5）适于梯度洗脱4、高效液相色谱法1. 化学键合相色谱法第55页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四4、高效液相色谱法根据化学键合相与流动相极性的相对强弱(1) 正相键合相色谱法：固定相：极性键合相，如氰基（CN）流动

30、相：非极性或弱极性溶剂，如烷烃适用范围：分离油溶性或水溶性的极性或 强极性化合物分离原理：分配+吸附分离选择性：极性强的组分,后洗脱出柱。流动相的极性增强，洗脱能力增加，使组分tR 减小。第56页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四(2) 反相键合相色谱法：固定相：非极性键合相，如C8柱，C18柱流动相：极性溶剂，甲醇-水、乙腈-水等适用范围：分离非极性、极性和离子性化合物分离选择性：极性强的组分先洗脱出柱。正相与反相的出峰顺序相反4、高效液相色谱法第57页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四(3) 固定相 4、高效液相色谱法固定相应符合下列要求：颗粒细

31、且均匀；传质快；机械强度高，能耐高压；化学稳定性好，不与流动相发生化学反应。第58页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四4、高效液相色谱法 键合固定相类型 非极性键合相 ： 非极性烃如C18,C8与苯基等键合在硅胶表面 用于反相色谱；弱极性键合相： 醚基和二羟基等键合相 用于反相或正相色谱 极性键合相： 常用氨基氰基键合相键合硅胶 一般用于正相色谱 第59页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四(4) 流动相4、高效液相色谱法要求与固定相不发生化学反应对试样有适宜的溶解度与使用的检测器要有相容性纯度高，粘度小，沸点不能太低，价格便宜 第60页，共86页，2

32、022年，5月20日，18点56分，星期四流动相的强度和选择性溶剂的极性（强度）正相色谱：溶剂极性越强，洗脱能力越强 反相色谱：极性弱的溶剂洗脱能力强 溶剂的选择性不同种类的溶剂，分子间的作用力不同，故选择性不同 混合溶剂（二元或多元流动相）4、高效液相色谱法第61页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四溶剂的种类 正相：正己烷、正庚烷、乙醚、二氯甲烷、氯仿等，己烷为主体，加入质子接受体乙醚或甲基叔丁基醚，质子给予体氯仿，偶极溶剂二氯甲烷 反相：水、甲醇、乙腈、四氢呋喃、乙醇及其混合物等，以水为主体，加入质子接受体甲醇，质子给予体乙腈，偶剂溶剂四氢呋喃。4、高效液相色谱法第6

33、2页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四2. 液固色谱法 (1) 分离原理 以固体吸附剂为固定相、液体为流动相的液相色谱法。由于溶质分子和流动相分子在吸附剂表面的吸附活性中心上进行竞争吸附，这种竞争吸附形成不同溶质在吸附剂表面的吸附、解吸平衡。平衡常数的不同导致不同溶质得以分离。4、高效液相色谱法第63页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四 非极性固定相：活性炭、高分子多孔微球、碳多孔微球等 原理：吸附+分配，蒹小孔凝胶作用 特点：柱选择性好，峰形好，柱效低 适用：分离弱极性化合物 （2）固定相 极性固定相：硅胶、氧化镁、氧化铝等 原理：吸附 特点：峰易

34、拖尾 适用：分离极性化合物4、高效液相色谱法第64页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四硅胶为固定相时：以弱极性的正构烷烃为主体，加入二氯甲烷等中等极性溶剂调节合适的洗脱强度。可用水对硅胶进行减活处理，或加入四氢呋喃、乙腈、甲醇、异丙醇等改性剂（3）流动相4、高效液相色谱法第65页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四(4) 应用中等分子量的油溶性样品如油品、脂肪、芳烃等不同极性取代基的化合物结构异构体和几何异构体混合物的分离4、高效液相色谱法第66页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四3. 离子交换色谱法和离子色谱法 4、高效液相色谱

35、法(1）分离机理试样离子与离子交换树脂上的离子发生反应： 阳离子交换：R-SO3-H+M+=R-SO3-M+H+ 阴离子交换：R-NR3+Cl-+X-=R-NR3+X-+Cl- 不同的离子与树脂离子的交换能力（亲和能力）不同，亲和力越大，离子越难洗脱，从而得以分离。第67页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四（2）固定相 离子交换树脂，根据功能基分为 强酸型（磺酸基团） 强碱型（季铵基） 弱酸型（羧酸） 弱碱型（伯、仲、叔胺）4、高效液相色谱法第68页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四（3）流动相 双柱抑制型：分离阳离子，一般采用无机酸如HCl，HNO

36、3等；分离阴离子，一般采用NaOH、NaHCO3/NaCO3。 单柱非抑制型：分离阳离子，用低浓度的HCl，HNO3等；分离阴离子，可用苯甲酸及其盐、酒石酸、柠檬酸等4、高效液相色谱法第69页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四 （4）应用分析无机阴离子的首选方法还可用于分析无机阳离子，有机酸、碱，糖类、蛋白质等。4、高效液相色谱法第70页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四一、概述GCHPLC应用范围能气化、热稳定、低沸点的物质热不稳定、高沸点、离子型的物质热力学理论较成熟正在发展中分析成本低高分离能力与柱的类型有关较高4、高效液相色谱法1. 高效液相

37、色谱与气相色谱的比较第71页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四第一节 基本知识一、质谱原理 基本原理：使待测的样品分子气化，用具有一定能量的电子束（或具有一定能量的快速原子）轰击气态分子，使气态分子失去一个电子而成为带正电的分子离子。分子离子还可能断裂成各种碎片离子，所有的正离子在电场和磁场的综合作用下按质荷比（m/z）大小依次排列而得到谱图。使气态分子转化为正离子的方法：EI源、CI源等EI： electron impact ionization，电子轰击法CI：chemical ionization 化学电离第72页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星

38、期四二、质谱仪 (mass spectrograph or spectrometry)入口系统离子源(电离和加速室)质量分析器(电分析器、磁分析器)检测、记录系统整个系统在高真空下运行第73页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四质谱仪基本构成质谱仪核心部件1. 真空系统： 10-4 10-6 Pa；2. 进样系统； 3. 电离源；4. 质量分析器：第74页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四甲苯质谱图质谱图由横坐标、纵坐标和棒线组成。第75页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四横坐标标明离子质荷比（m/z）的数值，纵坐标标明各峰的相对强度，棒线代表质荷比的离子。图谱中最强的一个峰称为基峰，将它的强度定为100。丁酮的质谱图第76页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星期四2. 质谱术语 质荷比（mass-to-charge ratio , m/z ）： 通常情况下，z =1 峰的强度或相对丰度（Relative Abundance）： 相对于最强峰的强度 基峰：base peak 质谱图中的最强峰， RA=100第77页，共86页，2022年，5月20日，18点56分，星