乳酸菌的生理生化特性介绍

1、 HYPERLINK 1.形态和和培养特特征观察察 采用牛肉肉膏蛋白白胨培养养基,将已纯化后的甘甘油菌种种活化后后于37下培养2024hh ,并进行行革兰氏氏染色及及菌体形形态和菌菌落特征征的观察察。染色色方法参参照微生生物鉴定定实验指指导2.生长条条件试验验 (1)耐盐盐性试验验(NaaCl 浓度:0. 855 、1. 20 和1. 71) (mmol/ L) ;(2)耐酸酸碱试验验(p H :4. 3 、5. 7 、6. 8 、8. 4 、8. 6 和8. 7) ;(3)温度度梯度试试验(温度: 110、30、40、50、55、60和65) 。分别将参试试菌接种种于以上上处理的的液体培培养

2、基中中培养48 h ,记录生生长状况况。3.生理生生化试验 过氧化氢氢酶测定定将实验菌接接种于PGY培养基基斜面上上,377培养20h24hh,取一环环接种的的培养物物,涂于干干净的载载玻片上上,然后在在其上滴滴加3%15%的过氧氧化氢,有气泡泡则为阳阳性反应应,无气泡泡为阴性性反应。葡萄糖产产酸产气气实验在PY基础础培养基基内加入入30g葡萄糖糖和5%吐温-800,1.6g/1000mL的溴甲甲酚紫1.44mL作指示示剂, 在培养养基内放放置一小小倒管,分装试管管置37培养24hh, 经培养养后,指示剂剂变黄表表示产酸酸,倒管内内出现气气泡,表示产产气。淀粉水解解实验接种新鲜的的菌种于于含有

3、0.55g可溶性性淀粉的PY基础培培养基中,取少许许培养液液于比色色盘内,同时取取未接种种的培养养液作对对照,分别在在其中加加入卢哥哥氏碘液液.不显色色表示淀淀粉水解解,显蓝黑黑色或蓝蓝紫色时时,表示淀淀粉未水水解或水水解不完完全。明胶液化化实验将实验菌接接种于明明胶基础础培养基基中,置37培养,以一支支未接种种的试管管作为对对照。将将接种的的和未接接种的对对照管置置于冰箱箱或冷水水中,等待对对照管凝凝固后记记录实验验结果,反复观观察对比比多次。如如对照管管凝固时时,接种管管液化为为阳性反反应,凝固为为阴性反反应甲基红（M.R）试验验接种实验细细菌于PYG培养基基，于37培养2天后，于于培养物

4、物中加入入几滴甲甲基红酒酒精溶液液，如呈呈红色，表表示阳性性。乙酰甲基基甲醇V-P实验接种新鲜的的实验菌菌种于培培养基中中, 337培养2天后,取培养养液1mL在其中中加入1mll 100的NaOOH，混匀匀，再加加入34滴2%氯化铁铁溶液。数数小时后后，培养养基表面面的下层层出现红红色者，为为阳性柠檬酸盐盐取幼龄菌种种接种于于柠檬酸酸盐斜面面培养基基上，适适温培养养37天，培培养基呈呈碱性（蓝蓝色）者者为阳性性反应，不不变者则则为阴性性酪素水解解试验牛奶平板的的制备：取5g脱脂奶奶粉加入入50mmL蒸馏水水中（或或用50mmL脱脂牛牛奶），另另称1.55g琼脂溶溶于50mmL蒸馏水水中，将将

5、两液分分开灭菌菌。待冷冷至4550时，将两液液混匀倒倒平板，即即成牛奶奶平板。将将平板倒倒置过夜夜，使表表面水分分干燥，然然后将菌菌种点接接在平板板上，每每皿可点点接35株菌。适适温培养养1、3、5天，记记录菌落落周围和和下面酪酪素是否否已被分分解而呈呈透明。配配制该培培养基时时，切勿勿将牛奶奶和琼脂脂混合灭灭菌，以以防牛奶奶凝固厌氧生长长测定将菌种接入入营养肉肉汤平板板后,用密封封带包好好放入CO2培养箱37培养2天后,观察生生长情况况,生长则则为阳性性(10)厌厌氧硝酸酸盐产气气接种封油：以斜面面菌种用用接种环环接种后后，用凡凡士林油油（凡士士林和液液体石蜡蜡为1:1）封管管，封油油的高度

6、度约1厘米。必必须同时时接种不不含有硝硝酸钾的的肉汁胨胨培养液液作对照。观察结果：培养27d，观察察在含有有硝酸钾钾的培养养基中有有否生长长和产生生气泡。如如有气泡泡产生，表表示反硝硝化作用用产生氮氮气，为为阳性反反应。但但如不含含硝酸钾钾的对照照培养基基也可产产生气泡泡，则只只能按可可疑或阴阴性处理理。(11)石石蕊牛奶奶的反应应牛奶中主要要含有乳乳糖和酪酪蛋白，在在牛奶中中加入石石蕊是作作为酸碱碱指示剂剂和氧化化还原指指示剂。石石蕊在中中性时呈呈淡紫色色，酸性性时呈粉粉红色，碱碱性呈蓝蓝色，还还原时则则自上而而下地褪褪色变白白。观察察其产酸酸、产碱碱、胨化化、酸凝凝固、凝凝乳酶凝凝固、还还

7、原情况况(12)糖糖发酵实实验将需要测定定的糖或或醇类等等碳水化化合物加加入PY基础培培养基中中,按表分分装含5mL培养基的的试管.分别取0.22mL,被鉴定定菌株接接到灭菌菌后的碳碳水化合合物培养养基中37培养24hh,振荡培培养。检检测时取取培养液液少许置置于比色色盘内,同时取取未加碳碳水化合合物的PY培养液液作为对对照,滴加试试剂比较较颜色的的变化,记录产产酸的强强弱.附一些培养养基：PY培养养基（1000mL）：蛋蛋白胨1.00g,酵母提提取物1.00g,无机盐盐溶液4.00mL盐溶液液成分:无水CaCCl2 0.2g,MgSSO4 200.0gg ,KK2HPPO4 1.0g, ,K

8、KH2PPO4 1.0g,NaHHCO33 100.0gg,NaaCl 2.00g(将CaCCl2和MgSSO4一起溶解解于3000mL蒸馏水水中,再加5000mL蒸馏水,一边搅搅拌一边边缓慢加加入其他他盐类.继续搅搅拌直到到全部溶溶解,加蒸馏馏水定容容至10000mLL,混合后后贮备于于4)PYG培培养基:PY在基础础培养液液内加入入1.00g葡萄糖糖营养明胶胶 蛋白胨5g、牛肉肉膏3g、明胶1200g、蒸馏馏水10000mLL、pH66.87.0；加热热溶解、校校正至pH77.47.6，分装装小管，1211高压灭菌10mmin，取出出后迅速速冷却，使使其凝固固。复查查最终pH应为6.87.

9、00柠檬酸盐盐斜面培培养基：柠檬酸酸钠 3gg NNH4HH2POO4 11g MggSO4 0.2g K2HPOO4 11g NaCCl 55g 琼脂1520gg 水10000mLL 加热溶溶解后，调pH至7，再加入1.6%溴麝香草酚蓝指示剂10mL,培养基呈绿色，分装试管，每管5mL，121灭菌30min含硝酸钾钾的营养养肉汤 加入2g硝酸钾钾入营养养肉汤4.16SS rDDNA 序列分分析 这个LZ另另外查好好了，很很多学问问。5.生长曲曲线活菌计数方方法：采采用涂布布法,进行菌菌落计数数，每隔隔一段时时间（2-4小时）测测实验九 细细菌的生理理生化试试验日期：220099-5-30来源

10、： 作者：孔庆学学字体：大大 中 小 实验九细菌的的生理生生化试验验 1目的 1.11了了解细菌菌鉴定中中常用的的生理生生化试验验反应原原理 1.22掌掌握测定定细菌生生理生化化反应的的技术和和方法 2原理 各种微微生物在在代谢类类型上表表现了很很大的差差异。由由于细菌菌特有的的单细胞胞原核生生物的特特性，这这种差异异就表现现的更加加明显。不不同细菌菌分解、利利用糖类类、脂肪肪类和蛋蛋白类物物质的能能力不同同，所以以其发酵酵的类型型和产物物也不相相同，也也就是说说，不同同微生物物具有不不同的酶酶系统。即即使在分分子生物物学技术术和手段段不断发发展的今今天，细细菌的生生理生化化反应在在菌株的的分

11、类鉴鉴定中仍仍有很大大作用。 3材料 3.1菌种 大肠埃希氏菌（Escherichiacoli）、产气肠杆菌（Enterobacteraerogenes）、普通变形杆菌（Proteusvulgaris）、枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）的斜面菌种 3.2培养基 葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖） 3.3试剂 40NaOH溶液、肌酸、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、1.6%溴甲基酚紫指示剂。 3.4器具 超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液管、杜氏小套管。 4流程 糖发酵试验V-P试验甲基红试验吲哚试验 5步骤 (一)糖类发酵试验 1目

12、的 了解不同细菌分解利用糖的能力及实验原理，并掌握其操作方法 2原理 可根据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气作为鉴定菌种的依据。是否产酸，可在糖发酵培养基中加入指示剂溴甲酚紫（即B.C.P指示剂，其pH在5.2以下呈黄色，pH在6.8以上呈紫色），经培养后根据指示剂的颜色变化来判断。是否产气，可在发酵培养基中放入倒置杜氏小管观察。 3材料 3.2菌种 大肠埃希氏菌（Escherichiacoli）、产气肠杆菌（Enterobacteraerogenes）、普通变形杆菌（Proteusvulgaris）的斜面菌种 3.培养基 葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管 流程 发酵液试管标记接种培

13、养观察记录 5步骤 5.1试管标记图9-1糖发酵产气 取分别装有葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管各不产气；产气 4支，每种糖发酵试管中均分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌和空白对照。 5.2接种培养 以无菌操作分别接种少量菌苔至以上各相应试管中，每种糖发酵培养液的空白对照均不接菌。将装有培养液的杜氏小管倒置放入试管中（图9-1），置37恒温箱中培养，分别在培养24h、48h、和72h观察结果。 5.3观察记录 与对照管比较，若接种培养液保持原有颜色，其反应结果为阴性，表明该菌不能利用该种糖，记录用“”表示；如培养液呈黄色，反应结果为阳性，表明该菌能分解该种糖产酸，记录用“”表示。培养液中

14、的杜氏小管内有气泡为阳性反应，表明该菌分解糖能产酸并产气，记录用“”表示；如杜氏小管内没有气泡为阴性反应，记录用“”表示。 （二）乙酰甲基甲醇试验(VP试验) 1目的 了解鉴别不同肠杆菌科各菌属的乙酰甲基甲醇试验原理，并掌握其操作方法 2原理 某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养液中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧，氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称VP（+）反应。 3材料 3.1菌种 大肠埃希氏菌（Escherichiacoli）、产气肠杆菌（Enterobacteraerogenes）、普通变形杆菌（Proteusvulgar

15、is）、枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）的斜面菌种 3.2培养基 葡萄糖蛋白胨培养液的试管 流程 培养液试管标记接种培养观察记录 5步骤 5.1标记试管 取5支装有葡萄糖蛋白胨培养液的试管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。 5.2接种培养 以无菌操作分别接种少量菌苔至以上相应试管中，空白对照管不接菌，置37恒温箱中，培养2448h。 5.3观察记录 取出以上试管，振荡2min。另取5支空试管相应标记菌名，分别加入35ml以上对应管中的培养液，再加入40NaOH溶液1020滴，并用牙签挑入约0.51mg微量肌酸，振荡试管，以使空气中的氧溶入，置3

16、7恒温箱中保温1530min后，若培养液呈红色，记录为V.P.试验阳性反应（用“”表示）；若不呈红色，记录为V.P.试验阴性反应（用“”表示）。 注意：原试管中留下的培养液用作甲基红试验。 （三）甲基红试验（M.R.试验） 1目的 了解鉴别肠杆菌科各菌属的甲基红试验原理，并掌握其操作方法 2原理 肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。 3材料 3.1菌种 同VP试验 3.2培养基 同VP试验 4流程 培养液指示剂观察记录结果 5步骤

17、于V.P.试验留下的培养液中，各加入23滴甲基红指示剂，注意沿管壁加入，仔细观察培养液上层，若培养液上层变成红色，即为阳性反应；若仍呈黄色，则为阴性反应，分别用“”或“”表示。 （四）吲哚试验 1目的 掌握吲哚试验(Ehrlich法)的原理和方法 2原理 有些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚(靛基质)。吲哚本身没有颜色，不能直接看见，但当加入对二甲基氨基苯甲醛试剂时，该试剂与吲哚作用，形成红色的玫瑰吲哚。 3材料 3.1菌种 测试菌株 3.2培养基 蛋白胨水培养基 3.3试剂 二甲基氨基苯甲醛溶液、乙醚。 4流程 标记试管接种培养观察记录 5步骤 5.1试管标记 取装有蛋白胨水培养液的试管5支，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。 5.2接种培养 以无菌操作分别接种少量菌苔到以