实验七 食品中总糖含量的测定

1、 实验七食品中总糖含量的测定实验目的掌握蒽酮比色法测糖的原理和方法。实验原理糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(CH0)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈1410蓝绿色。该物质在620nm处有最大吸收，在150卩g/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30卩g左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。仪器及材料3.1仪器可见分光光度计(752型)、可调试移液器或移液管、电子分析天平、水浴锅、电炉子、25mL具塞比色管3.2试剂标准葡萄糖储备液(1.0mg/ml)：称取已在80C烘箱中

2、烘至恒重的葡萄糖1.0000g,配制成1000ml溶液，即得每ml含糖为1000卩g的标准溶液。标准葡萄糖工作液(0.1mg/ml):100mg葡萄糖溶解到蒸馏水中，定容到1000ml备用。72%硫酸：72mL98%H2S04加到28mL纯净水中，并不断搅拌。0.1%蒽酮显色液：0.1g蒽酮和1.0g硫脲，置于烧杯中，在搅拌状态下，缓慢加入100ml72%H2S04，棕色瓶中低温存放两天，最好现配现用。3.3材料市售玉米粉实验步骤4.1样品处理精确称取玉米粉0.200g置于锥形瓶中，加入少量温水充分溶解并定容至1000毫升，摇匀过滤备用。4.2葡萄糖标准曲线的制作取7支干燥洁净的试管，按表1顺

3、序加入试剂，进行测定。以吸光度值为纵坐标，各标准溶液浓度(mg/ml)为横坐标作图得标准曲线。表1蒽酮比色法定糖一标准曲线的制作及样品检测0123456待测葡萄糖溶液标准葡萄糖溶液/mL00.20.4蒸馏水/mL蒽酮试剂1010100.60.81.01.2样品滤液1.0补满定容2mL1010101010迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸lOmin取出，用流水冷却，室温放置1Omin，在620nm波长下比色。以标准葡萄糖含量（ug）作横坐标，以吸光值作纵坐标，作出标准曲线。4.3样品测定吸取1.0ml已稀释的提取液于试管中，加入

4、10.0ml蒽酮试剂，平行三份；空白管以等量蒸馏水取代提取液。以下操作同标准曲线制作。根据A620平均值在标准曲线上查出葡萄糖的含量（临）。实验结果及分析5.1数据记录表2蒽酮比色法定糖-标准曲线的制作及样品检测数据表0123456待测葡萄糖溶液标准匍萄糖溶液/mL00.20.40.60.81.01.2样品滤液1.0蒸馏水/mL补满定容2mL蒽酮试剂1010101010101010沸水浴中准确煮沸10min，取出用流水冷却，室温放10minA620第一次00.0410.0840.1510.2200.2780.3560.084第二次00.0420.0830.1490.2200.2790.3570

5、.084第三次00.0420.0870.1470.2220.2820.3600.084平均值00.0420.0850.1490.2220.2800.3680.084图1糖-标准曲线0.40度光分-0.05Equationy=a+b*xAdj.R-Squa0.98434ValueStandardErrBIntercept-0.02020.01137BSlope0.30660.015770.350.300.250.200.150.100.050.000.01.01.20.20.40.60.8标准葡萄糖工乍液/mL5.2数据计算计算公式为式中：X二X100mX样品总糖含量(以匍萄糖计，mg/100g

6、)c-从标准曲线查得测定样品的糖含量，mg；m测定时相当于样品的量，g；根据数据记录(表2)计算:c384+0.22)x0.1=O.34o6g)0.3066Xx100=x100=0.17(mg/1g)m0.200根据计算可知样品的总糖含量为：17mg/100g。6.讨论与心得6.1思考题6.1.1影响检验准确性的主要因素有哪些？答：主要有样品的前处理，如称取玉米粉质量误差、溶解不够充分等；以及实验操作过程中的误差，如反应条件的控制、标准匍萄糖贮备液与标准匍萄糖工作液的配制引起的误差等；最后就是标准曲线的制备带来的误差。6.1.2水可以提取哪些糖？答：主要是水溶性糖，如匍萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖

7、等。【方法分析】蒽酮比色法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包括淀粉、纤维素等(因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应)，所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值，但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，否则会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，匍萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳

8、糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时则可避免此种误差。6.2注意事项一定要注意温度要控制在100C从100C开始准确计时10min,然后迅速冷却，于室温中平衡10min.蒽酮要注意避光保存。配置好的蒽酮试剂也应注意避光，当天配制好的当天使用。4.试管要保证干燥清洁，无残留水滴。6.3心得体会这是第四次进行食品分析与检验实验课程。实验内容是食品中总糖含量的测定。其中我主要学会了用蒽酮比色法测量总糖含量的基本操作技术，掌握了相关实验测定条件的选择，这在以后的食品分析与检验试验中是很有用的。在实验过程中我组成员各有分工，尤其注意了精确称重、按照规范使用分光光度计等一系列基本操作。同时我们也顺利完成所有实验项目。这门课程作为专业课程的配套实验，这是提高我们实验技术，掌握基本的试验方法的基本。我们会更加认真完成课程