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文档简介

1、荧光分光光度法测定荧光素钠的含量一、实验目的学习荧光分光光度法测定荧光素钠的分析原理。2.掌握荧光分光光度计的操作技术和测定荧光素钠的方法。荧光分析法，是以溶液中物质分子对光的选择性吸收为基础而建立起来的一类 分析方法。常温下，处于基态的分子吸收一定的紫外可见光的辐射能成为激发态分子，激 发态分子通过无辐射跃迁至第一激发态的最低振动能级，再以辐射跃迁的形式回到 基态，发出比吸收光波长长的光而产生荧光。在稀溶液中，荧光强度if与物质的浓度c有以下的关系：If = 2.303 0 Ebc当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度成线性关系：、=Kc这是荧光光谱法定量分析的理论依据。三、仪器及试剂仪

2、器960荧光分光光度计；LC-UV紫外检测器；微量进样器试剂二氯荧光素(分析纯);荧光素钠标准溶液配制准确称取0.05g二氯荧光素标样，配制成2500ml溶液，则此溶液浓度为 0.05pm/mL ,分别移取此溶液 2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml，于 25ml 容量 瓶中，并用蒸馏水稀释至刻度，摇匀后，待测定各标准溶液的荧光强度。荧光强度测定荧光光度计操作开启220V稳压电源至220V； 打开主机电源开关。检查氙灯电是否开启。二氯荧光素发光谱的绘制，参数设置如下：设定纵坐标设定灵敏度；设定扫描速度；发射波长 EMISSION Wavelength 250.0 nm ；激发波长范围

3、200-350 nm ；将某一浓度的二氯荧光素标液置于试样池中；扫描得到激发光谱。标准溶液及样品的测定，参数设置如下：设定纵坐标设定灵敏度;设定扫描速度；设定激发波长EXCITION Wavelength 496.0nm（从激发光谱曲线中）得 至U；发射波长范围 EMISSION Wavelength 518nm ;将1号标准溶液放入试样池中；扫描得到荧光光谱。仪器开始扫描，得到1号标准溶液的荧光强度。其余4各标准溶液和样品液 只要重复上述操作，就可以分别得到它们的荧光光谱。按各标液的荧光强 度做出I-CT作曲线。五、数据记录及计算1.列表样品编号样品浓度（pm/mL）荧光强度（IF）10.0258.720.0498.

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