食品中多环芳烃的测定（食品安全国家标准）

1、 食品安全国家标准食品中多环芳烃的测定范围本标准规定了食品中多环芳烃（萘、苊、芴、菲、蒽、荧蒽、芘、苯并（a）蒽、苯并（b）荧蒽、苯并（k）荧蒽、苯并（a）芘、茚并（1，2，3-c，d）芘、二苯并（a，h）蒽和苯并（g，h，i）苝）的液相色谱测定方法和食品中多环芳烃（萘、苊烯、苊、芴、菲、蒽、荧蒽、芘、苯并（a）蒽、苯并（b）荧蒽、苯并（k）荧蒽、苯并（a）芘、茚并（1，2，3-c，d）芘、二苯并（a，h）蒽和苯并（g，h，i）苝）的气相色谱-质谱法测定方法。本标准适用于除食品添加剂、动植物油脂外食品中多环芳烃含量的测定。本标准不适用于食品中萘挥发性较强组分的定量分析。第一法 高效液相色谱法原

2、理试样中的多环芳烃用正己烷提取，提取液浓缩至近干，乙腈溶解后，用PSA（N-丙基乙二胺）固相萃取填料和C18固相萃取填料净化，浓缩定容后，通过高效液相色谱分离，测定各种多环芳烃在不同激发波长和发射波长处的荧光强度，用外标法定量。试剂和材料注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。3.1 试剂 3.1.1 乙腈（CH3CN）：色谱纯。3.1.2 正己烷（C6H14）：色谱纯。3.1.3 丙酮（C3H6O）：色谱纯。3.1.4 硅藻土：色谱纯。3.1.5 N-丙基乙二胺固相萃取填料（PSA）：粒径40 m。3.1.6 C18固相萃取填料：粒径40 m63 m。

3、3.2 试剂配制 乙腈-丙酮混合溶剂（6+4）：量取600 mL乙腈，加入400 mL丙酮 ，混匀。3.3 标准品多环芳烃（萘、苊烯、苊、芴、菲、蒽、荧蒽、芘、苯并（a）蒽、苯并（b）荧蒽、苯并（k）荧蒽、苯并（a）芘、茚并（1，2，3-c，d）芘、二苯并（a，h）蒽和苯并（g，h，i）苝）有证标准溶液（200 g/mL），于-18 下保存。标准溶液配制 多环芳烃标准中间液（1000 ng/mL）：吸取多环芳烃有证标准溶液0.5 mL，用乙腈定容至100 mL。在-18 下保存。 多环芳烃标准系列工作液（1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、10

4、0 ng/mL ）：分别吸取多环芳烃标准中间液0.10 mL、0.50 mL、1.0 mL、2.0 mL、5.0 mL、10.0 mL，用乙腈定容至100 mL。仪器和设备4.1 高效液相色谱仪，带荧光检测器。4.2 电子分析天平：感量分别为0.1 mg和0.01 g。4.3 离心机：转速3000 r/min。4.4 涡旋振荡器。4.5 超声波振荡器。4.6 粉碎机。4.7 均质器。4.8 氮吹仪。5 分析步骤5.1 试样制备 5.1.1干样：取样品约500 g，经粉碎机粉碎、混匀，制得试样，备用。5.1.2 湿样：取样品约500 g，将其可食部分先切碎，经均质器充分搅碎均匀，制得试样，备用。

5、5.2 试样提取5.2.1 粮谷或水分少的食品称取2 g5 g（精确至0.01 g）试样于50 mL具塞玻璃离心管A中，按以下步骤处理：a）加入10 mL正己烷，涡旋振荡30 s后，放入40 超声水浴30 min；以4500 r/min离心3 min，吸取上清液于15 mL玻璃离心管B中，氮吹（温度控制在40 以下）除去溶剂，但不可吹干；离心管A下层用5 mL 正己烷重复提取两次，每次旋涡混合30 s，放入40 超声水浴5 min，以4500 r/min离心3 min，提取液合并于离心管B中，氮吹近干，加入0.5 mL乙腈后，再将正己烷吹尽。b）在离心管B中，加入2 mL乙腈，旋涡混合30 s

6、，再加入100 mg PSA和100 mg C18填料，旋涡混合30 s，以3000 r/min离心3 min，取上清液于5 mL玻璃刻度离心管C中，离心管B下层再用1 mL乙腈重复提取两遍，合并提取液于离心管C中，氮吹蒸发溶剂至近1 mL，用乙腈定容至1 mL，混匀后，过0.45 m膜，制得试样待测液。5.2.2 水产品、肉类和蔬菜等食品称取2 g5g（精确至0.01 g）试样于50 mL具塞玻璃离心管中，加1 g2 g 硅藻土，用玻棒搅匀拌干， 以下按5.2.1中 a）、b）步骤处理，制得试样待测液。5.2.3 油炸食品或熏烘烤的食品称取2 g5 g（精确至0.01 g）试样于50 mL具

7、塞玻璃离心管A中，按以下步骤处理：a）按5.2.1中 a 步骤处理。b）在离心管B中，加5 mL乙腈-丙酮混合溶剂，旋涡混合30 s，以3000 r/min离心3 min，吸取上清液于15 mL玻璃离心管C中，氮吹近干，离心管B下层再用5 mL 乙腈-丙酮混合溶剂重复提取两次，合并提取液于离心管C中，氮吹近干；c）按5.2.1 中b）步骤处理，制得试样待测液。5.3 液相色谱法参考条件 a）色谱柱：PAH C18反相键合固定相色谱柱，柱长250 mm，内径4.6 mm，粒径5 m，或同等性能的色谱柱。b）检测器：荧光检测器。c）流动相：乙腈和水；梯度洗脱程序见表1，溶剂A为乙腈，溶剂B为水。表

8、1 反相C18柱梯度洗脱程序色谱时间 min溶剂A %溶剂B /%0505055050201000281000325050d）流速：1.5 mL/min。e）检测波长：激发和发射波长见表2。 表2 多环芳烃的激发波长、发射波长及其切换色谱时间检测参数序号化合物名称时间min激发波长 nm发射波长nm1萘苊芴02703242菲蒽12.042483753荧蒽14.002804624芘苯并（a）蒽 14.852703855苯并（b）荧蒽18.932564466苯并（k）荧蒽苯并（a）芘二苯并（a，h）蒽苯并（g，h，i）苝20.222924107茚并（1，2，3-c，d）芘23.33274507f）

9、柱温：30 。g）进样量：20 L。5.4 定量测定5.4.1标准曲线的制作将标准系列工作液分别注入液相色谱仪中，测得相应的峰面积，以标准工作液的浓度为横坐标、以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。标准溶液的液相色谱图见附录A中图A.1。5.4.2 试样溶液的测定将试样待测液注入液相色谱仪中，以保留时间定性（必要时用第二法确证），测得相应的峰面积，根据标准曲线得到试样待测液中多环芳烃的浓度，平行测定次数不少于两次。如果试样待测液中被测物质的响应值超出仪器检测的线性范围，可适当稀释后测定。样品溶液的液相色谱图见附录A中图A.2。5.5 空白试验空白试验除不加试样外，采用完全相同的分析步骤、试剂和用量，

10、平行测定次数不少于两次。结果计算和表述试样中第i个多环芳烃含量以Xi 计，数值以微克每千克（g/kg）表示，按照（1）式计算：（1）式中： Xi试样中第i个多环芳烃含量，单位为微克每千克（g/kg）；Ai试样待测液中多环芳烃i的峰面积；Ci 标准工作溶液中多环芳烃i的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；V试样待测液最终定容体积，单位为毫升（mL）；Asi标准工作溶液中多环芳烃i的峰面积；m试样称样量，单位为克（g）；1000单位转换。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测XX果的算术平均值表示，含量大于等于10 g/kg，保留3位有效数字；含量小于10 g/kg，保留2位有效数字。注：计算结

11、果应扣除空白值。7 其他当试样取4 g，定容体积为1 mL时，本方法的检出限和定量限见表3。表3 液相色谱法的多环芳烃检出限和定量限 单位为微克每千克化合物蒽、苯并（a）蒽、茚并（1，2，3-c，d）芘、苯并（b）荧蒽、苯并（k）荧蒽、苯并（a） 芘、二苯并（a，h）蒽、苯并（g，h，i）苝菲荧蒽苊、芴、芘检出限0.332.00.50.65定量限1.06.01.52.0第二法 气相色谱-质谱法8 原理试样中的多环芳烃用正己烷提取，提取液浓缩至近干，乙腈溶解后，用PSA（N-丙基乙二胺）固相萃取填料和C18固相萃取填料净化，经浓缩定容后，用气相色谱-质谱联用仪进行测定，外标法定量。9 试剂和材料

12、同3。10 仪器和设备10.1 气相色谱-质谱联用仪。10.2 其余同4.2-4.8。11 分析步骤11.1 试样制备同5.1。11.2 试样提取同5.2。11.3 气相色谱-质谱法参考条件a）色谱柱：DB-5 MS，柱长30 m，内径0.25 mm，膜厚0.25 m或同等性能的色谱柱。b） 柱温度程序：初始温度90， 以20/min升温至220，再以5/min升温至320，保持2min。c） 进样口温度：250；d） 色谱-质谱接口温度：280；e） 离子源温度：230；f） 载气：氦气，纯度99.999%，1.0 mL/min； g） 电离方式：EI； h） 电离能量：70 eV； i）

13、质量扫描范围：50 amu450 amu； j） 测定方式：选择离子监测方式； k） 进样方式：分流进样，分流比1:1，2.0min后开阀；l）进样量：1.0 L；m）溶剂延迟：3 min。11.4 定性分析如果试样待测液中检出的色谱峰保留时间与标准工作溶液相一致，且选择离子的相对丰度与标准工作溶液的相对丰度两者之差不大于允许相对偏差（相对丰度50%，允许10%偏差；50%相对丰度20%，允许15%偏差；10%相对丰度20%，允许20%偏差；相对丰度10%，允许50%偏差），则可判断试样中存在对应的被测物。在上述色谱条件下，总离子流图参见附录B中图B.1。参考保留时间和特征离子见表4。表4 多

14、环芳烃的参考保留时间和特征离子序号化合物名称保留时间min选择离子目标离子特征离子丰度比1萘4.0112864，102，51100：6：8：62苊烯5.8215263，76，126100：5：17：33苊6.04153154，76，63100：94：20：84芴6.66166165，82，139100：92：9：65菲7.9817889，152，76100：9：9：96蒽8.0517889，152，76100：10：7：77荧蒽10.3120288，101，200100：6：13：228芘10.8520288，101，200100：5：16：249苯并（a）蒽14.50228101，114，2

15、26100：6：12：231014.64228101，114，226100：6：10：3611苯并（b）荧蒽18.38252113，126，250100：6：15：1612苯并（k）荧蒽18.48252113，126，250100：6：16：2013苯并（a）芘19.51252113，126，250100：10：16：2214茚苯（1，2，3-c，d）芘23.35276138，277，124100：19：22：615二苯并（a，h）蒽23.47278138，276，125100：12：30：716苯并（g，h，i）苝24.14276138，277，124100：24：23：411.5定量测定1

16、1.5.1标准曲线的制作将标准系列工作液分别注入气相色谱-质谱仪中，测得相应的峰面积，以标准工作液的浓度为横坐标、以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。11.5.2 试样溶液的测定将试样待测液注入气相色谱-质谱仪中，测得相应的峰面积，根据标准曲线得到试样待测液中多环芳烃的浓度，平行测定次数不少于两次。如果试样待测液中被测物质的响应值超出仪器检测的线性范围，可适当稀释后测定。11.5.3 空白试验空白试验除不加试样外，采用完全相同的分析步骤、试剂和用量，平行测定次数不少于两次。分析结果的表述试样中第i个多环芳烃含量以Xi 计，数值以微克每千克（g/kg）表示，按照（2）式计算：（2）式中： Xi试样中

17、第i个多环芳烃含量，单位为微克每千克（g/kg）；Ai试样待测液中多环芳烃i的峰面积Ci 标准工作溶液中多环芳烃i的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；V试样待测液最终定容体积，单位为毫升（mL）；Asi标准工作溶液中多环芳烃i的峰面积；m试样称样量，单位为克（g）；1000单位转换。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测XX果的算术平均值表示，含量大于等于10 g/kg，保留3位有效数字；含量小于10 g/kg，保留2位有效数字。注：计算结果应扣除空白值。13 其他当试样取4 g，定容体积为1 mL时，本方法的检出限和定量限见表5。表5 气相色谱-质谱法的多环芳烃检出限和定量限 单位为微克每千克化合物名称苊、苊烯、蒽、荧蒽、苯并（b）荧蒽、苯并（k）荧蒽苯并（a）蒽、苯并（a） 芘、苯并（g，h，i）苝菲、芘芴、茚并（1，2，3-c，d）芘、二苯并（a，h）蒽检出限0.850.61.51.1定量限2.61.84.53.3附录A多环芳烃的液相色谱图图A.1给出了多环芳烃标准溶液的液相色谱图1萘 2苊 3芴 4菲5蒽 6荧蒽 7芘 8苯并（a）蒽9 10苯并（b）荧蒽 11苯并（k）荧蒽 12