植物组织培养第三章-植物器官和组织培养

第四章

植物的器官和组织培养陈传红制作

2007/5第一页，共三十七页。本章内容提要：一、器官和组织培养基本程序二、植物营养器官培养三、植物繁殖器官培养四、植物组织培养陈传红制作

2007/5第二页，共三十七页。概念什么是器官培养？是指对植物某一器官的全部或部分或器官原基进行离体培养技术分为：营养器官和繁殖器官培养。包括:根、茎、叶、花、果实、种子。什么是组织培养（即狭义的）？包括分生组织、表皮组织、薄壁组织等及产生的愈伤组织的培养陈传红制作

2007/5第三页，共三十七页。第一节器官和组织培养基本程序包括以下几方面：无菌外植体的获得初代培养物的建立形态发生和植株再生培养物的观察记录。陈传红制作

2007/5第四页，共三十七页。1、茎尖、茎段、叶片的灭菌茎尖、茎段及叶片等的消毒：用清洁剂清洗75%酒精浸泡10-20min无菌水洗2-3次或Naclo或升汞泡10-15min无菌水洗3-4次2、根、块茎、鳞茎的灭菌（灭菌较困难）自来水冲洗纯酒精漂洗升汞浸5-10min或2%Naclo液浸10-15min无菌水洗3次，待用。

一、无菌外植体的获得陈传红制作

2007/5第五页，共三十七页。3、花蕾的灭菌自来水冲洗70%酒精浸泡数秒钟无菌水洗2-3次漂白粉上清液浸10min无菌水洗2-3次，待用。4、果实、种子的灭菌果实和种子的消毒：自来水冲洗10-30min70%酒精漂洗2%Naclo液浸10min无菌水2-3次取出种子培养，待用。陈传红制作

2007/5第六页，共三十七页。二、初代培养物的建立1、无菌环境外植体处理：表面灭菌+抗生素环境要清洁。无菌的范畴：经过高温灼烧或蒸煮过后的物体，或经其它物理的或化学灭菌方法处理过后的物体，是无菌的。用于无菌操作的器械采用灼烧灭菌陈传红制作

2007/5第七页，共三十七页。2、规范操作3、条件合适培养基种类、激素种类与浓度、其他附加物、外植体类型等要合适。无菌操作陈传红制作

2007/5第八页，共三十七页。三、形态发生和植株再生

体细胞胚外植体

愈伤组织

植株

具根茎器官

器官分化

单极器官

先茎后根先根后茎

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2007/5第九页，共三十七页。四、培养物的观察记录1、愈伤组织诱导率（%）产生愈伤组织的外植体数/外植体总数2、胚状体的诱导率（%）产生胚状体的外植体数/外植体总数3、芽的诱导率——芽分化率（%）产生芽的外植体数/外植体总数4、根诱导率（%）发根芽数/培养芽数陈传红制作

2007/5第十页，共三十七页。第二节植物营养器官培养一、根段培养是以根为外植体进行的离体培养1、根无性系的建立根的直接增殖根的数量增加，形成主根与侧根之分根的间接增殖

愈伤组织

植株再生根的形成过程以不定根的方式进行陈传红制作

2007/5第十一页，共三十七页。2、影响离体根发生和生长的因素a培养基的种类多采用MS，½MS，B5，White等基本培养基b生长调节剂多使用NAAIBAc植物材料同植物、不同基因型、不同部位、不同年龄d培养方式

固体、固—液培养基e光照和温度fpH陈传红制作

2007/5第十二页，共三十七页。二、植物茎段培养茎段培养指不带芽和带1个以上定芽或不定芽。包括：块茎、球茎在内的幼茎切段的无菌培养。主要目的：快繁；其次也可探讨茎细胞的生理特点，以及进行育种上的筛选突变体的过程。优点：培养技术简单易行，繁殖速度较快；芽生芽方式增殖的苗木质量好，且无病，性状均一；解决不能用种子繁殖的无性繁殖植物的快速繁殖问题等。

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2007/5第十三页，共三十七页。植物的茎陈传红制作

2007/5第十四页，共三十七页。茎段培养过程健康植株上选健壮的枝梢去叶片用自来水冲洗

再生1%次氯酸钠0.1%升汞75%酒精1分钟MS培养基陈传红制作

2007/5第十五页，共三十七页。茎段培养在适当条件下可能形成：单苗丛生芽愈伤组织完整植物茎段能否增殖受到以下情况影响：生长素/分裂素的比值高有形成愈伤组织的趋势低易形成丛生芽陈传红制作

2007/5第十六页，共三十七页。月季花茎段培养陈传红制作

2007/5第十七页，共三十七页。蝴蝶兰腋芽萌发陈传红制作

2007/5第十八页，共三十七页。三、叶培养以叶器官为外植体进行的离体培养。叶器官包括：叶原基、叶柄、叶鞘、叶片、叶肉、子叶。再生成植株的方式：直接诱导形成芽，先诱导形成愈伤组织，再经愈伤组织分化成植株。

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2007/5第十九页，共三十七页。1．叶形

椭圆形扇形心形陈传红制作

2007/5第二十页，共三十七页。叶的器官培养陈传红制作

2007/5第二十一页，共三十七页。陈传红制作

2007/5第二十二页，共三十七页。方法：1）外植体消毒：幼嫩叶片冲洗干净用70％酒精10s饱和漂白粉液浸3～15min（或在0．1％L汞中浸3-5min）无菌水冲洗3～4次无菌干滤纸吸干待用。2）接种：灭菌过的叶组织切成约0．5cm见方小块或薄片(如叶柄和子叶)接种在MS或其他培养基上3)培养基：MS＋BA1-3mg／L＋NAA0．25mg／L4)培养：叶接种后培养条件为每天10-12h光照，光强1500-30001x。陈传红制作

2007/5第二十三页，共三十七页。2、影响离体根发生和生长的因素a培养基的种类多采用MS，Heller基本培养基b生长调节剂多使用NAATDZ2，4—D等c植物材料不同植物、不同基因型、不同叶龄d培养方式

固体培养e光照和温度fpH陈传红制作

2007/5第二十四页，共三十七页。第三节植物繁殖器官培养意义：可离体快速繁殖可改变染色体倍性挽救远源杂种胚诱导三倍体植株陈传红制作

2007/5第二十五页，共三十七页。一、花器官培养定义：指对植物的整朵花或花的组成部分（花托、花柄、花瓣、花丝、子房、花药、胚珠等）进行离体培养。意义：进行花性别鉴定、果实和种子发育、花形态发生等研究材料：未开放的花蕾或花柄、花托、花瓣等陈传红制作

2007/5第二十六页，共三十七页。陈传红制作

2007/5第二十七页，共三十七页。二、植物幼果培养定义：对不同发育时期的幼小果实进行离体培养。三、种子培养意义：打破休眠、缩短生活周期挽救远缘杂交、提高杂种萌发率可形成：小植株、愈伤组织、丛生芽或不定芽等陈传红制作

2007/5第二十八页，共三十七页。第四节植物组织培养定义：是指狭义的组织培养,即外植体是各种类型的组织。如分生组织、愈伤组织、薄壁组织等。1、分生组织培养分生组织包括：根尖、茎尖等顶端分生组织和形成层组织。他们具有很强的分裂与分化能力，离体培养时可以形成完整植株陈传红制作

2007/5第二十九页，共三十七页。以茎尖培养为例：茎尖培养是切取茎的先端部分或茎尖分生组织部分，进行无菌培养。这是组织培养中用得最多的一个取材部位。根据培养目的和取材大小可分为微茎尖培养和普通茎尖培养。微茎尖指带有1-2个叶原基的生长锥，其长度不超过0．5mm。普通茎尖指较大的茎尖(如几mm到几十mm)、芽尖及侧芽。特点：技术简单，操作方便，茎尖容易成活，成苗所需时间短。

陈传红制作

2007/5第三十页，共三十七页。茎尖培养步骤如下：

(1)取材

(2)消毒接种

(3)接种

(4)培养的方法和程序

①培养基

②培养条件

③继代培养

④诱导生根

(5)移栽入土

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2007/5第三十一页，共三十七页。2、愈伤组织培养愈伤组织定义：是指外植体在特定情况下产生的一种疏松或致密、无特定形态结构功能的一团无序生长的薄壁细胞。产生原因：经过灭菌或切割后，在适当的环境下产生的。一般薄壁细胞和形成层易形成愈伤组织。特点：或疏松或致密；颜色不一；可形成一些“胚胎发生丛”或胚性愈伤组织；生长迅速，通常在黑暗或弱光下进行。陈传红制作

2007/5第三十二页，共三十七页。愈伤组织陈传红制作

2007/5第三十三页，共三十七页。三、植物薄层组织培养外植体材料：薄细胞层（3~6层），在适宜条件下，可以获得不同的器官。如烟草花序轴3~6层表皮及表皮下细胞组成的薄壁组织。培养条件：培养基，激素，环境因子。诱导结果：在不同培养基中可得到花芽、营养芽、根或愈伤组织。陈传红制作

2007/5第三十四页，共三十七页。花梗的薄层组织培养陈传红制作

2007/5第三十五页，共三十七页。作业：1、书本P67页：1题