薄膜过滤法微生物限度检查操作要点

薄膜过滤法微生物限度检查操作要点薄膜过滤法微生物限度检查操作要点薄膜过滤法微生物限度检查操作要点V:1.0精细整理，仅供参考薄膜过滤法微生物限度检查操作要点日期：20xx年X月薄膜过滤法微生物限度检查操作要点1.设备、仪器1.1无菌室微生物限度检查应有单独的无菌室，每个无菌室应有独立的净化空气系统。1.1.1操作间操作间应安装空气除菌过滤层流装置。环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。操作间或净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压，不低于4.9Pa。操作台上备有电子天平，乙醇灯，火柴，乙醇棉球，大、小橡皮乳头等。1.1.2缓冲间缓冲间内应有洗手盆，无菌衣、帽、口罩、拖鞋等。缓冲间内不得放置培养箱和其他杂物。1.1.3在每次操作前、后，用75%乙醇溶液或其他消毒液擦拭操作台及可能污染的死角。然后启动层流净化装置，同时用紫外杀菌灯照射30min。1.1.4无菌室操作台消毒擦拭后，先启动层流净化装置30min，将备妥的营养琼脂平板3个（经30～350C预培养48h，证明无菌落生长），以无菌方式移入操作间，置净化台左、中、右各1个，开盖，暴露30min后将盖盖上。在30～350C培养箱内倒置培养48h，取出检查。3个平板生长的平均菌落数不超过1个。1.2仪器1.2.1恒温培养箱（30～350C）、生化培养箱（23～280C）、电冰箱、蒸汽灭菌器。1.2.2玻璃器皿烧杯、培养皿、量筒、试管及塞、吸管。玻璃器皿用前应洗涤干净，吸管、量筒不挂水滴，无残留抗菌物质。玻璃器皿均应用牛皮纸（或双层报纸）严密包裹置蒸汽灭菌器高压蒸汽121℃灭菌30min，烘干。或于160℃干热灭菌2h，备用。培养基及其制备方法2.1营养琼脂培养基：取营养琼脂培养基34g，加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟。2.2玫瑰红钠琼脂培养基：取玫瑰红钠琼脂培养基30.5g，加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟。2.3胆盐乳糖培养基：取胆盐乳糖培养基36g，加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟。3稀释剂3.10.9%无菌氯化钠溶液：取氯化钠9.0g，加水溶解使成1000ml，121℃灭菌20分钟。3.2PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾3.56g，磷酸氢二钠7.23g，氯化钠4.30g，蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，分装，过滤，灭菌。4供试液的制备4.1取供试品10g，加经干热灭菌的5%吐温-800.2ml，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液稀释至100ml，边加边振摇使成混悬液，静止5分钟使分层，倾取上清液置离心机中500r/min离心5分钟，取上清液作为供试品溶液。5检查方法采用薄膜过滤法，滤膜孔径为0.45um，直径为50mm。滤膜及滤器在使用前采用121℃高压灭菌30钟。试验过程中，应保持滤膜前后的完整性。将制备好的供试液过滤，然后用100mlPH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（注意保持供试品溶液覆盖整个滤膜表面）。冲洗