除草剂的生物测定课件

《农药生物测定》多媒体课件1一、除草剂生物测定的定义及意义二、除草剂生物测定的基本原理三、除草剂生物测定技术的优缺点

野燕麦菟丝子狗芽根第三章除草剂的生物测定《农药生物测定》多媒体课件1一、除草剂生物测定的定义及意义《农药生物测定》多媒体课件2一、除草剂生物测定的定义及意义

除草剂生物测定是指利用生物体（主要指有害植物）对除草剂的反应来测定除草剂及其效果的基本方法。其目的在于：

1.筛选除草剂,了解除草剂防治的杂草种类及适用的作物范围；

2.测定除草剂在土壤中的残留动态（半衰期等），吸附、淋溶、持效期、光解、挥发速度、微生物降解等；

3.用于除草剂的定量研究；

4.了解不同除草剂在生物体内吸收、运转、作用部位、代谢速度等，为制订除草剂的安全使用标准提供科学依据。第三章除草剂的生物测定《农药生物测定》多媒体课件2一、除草剂生物测定的定义及意义《农药生物测定》多媒体课件3二、除草剂生物测定的基本原理

利用活的生物体或生物体器官，在生长、形态等方面对化学物质（除草剂）的不同反应来确定除草剂的浓度。通常选用对除草剂较敏感的生物材料作生测试材。例：单子叶植物对拉索、拿捕净十分敏感，可用稗草、马唐、谷子等来测定这类除草剂。五氯酚钠对鱼剧毒，可用鱼来测定水中五氯酚钠的残毒。第三章除草剂的生物测定稗草马唐谷子《农药生物测定》多媒体课件3二、除草剂生物测定的基本原理《农药生物测定》多媒体课件4

使生物体的敏感反应成为生物测定方法，必须符合下列条件：

1、在一定浓度范围内，生物体内对除草剂的反应随浓度的增加而有规律的增加；

2、在环境条件相似的情况下，用同一种试材重复试验时，对同种除草剂的反应可以重现。二、除草剂生物测定的基本原理第三章除草剂的生物测定《农药生物测定》多媒体课件4使生物体的敏感反应成为生《农药生物测定》多媒体课件5三、除草剂生物测定技术的优缺点（一）优点:

1.可测定不同类型的除草剂，了解其作用方式、使用剂量、降解速度等。测试材料可以是作物、杂草、动物及微生物等；

2.精确度高：测试材料和测试条件一致时，它们对不同种类及不同剂量的除草剂的反应有较高的灵敏度；

3.设备较简单。第三章除草剂的生物测定《农药生物测定》多媒体课件5三、除草剂生物测定技术的优缺点（《农药生物测定》多媒体课件6（二）缺点

1.周期长、费时间：一般3-7d，最快24h，个别需1个月以上；

2.测定条件较严格：恒温、恒湿、光照、养分等条件控制需一致；

3.除草剂中所含杂质对除草剂的药效有一定影响，有时引起药害。

因此，除草剂的生物测定技术也只能在一定条件和范围内应用。三、除草剂生物测定技术的优缺点第三章除草剂的生物测定《农药生物测定》多媒体课件6（二）缺点三、除草剂生物测定技术《农药生物测定》多媒体课件7试材的确定和培育创造试材所需的环境条件第一节除草剂生物测定试材的确定和培育第三章除草剂的生物测定《农药生物测定》多媒体课件7试材的确定和培育第一节除草剂生《农药生物测定》多媒体课件8一、试材的确定和培育1.作物试材的确定和培育

因此，应选择对除草剂敏感的作物或其器官作为生测材料。

每一种除草剂都有其应用范围和禁用对象，因为有的作物对某些除草剂有抗性，而对另一些除草剂敏感。敏感或不敏感随作物生育期和生长状况的不同也有很大差别，甚至同种作物的不同品种、一株作物的不同部位对除草剂的敏感度都有差别。《农药生物测定》多媒体课件8一、试材的确定和培育1.作物试材《农药生物测定》多媒体课件9《农药生物测定》多媒体课件9《农药生物测定》多媒体课件10

如除草醚、氟乐灵、敌草隆等以土壤处理为主的除草剂，要求试材是作物种子或刚发芽的幼苗。

为使测试结果精确一致，要求成熟度好、大小一致、发芽率高、发芽整齐、品种纯度高的作物种子。若为玉米、高粱等大穗作物最好采用同一穗的中部种子，发芽生长整齐，生物测定结果更精确。高粱种子应在试验前20h将种子放在培养皿中加适量水，置25-28℃培养箱中催芽，待芽长出1-2mm时取出备用。若用不同叶龄期的幼苗，需将种子播种在小盆钵中，播种深度一致，所用土壤要求过筛、肥力和湿度一致，放在温室中或温暖向阳处，也可用玻璃或塑料薄膜增温保湿，待幼苗出土后，生长到所需叶龄期。一、试材的确定和培育1.作物试材的确定和培育作物试材的培育：不同性质的除草剂要求不同作物试材及其生育状态。

《农药生物测定》多媒体课件10如除草醚、氟乐灵、敌《农药生物测定》多媒体课件11不同种类的杂草及其不同生育期、不同器官对不同种类除草剂及其不同浓度都有不同反应，因此，必须选择对供试除草剂较敏感的杂草或其部位为生测试材。一、试材的确定和培育2、杂草试材的确定和培育《农药生物测定》多媒体课件11不同种类的杂草及其不同生育《农药生物测定》多媒体课件12杂草试材的培育：不同种类和不同性质的除草剂的防除对象不同，作用部位也不同，所以测定不同除草剂时应选择不同的试材。

例如：敌草隆、阿拉特津、丁草胺等都是以杀刚发芽（露白）的杂草幼芽为主的土壤处理，所以，要求供试杂草种子大小一致、发芽率高、发芽整齐，否则，因杂草种子成熟度不一致、休眠期长短不一、发芽不整齐等，致使试验结果误差较大。

一、试材的确定和培育2、杂草试材的确定和培育《农药生物测定》多媒体课件12杂草试材的培育：不同种类和《农药生物测定》多媒体课件13二、创造试材所需的环境条件第一节除草剂生物测定试材的确定和培育

作物、杂草种子萌发、幼苗生长都需一定的水分、温度和氧气。有的还需要一定的光照等条件。

不同作物和杂草生长在不同季节和环境中，形成了对环境条件的不同要求。

如野燕麦生长在东北、西北较冷凉地区，因而最适生长温度为10-18℃；而绿狗尾24-32℃时2-3d内发芽，稗草起于南方，最适生长温度为17-32℃，燕麦、小麦要求较冷凉条件，大豆、芥菜要求较温暖条件，而棉花、水稻、西瓜等要求较高温度。对水分的要求除水稻需高含水量的土壤甚至淹水条件外，一般要求最大田间持水量70%-90%为宜。《农药生物测定》多媒体课件13二、创造试材所需的环境条件第《农药生物测定》多媒体课件14二、创造试材所需的环境条件

采用培养箱进行种子发芽较易控制温度。如高粱在25-28℃时15-20h就能发芽露白，稗草在30-33℃时2-3d内发芽，水稻在同样温度下3d后才能发芽。温室内的温度虽不如培养箱那样稳定，但有光照条件。温室内一般用盆钵进行试验。土壤、水分条件较接近于田间。人工气候室能较好地控制温度、湿度、光照、通风等，可满足生测中特殊试验要求的条件。小区试验更接近于生产条件，其实验结果可验证室内测定结果。《农药生物测定》多媒体课件14二、创造试材所需的环境条件15《农药生物测定》多媒体课件第三章除草剂的生物测定

猪殃殃第二节除草剂生物测定的鉴定技术一、除草剂活力的鉴定方法二、除草剂的药效评价15《农药生物测定》多媒体课件第三章除草剂的生物测定猪殃16《农药生物测定》多媒体课件一、除草剂活力的鉴定方法(一)萌芽鉴定

许多除草剂能强烈抑制敏感植物种子的萌发，或明显地抑制幼芽及胚根的生长，如除草醚、2,4-D、拉索等。随除草剂剂量的变化，抑制反应也有相应变化，能较精确的测定剂量与抑制率之间的关系。一般情况下，典型的根系或初生茎叶的受抑制症状可在处理后，培养24-96h

观察到。第二节除草剂生物测定的鉴定技术16《农药生物测定》多媒体课件一、除草剂活力的鉴定方法(一17《农药生物测定》多媒体课件（二）植株鉴定

通过测定供试植物的生长量来确定除草剂对试材的抑制程度及除草剂的活性。通常以鲜重为指标。如对试验要求较精确时，还要测定实验植株或特定部位的干重。许多光合作用抑制剂在伤害症状出现前，茎叶的生长或株高就产生了差异，它可代替称重来测定除草剂的活性。但测试植株的不同叶龄和生育期对除草剂的敏感性不同，一般禾本科植物测定叶片长度，豆科植物测定第一复叶的叶柄长度来鉴定。一、除草剂活力的鉴定方法第二节除草剂生物测定的鉴定技术第三章除草剂的生物测定17《农药生物测定》多媒体课件（二）植株鉴定一、除草剂活18《农药生物测定》多媒体课件

在肉眼可见的反应出现之前，试材生理生化的变化往往可以测定出来。植物呼吸和光合作用以及所含成分或新陈代谢物质的变化等都可以作为测定的指标。另外，以植物的耗水量表示除草剂的活性，可能比植物重量具有更大的敏感性。

测定用抑制光合作用的除草剂处理过的植株或子叶的光合速率，接触除草剂几小时后，CO2的交换量显著减少。生长在含有扑草净的培养基中的植物，其水分消耗在药害症状出现前几天就有变化，可用水分消耗量作为生测指标。黄化反应可由分光光度计或直观地测定叶绿素含量来估量。另外，也可用根系活力作为生测指标。一、除草剂活力的鉴定方法第二节除草剂生物测定的鉴定技术第三章除草剂的生物测定（三）生理和形态效应鉴定18《农药生物测定》多媒体课件在肉眼可见的反应出现之前，19《农药生物测定》多媒体课件某些除草剂对植物的典型症状可用于定性测定，症状的强度与剂量呈正比关系，也可用于定量测定2,4-D的存在与否。除草剂所引起的特殊反应常被发展成定量生物测定技术。如杀草强（ATA）引起植物向地性的丧失和棉花幼苗根毛发育的变化；当种子用红外光处理后，几种三氮苯类除草剂能促进莴苣种子的萌发和棉花胚轴的张开；杀草丹等氨基甲酸酯类除草剂能明显抑制稗草等敏感植物的心叶生长。一、除草剂活力的鉴定方法（三）生理和形态效应鉴定19《农药生物测定》多媒体课件某些除草剂对植物的典型症状20《农药生物测定》多媒体课件对照区杂草－处理区杂草对照区杂草抑制率(%)＝×100%二、除草剂药效评价第二节除草剂生物测定的鉴定技术第三章除草剂的生物测定

对不同类型的除草剂和不同种类的杂草，其防除效果的评价标准不同。常用0（或1）-5（或10）的分级法。

受处理的杂草、作物的高度、重量、密度等指标与对照按下列公式计算杂草抑制率或防治率并进行比较：20《农药生物测定》多媒体课件对照区杂草－处理区杂草对照区杂21《农药生物测定》多媒体课件欧洲杂草研究会用目测法进行9级法统计，国内逐渐采用。二、除草剂药效评价21《农药生物测定》多媒体课件欧洲杂草研究会用目测法进行9级22《农药生物测定》多媒体课件一、种子发芽测定法第三节除草剂生物测定技术第三章除草剂的生物测定二、植株生长量测定法三、生理生化指标测定法四、症状鉴定法五、愈伤组织鉴定法22《农药生物测定》多媒体课件一、种子发芽测定法第三节除草23《农药生物测定》多媒体课件一、种子发芽测定法（一）试验方法

发芽试验的容器通常为培养皿和小烧杯。使用前首先对器皿进行清洗和干热灭菌，然后加入适量药液，在发芽床上播种。发芽床：滤纸、脱脂棉或消毒过的砂子铺放在培养皿内而制成。第三节除草剂生物测定技术23《农药生物测定》多媒体课件一、种子发芽测定法（一）试验24《农药生物测定》多媒体课件一、种子发芽测定法1.供试植物种子（或在催芽前）先浸入0.2%次氯酸钠溶液中消毒15min，用自来水洗涤并用流水浸泡2-6h，再用蒸馏水洗涤数次，或在5%漂白粉溶液中消毒半小时后取出，用水冲洗干净，以防止试验过程中发霉，影响试验结果。2.药液应保持刚好湿润发芽床为宜；3.保持供试种子所需的环境条件，温度应是供试种子发芽所需要的适温。一般要求在黑暗下培养，特殊情况除外。4.不要把两种以上的种子种于同一器皿中（即同一发芽床上）。注意事项：24《农药生物测定》多媒体课件一、种子发芽测定法1.供试25《农药生物测定》多媒体课件（二）项目调查1、发芽率（%）＝药剂处理的发芽数/对照处理的发芽数×1002、生长抑制率（%）＝(对照发芽率－药剂发芽率)/对照发芽率×1003、发育异常描绘有些药剂尤其是激素类药剂可使供试生物根或茎畸形，因此应调查根或茎的膨大或卷曲等异常情况，并做详细描述或绘制特征图。一、种子发芽测定法25《农药生物测定》多媒体课件（二）项目调查一、种子发芽测定26《农药生物测定》多媒体课件（三）实例1、黄瓜幼苗形态法：是测定激素类除草剂及其他植物生长调节剂活性的常用方法，具有反应灵敏、测定范围大（0.1-l000μg/mL），操作简便等优点。（1）药剂配制：将2,4-D配制成一系列浓度的丙酮溶液；（2）发芽床制作：用1张直径11cm滤纸在药液中浸至饱和，取出挥发掉丙酮，放入直径12cm培养皿中，再在其下垫两张同样大小空白滤纸。（3）种子消毒：（4）培养：每皿放入20粒，加入12mL蒸馏水（此时培养皿中的实际浓度比原来丙酮液浓度低10倍)。盖好皿盖，置25℃恒温箱中黑暗培养。（5）形态描述、绘图、照相等：6天后取出观察黄瓜幼苗，描述、绘制、照相或印相各浓度下黄瓜幼苗的形态。一、种子发芽测定法26《农药生物测定》多媒体课件（三）实例一、种子发芽测定法27《农药生物测定》多媒体课件2、小杯法：可测定二苯醚类、酚胺类和氨基甲酸酯类、氯代脂肪酸类等除草剂的活性，但对抑制植物光合作用的除草剂则几乎不能采用。该法具有操作简便，测定周期短、范围较广的优点。一、种子发芽测定法

试材选用小麦、油菜、水稻、稗草等。以直径3.5cm，高5.0cm的玻璃杯或50mL的小烧杯为容器。杯底放一张圆滤纸片，吸取一定量的有机溶剂溶解的待测药液倒入杯内，挥发干溶剂。若以水稻、稗草等水生杂草种子为试材，在杯中加入2mL蒸馏水，若以小麦、油菜种子为材料时，则滤纸片底下放一层直径约为0.5cm大小的玻璃珠，再加入3mL蒸馏水。选择刚萌动的种子10粒，排放到滤纸片上，置28℃恒温室中培养，白天给予日光灯照。培养期间每天加入一定量蒸馏水补充挥发掉的水分。3d后分别记载株高或测定鲜重。计算抑制生长50%所需要的浓度（EC50）。（三）实例27《农药生物测定》多媒体课件2、小杯法：可测定二苯醚类、酚28《农药生物测定》多媒体课件2、小杯法一、种子发芽测定法药效的分级标准为：0级同对照1级抑制生长25%以下2级抑制生长50%以下3级抑制生长75%以下4级抑制生长75%以上然后计算每一浓度处理的抑制指数：抑制指数＝∑（级别×各级代表株数）总株数×4（最高级别）×100

将抑制指数（抑制百分数）转换为机率值，浓度（剂量）以对数值表示，求出EC50。（三）实例28《农药生物测定》多媒体课件2、小杯法一、种子发芽测定法29《农药生物测定》多媒体课件（三）实例3、高粱法4、稗草胚轴中胚轴法一、种子发芽测定法29《农药生物测定》多媒体课件（三）实例一、种子发芽测定法30《农药生物测定》多媒体课件（一）试验方法将所选试材进行催芽处理后，种植在含有供试药剂的基质中（液体基质或土壤）或在植株生长的某个适期施药，经一定时间、一定条件的培育后观察试验结果。二、植株生长量测定法第三节除草剂生物测定技术30《农药生物测定》多媒体课件（一）试验方法二、植株生长量测31《农药生物测定》多媒体课件（二）实例1、去胚乳小麦幼苗法：适用于测定光合作用抑制剂。

（1）选种：选择饱满度一致的小麦种子。（2）浸种催芽：浸种2h后，排列在铺有滤纸或纱布的搪瓷盘中，在室温20℃左右进行催芽，3~4d后苗高达2~3cm。（3）3-4d后精选高度一致的幼苗，轻轻取出，避免伤害根部，然后用镊子摘除胚乳，再用水漂洗掉附在上面的胚乳成分，准备种植。（4）用直径4.5cm、高5cm小玻璃杯为测定容器，每杯注入不同浓度供试药液3mL和稀释10倍的培养液6mL，每杯插入上述去胚乳小麦10株。（5）在室温21~26℃左右和光照下培养6~7天后观察药效。注意每天应该给每个小杯称重，补足损失的水分。（6）测量每株从芽鞘到最长叶尖的距离，求生长抑制率，继而求EC50。生长抑制率（%）＝(对照生长量－处理生长量)/对照生长量×100二、植株生长量测定法31《农药生物测定》多媒体课件（二）实例生长抑制率（%）＝(32《农药生物测定》多媒体课件2、萝卜子叶法3、番茄水培法4、叶鞘滴注法5、再生苗测重法（二）实例1、去胚乳小麦幼苗法

二、植株生长量测定法32《农药生物测定》多媒体课件2、萝卜子叶法（二）实例二、植33《农药生物测定》多媒体课件（一）藻类实验法：应用绿藻(chlorophyta)，蓝藻(cyanophyta)等微小的藻类进行有关除草剂实验的实例很多，其中小球藻法是最为普遍的一种方法。（二）浮萍法：（三）圆叶片漂浮法：植物在进行光合作用时，叶片组织内产生较高浓度的氧气，使叶片容易漂浮，而若光合作用受抑制，不能产生氧气，则叶片就难以漂浮。三、生理生化指标测定法第三节除草剂生物测定技术

利用植株在施药后的生理生化反应来作为测定的指标，亦被广泛应用，特别是近年来由于生理生化技术发展，使这一方法更为准确和灵敏。33《农药生物测定》多媒体课件（一）藻类实验法：应用绿藻(34《农药生物测定》多媒体课件

1、藻类培养——培养基的选择与制备；

2、试验法——用偏平烧瓶或三角瓶，将小球藻培养液分别定量加入三角瓶中，再定量加入一定浓度的除草剂。可通入一定流量的含3%CO2浓度的空气，也可用二层纱布封住三角瓶口。25℃下，荧光灯照明培养。

3、测定方法

（1）观察颜色变化：施药后5d观察小球藻退色变化情况。

（2）比色测定小球藻增殖率：因小球藻的增殖，培养液中的绿色逐渐变浓，用分光光度计在波长574nm下比色测定，吸光度与小球藻细胞数量间存在明显的直线关系，故可用此法测定小球藻的含量。

（3）浓缩细胞量测定：把一定量的小球藻悬浊液放入带刻度的离心管中，I800rpm离心5分钟，测定沉淀小球藻的体积。

（4）叶绿素含量测定：因小球藻对不同药剂反应不同，故其培养液中小球藻叶绿素总含量是不同的，据此，可把叶绿素提取出来，测定其含量，以此来比较药剂的毒力，并可求出LC50，即抑制叶绿体含量50%时所需要的除草剂浓度。三、生理生化指标测定法（一）藻类实验法34《农药生物测定》多媒体课件1、藻类培养——培养基的选35《农药生物测定》多媒体课件比色法测定小球藻的增殖率I．蛋白核小球藻的构造1．淀粉核

2．细胞核

3．载色体II、III．似亲孢子的形成和释放小球藻属于绿藻类其细胞中只有一个叶绿体，叶绿体中含有和高等植物一样的光合色素，如叶绿素A、叶绿素B等，也能进行光合作用（一）藻类实验法35《农药生物测定》多媒体课件比色法测定小球藻的增殖率I．蛋36《农药生物测定》多媒体课件三、生理生化指标测定法比色法测定小球藻的增殖率培养好的小球藻悬浮液5mLherbicide培养液45mL瓶口封上两层纱布250C1000lx光培养24h处理前、后分别测波长574nm下的吸光度（OD值）增值阻碍率（%）＝处理后的OD值－处理前的OD值对照的OD值－处理前的OD值×100（一）藻类实验法36《农药生物测定》多媒体课件三、生理生化指标测定法比色法测37《农药生物测定》多媒体课件（一）藻类实验法（二）浮萍法（三）圆叶片漂浮法三、生理生化指标测定法第三节除草剂生物测定技术37《农药生物测定》多媒体课件（一）藻类实验法三、生理生化指38《农药生物测定》多媒体课件四、症状鉴定法

除草剂对供试生物所产生的特异性症状。五、愈伤组织鉴定法1、培养基的制备2、外植体的选择及消毒3、接种4、培养条件5、生长量的测定第三节除草剂生物测定技术第三章除草剂的生物测定38《农药生物测定》多媒体课件四、症状鉴定法五、愈伤组织鉴定《农药生物测定》多媒体课件39第四节生物测定技术在除草剂研究中的应用一、除草剂的筛选二、作物的安全性测定第三章除草剂的生物测定三、除草剂的作用特性测定四、除草剂在土壤中淋溶的测定五、除草剂降解和持效测定六、除草剂田间药效试验评价七、除草剂混用药效测定八、除草剂药害症状的诊断《农药生物测定》多媒体课件39第四节生物测定技术在除草剂研《农药生物测定》多媒体课件40第四节生物测定技术在除草剂研究中的应用

利用除草剂的生物测定技术从大量化合物中发现除草活性化合物，是筛选新除草剂的重要手段。筛选程序为实验室初筛——盆栽实验——田间实验三个步骤。第三章除草剂的生物测定

一、除草剂的筛选《农药生物测定》多媒体课件40第四节生物测定技术在除草剂研《农药生物测定》多媒体课件41第四节生物测定技术在除草剂研究中的应用二、作物的安全性测定第三章除草剂的生物测定

以作物水稻、小麦、玉米、大豆、棉花、高粱、谷子、蔬菜等种子或幼苗进行测定。用药量一般与杀草谱试验一样。再根据除草剂性能分别于播前、播后，苗前、苗后进行药剂处理，处理1-2周后测定出苗率、生长势、药害、株高、鲜重。计算其选择性指数，以确定除草剂对作物的安全性。

一般认为，选择性指数在4级以上是比较安全的。数值越大，表示对作物的安全性越大，除草效果越好，因而中选程度也大。《农药生物测定》多媒体课件41第四节生物测定技术在除草剂研《农药生物测定》多媒体课件42

三、除草剂的作用特性测定

可研究除草剂吸收与作用部位、研究除草剂吸收与传导。

第四节生物测定技术在除草剂研究中的应用图3-2活性炭隔层示意图

研究除草剂吸收与传导时，在供试植物的某一部位涂抹除草剂，经一定时间后，把植物表面未吸收的除草剂冲洗下来进行生物测定，观察施药部位上下组织受害症状，判断其传导方向。通过根系吸收的除草剂可用水培法测定，把试材培养在含有一定浓度的除草剂溶液中，经一定时间后，测定除草剂在溶液中的剩余量，并与对照比较。也可采用同位素示踪法标记除草剂后，喷施导入试材中，用自显影法测定试材对除草剂的吸收、传导过程。《农药生物测定》多媒体课件42三、除草剂《农药生物测定》多媒体课件43

将供试植物种子放在狭长的装有土壤的淋溶槽中，在槽的左端加除草剂，自左部加水展开，展开时间和距离可因药剂及目的而异，完毕后，将槽移入培养箱中给以适宜的条件，一定时间后，可测出除草剂在土壤中淋溶状况。第四节生物测定技术在除草剂研究中的应用

四、除草剂在土壤中淋溶的测定《农药生物测定》多媒体课件43将供试植物种子放在狭长的装《农药生物测定》多媒体课件44（一）田间试验（二）盆栽实验（三）不同浓度下降解速度（四）除草剂的挥发和光解速度的测定第四节生物测定技术在除草剂研究中的应用五、除草剂降解和持效测定《农药生物测定》多媒体课件44（一）田间试验第四节生《农药生物测定》多媒体课件45五、除草剂降解和持效测定第四节生物测定技术在除草剂研究中的应用图3-3土壤降解试验方法图3-4土壤降解作用生物测定结果示意图《农药生物测定》多媒体课件45五、除草剂降解和持效测定第四节《农药生物测定》多媒体课件46（一）试验地选择

实验地点应根据除草剂将来可能推广的地区或有代表性的地点进行选择，如按大行政区分或按不同土壤类型地区分。作物应根据盆栽实验的结果确定1-3个主要作物，选择有其主要防除杂草的地中进行杀草谱试验，应避免多次施用除草剂防除杂草都无效的地块或杂草极少的地上布置实验，否则，可人工撒播重要的防除对象杂草种籽。第四节生物测定技术在除草剂研究中的应用

六、除草剂田间药效试验评价《农药生物测定》多媒体课件46（一）试验地选择第四节生物测《农药生物测定》多媒体课件47（二）方法与步骤确定除草剂用量，若用一种除草剂时，可用2-4个用量作比较，若用几种除草剂时，可分别用1-2个已知参考用量来比较。小区面积及重复：旱地小区面积一般10-30m2，重复3-4次。随机排列，第一重复的第一处理（第一小区）应为对照（不喷药区），第2、3、4重复中每个处理小区的对应位置应错开，有时第2处理是以人工除草为对照，第四节生物测定技术在除草剂研究中的应用六、除草剂田间药效试验评价《农药生物测定》多媒体课件47（二）方法与步骤第四节生物测《农药生物测定》多媒体课件48（三）喷雾例如：喷幅流量为600mL/min，设计每666.7m2喷药液共30000mL有效喷幅1m。步速：13.33m/min，即每秒走22cm，也就是每秒1m×0.22m=0.22m2；若小区面积为22m2，则应喷22m2÷0.22m2/s=100s。4个重复的药液量一次配好，用走速及时间来控制喷液量，（应事先练习步速均匀）。第四节生物测定技术在除草剂研究中的应用六、除草剂田间药效试验评价《农药生物测定》多媒体课件48（三）喷雾例如：第四节生物测《农药生物测定》多媒体课件49六、除草剂田间药效试验评价喷药后7、15、30d分别进行调查记录，一般用①数量法②重量法第四节生物测定技术在除草剂研究中的应用（四）药效调查不同杂草对除草剂的敏感程度，可用下列符号记入苗情栏：+++（很敏感），++（敏感），+（不大敏感），０（抗），④也可用目测法来评价除草剂的药效。《农药生物测定》多媒体课件49六、除草剂田间药效试验评价《农药生物测定》多媒体课件50（一）按比例混合法第四节生物测定技术在除草剂研究中的应用图3-5

A、B两药剂混用的增效作用试验中可采用如下不同处理：A份、A1/3＋B2/3、A1/2＋B1/2、A2/3＋B1/3、B份等AB直线为两剂无增无减的准线，表示两剂互不影响的药效总和，若混用各点均在准线之上，表示增效，反之即为减效。七、除草剂混用药效测定《农药生物测定》多媒体课件50（一）按比例混合法第四节生物《农药生物测定》多媒体课件51七、除草剂混用药效测定（二）杀草活力线法第四节生物测定技术在除草剂研究中的应用图3-6

A、B剂单用及混用的杀草活力通过将单用的两种药剂分别稀释成不同浓度单用和将两剂按一定比例混合的混用试验，做出三条杀草活力线。其中D为混用，A、B两线为单用，A、B两条直线间的虚线C为两剂混用无增无减的准线（1：1混用）优点：实验设计较准确，适于室内实验《农药生物测定》多媒体课件51七、除草剂混用药效测定第四节52《农药生物测定》多媒体课件

1.

进行A剂的系列浓度实验，求A点（IC50）；

2.

进行B剂的系列浓度实验，求B点（IC50）；

3.

分别在纵轴和横轴上确定A、B两点并画直线；第四节生物测定技术在除草剂研究中的应用七、除草剂混用药效测定（三）等效线法（千版法）4.

进行A剂(一定剂量)+B剂(一系列浓度)的混用实验、B剂(一定剂量)+

B剂(一系列浓度)的混用实验以及B剂(一定剂量)+A剂(一系列浓度)的混用试验，求出各混用的IC50；5.

若混用后的IC50各点均在AB线之下为增效，反之则为减效。52《农药生物测定》多媒体课件1.进行A剂的《农药生物测定》多媒体课件53八、除草剂药害症状的诊断

1.除草剂雾滴漂移2.挥发3.误用或过量使用以及使用时期不当4.异常的土壤、气候条件5.除草剂降解产物使作物受害6.混用不当产生加成效应或与其它农药混合使用而伤害作物7.长残效性除草剂：西玛津、阿拉特津、氟乐灵等造成轮作中敏感的后茬作物受害。

（一）除草剂使作物产生药害的原因第四节生物测定技术在除草剂研究中的应用《农药生物测定》多媒体课件53八、除草剂药害症状的诊断54《农药生物测定》多媒体课件触杀型药害激素型药害褪绿型药害芽期抑制型药害生长抑制型药害八、除草剂药害症状的诊断（二）区分除草剂药害的类型第四节生物测定技术在除草剂研究中的应用54《农药生物测定》多媒体课件触杀型药害八、除草剂药害症状的55《农药生物测定》多媒体课件2.1触杀型药害接触型除草剂引起叶片变黄症状接触型除草剂引起叶片出现独特斑点百草枯、杂草焚、克阔乐等触杀性除草剂产生的药害，常表现为作物表皮局部坏死，产生枯斑，这些药害斑不继续扩大，以后也不产生新斑。55《农药生物测定》多媒体课件2.1触杀型药害接触型除草56《农药生物测定》多媒体课件二甲四氯、百草敌、快杀稗等激素类除草剂，它们作用于植物的分生组织，造成细胞生长异常，导致根茎叶畸形，也会影响到抽穗、开花，使穗子、果实畸形。2.2激素型药害2,4-D的药害——叶呈鸡爪型

快杀稗药害56《农药生物测定》多媒体课件二甲四氯、百草敌、快杀稗等激素57《农药生物测定》多媒体课件2.3褪绿型药害三嗪类、取代脲类(扑草净、西玛津)除草剂，抑制作物的光合作用。一般药后7d左右，作物叶尖和叶缘开始褪绿，逐渐扩展到全叶，最后全株死亡。取代脲类和三嗪类引起的典型药害症状

57《农药生物测定》多媒体课件2.3褪绿型药害三嗪类、取代58《农药生物测定》多媒体课件

2.4芽期抑制型药害酰胺类(都尔、敌稗等)土壤处理除草剂，使作物幼芽、幼根吸收，敏感作物芽畸形死亡，已出土的幼苗心叶扭曲、萎缩，其它叶片皱缩、变黄。苗心叶萎缩58《农药生物测定》多媒体课件2.4芽期抑制型药害酰胺类59《农药生物测定》多媒体课件

2.5生长抑制型药害

磺酰脲、磺酰胺、咪唑啉酮类等抑制乙酰乳酸合成酶除草剂，它们破坏植物蛋白质的合成，作物受害后能出苗，至3～5cm后生长停止而后死亡。抗性稍强作物生长受抑，叶片黄化、畸形、扭曲。59《农药生物测定》多媒体课件2.5生长抑制型药害60《农药生物测定》多媒体课件3.1解剖诊断3.2生理诊断3.3形态诊断八、除草剂药害症状的诊断（三）除草剂造成作物药害的症状诊断第四节生物测定技术在除草剂研究中的应用60《农药生物测定》多媒体课件3.1解剖诊断八、除草剂药害61《农药生物测定》多媒体课件3.1解剖诊断解剖效应是植物内部组织的变化，在田间很难看出。61《农药生物测定》多媒体课件3.1解剖诊断解剖效应是植物62《农药生物测定》多媒体课件

3.2生理诊断失绿是叶片内叶绿体崩溃、叶绿素分解造成的。失绿症状可以发生在叶、叶尖、或叶脉及其近缘，也可全叶失绿。失绿的色调因除草剂种类和植物种类的不同而异。有完全白化苗、黄化苗，也有的仅仅是部分失绿。3.2.1失绿

个别的生理效应，如失绿、坏死在田间可以观察到。62《农药生物测定》多媒体课件3.2生理诊断失绿是叶63《农药生物测定》多媒体课件草甘膦的典型药害症状草甘膦引起新生叶片上出现浅黄色草甘膦引起新生叶片上出现浅黄色3.2生理诊断

3.2.1失绿63《农药生物测定》多媒体课件草甘膦的典型药害症状草甘膦引起64《农药生物测定》多媒体课件坏死是作物的某个部分如器官,组织或细胞的死亡。死亡部位可发生在叶、叶尖、或叶脉及其近缘，坏死部分的颜色差别也很大。

3.2生理诊断

3.2.2坏死64《农药生物测定》多媒体课件坏死是作物的某个部分如器官,组65《农药生物测定》多媒体课件3.3形态诊断大多数除草剂引起植物生长异常或根、茎、叶、花形态发生变化（如落叶、畸形叶、畸形果、植株矮化等）。形态效应是药害症状诊断的主要类型。65《农药生物测定》多媒体课件3.3形态诊断大多数除草剂引66《农药生物测定》多媒体课件

3.3.1落叶失绿和坏死严重的叶片，最后因离层形成而落叶。这种现象在果树上特别是在柑橘上最易见到。大田作物如大豆、花生、棉花等也常发生。大豆叶片部分坏死棉花叶片部分坏死3.3形态诊断66《农药生物测定》多媒体课件3.3.1落叶失绿和坏死67《农药生物测定》多媒体课件2,4-D药害左.根肿大右.健株

除草剂施用不当对烟草根部的损伤

3.3.2根畸形3.3形态诊断67《农药生物测定》多媒体课件2,4-D药害左.根肿大68《农药生物测定》多媒体课件与正常叶相比，叶形和叶片大小都发生明显变化成畸形。如苯氧羧酸类除草剂(如2、4一D)在非禾本科作物上应用会出现柳条叶、鸡爪叶，部分组织异常膨大等症状，这种情况下，常常造成生长点枯死，周缘芽丛生。

3.3.2畸形叶3.3形态诊断68《农药生物测定》多媒体课件与正常叶相比，叶形和叶片大小都69《农药生物测定》多媒体课件苯氧基除草剂药害引起叶和茎扭曲苯氧基除草剂药害导致叶片皱折僵硬

2,4-D的药害——叶呈鸡爪型

3.3.2畸形叶3.3形态诊断69《农药生物测定》多媒体课件苯氧基除草剂药害引起叶和茎扭曲70《农药生物测定》多媒体课件

3.3.3果实畸形3.3形态诊断70《农药生物测定》多媒体课件3.3.3果实畸形3.371《农药生物测定》多媒体课件对于禾本科作物、烟草等作物,其叶片生长受抑制也就伴随着植株矮化。烟草植株矮化烟草心叶受损导致植株矮化

3.3.4植株矮化3.3形态诊断71《农药生物测定》多媒体课件对于禾本科作物、烟草等作物,其72《农药生物测定》多媒体课件4.1清水冲洗4.2足量浇水4.3追施速效化肥，提高作物抵抗力4.4施解毒剂4.5用吸附剂八、除草剂药害症状的诊断（四）除草剂造成作物药害后的挽求措施第四节生物测定技术在除草剂研究中的应用72《农药生物测定》多媒体课件4.1清水冲洗八、除草剂药害73《农药生物测定》多媒体课件4.1清水冲洗当除草剂喷洒过量或临近作物敏感叶片遭受药害时，可在受害叶片上连续喷洒几次清水，清除或减少作物叶片上药物的残留量。遇碱性物质易分解失效的除草剂造成的危害，可在水中加入0.2％的生石灰或碱面进行淋洗。73《农药生物测定》多媒体课件4.1清水冲洗当除草剂喷洒过74《农药生物测定》多媒体课件4.2足量浇水为降低作物体内药物的相对浓度，可采取足量灌水的方法减轻药害。74《农药生物测定》多媒体课件4.2足量浇水为降低作物体75《农药生物测定》多媒体课件4.3追施速效化肥，提高作物抵抗力对受害作物结合浇水施肥追施硝铵等速效性化肥，促进作物迅速生长，提高植株抗药害的能力。75《农药生物测定》多媒体课件4.3追施速效化肥，提高作物76《农药生物测定》多媒体课件

4.4施解毒剂作物受药害生长受阻，可喷施赤霉素水溶液150kg／hm2，或芸苔素450mL／hm2，每5d喷1次，连续喷2～3次即可恢复正常生长。76《农药生物测定》多媒体课件4.4施解毒剂作物受药害生77《农药生物测定》多媒体课件

4.5用吸附剂活性炭的吸附性能强，能减少除草剂污染土壤后对下茬作物的药害，活性炭可以播种到沟中，条施或穴施，也可在幼苗移栽前用活性炭浸苗。77《农药生物测定》多媒体课件4.5用吸附剂活性炭的吸《农药生物测定》多媒体课件78本章知识点掌握除草剂生物测定定义一般掌握除草剂生物测定原理除草剂生物测定优缺点除草剂生物测定试材的确定和培育及程序和原则除草剂生物测定技术（每种方法要掌握一种，包括：试验方法、一个实例、判定指标等）了解生物测定技术在除草剂研究中的应用《农药生物测定》多媒体课件78本章知识点掌握除草剂生物测定定《农药生物测定》多媒体课件79一、除草剂生物测定的定义及意义二、除草剂生物测定的基本原理三、除草剂生物测定技术的优缺点

野燕麦菟丝子狗芽根第三章除草剂的生物测定《农药生物测定》多媒体课件1一、除草剂生物测定的定义及意义《农药生物测定》多媒体课件80一、除草剂生物测定的定义及意义

除草剂生物测定是指利用生物体（主要指有害植物）对除草剂的反应来测定除草剂及其效果的基本方法。其目的在于：

1.筛选除草剂,了解除草剂防治的杂草种类及适用的作物范围；

2.测定除草剂在土壤中的残留动态（半衰期等），吸附、淋溶、持效期、光解、挥发速度、微生物降解等；

3.用于除草剂的定量研究；

4.了解不同除草剂在生物体内吸收、运转、作用部位、代谢速度等，为制订除草剂的安全使用标准提供科学依据。第三章除草剂的生物测定《农药生物测定》多媒体课件2一、除草剂生物测定的定义及意义《农药生物测定》多媒体课件81二、除草剂生物测定的基本原理

利用活的生物体或生物体器官，在生长、形态等方面对化学物质（除草剂）的不同反应来确定除草剂的浓度。通常选用对除草剂较敏感的生物材料作生测试材。例：单子叶植物对拉索、拿捕净十分敏感，可用稗草、马唐、谷子等来测定这类除草剂。五氯酚钠对鱼剧毒，可用鱼来测定水中五氯酚钠的残毒。第三章除草剂的生物测定稗草马唐谷子《农药生物测定》多媒体课件3二、除草剂生物测定的基本原理《农药生物测定》多媒体课件82

使生物体的敏感反应成为生物测定方法，必须符合下列条件：

1、在一定浓度范围内，生物体内对除草剂的反应随浓度的增加而有规律的增加；

2、在环境条件相似的情况下，用同一种试材重复试验时，对同种除草剂的反应可以重现。二、除草剂生物测定的基本原理第三章除草剂的生物测定《农药生物测定》多媒体课件4使生物体的敏感反应成为生《农药生物测定》多媒体课件83三、除草剂生物测定技术的优缺点（一）优点:

1.可测定不同类型的除草剂，了解其作用方式、使用剂量、降解速度等。测试材料可以是作物、杂草、动物及微生物等；

2.精确度高：测试材料和测试条件一致时，它们对不同种类及不同剂量的除草剂的反应有较高的灵敏度；

3.设备较简单。第三章除草剂的生物测定《农药生物测定》多媒体课件5三、除草剂生物测定技术的优缺点（《农药生物测定》多媒体课件84（二）缺点

1.周期长、费时间：一般3-7d，最快24h，个别需1个月以上；

2.测定条件较严格：恒温、恒湿、光照、养分等条件控制需一致；

3.除草剂中所含杂质对除草剂的药效有一定影响，有时引起药害。

因此，除草剂的生物测定技术也只能在一定条件和范围内应用。三、除草剂生物测定技术的优缺点第三章除草剂的生物测定《农药生物测定》多媒体课件6（二）缺点三、除草剂生物测定技术《农药生物测定》多媒体课件85试材的确定和培育创造试材所需的环境条件第一节除草剂生物测定试材的确定和培育第三章除草剂的生物测定《农药生物测定》多媒体课件7试材的确定和培育第一节除草剂生《农药生物测定》多媒体课件86一、试材的确定和培育1.作物试材的确定和培育

因此，应选择对除草剂敏感的作物或其器官作为生测材料。

每一种除草剂都有其应用范围和禁用对象，因为有的作物对某些除草剂有抗性，而对另一些除草剂敏感。敏感或不敏感随作物生育期和生长状况的不同也有很大差别，甚至同种作物的不同品种、一株作物的不同部位对除草剂的敏感度都有差别。《农药生物测定》多媒体课件8一、试材的确定和培育1.作物试材《农药生物测定》多媒体课件87《农药生物测定》多媒体课件9《农药生物测定》多媒体课件88

如除草醚、氟乐灵、敌草隆等以土壤处理为主的除草剂，要求试材是作物种子或刚发芽的幼苗。

为使测试结果精确一致，要求成熟度好、大小一致、发芽率高、发芽整齐、品种纯度高的作物种子。若为玉米、高粱等大穗作物最好采用同一穗的中部种子，发芽生长整齐，生物测定结果更精确。高粱种子应在试验前20h将种子放在培养皿中加适量水，置25-28℃培养箱中催芽，待芽长出1-2mm时取出备用。若用不同叶龄期的幼苗，需将种子播种在小盆钵中，播种深度一致，所用土壤要求过筛、肥力和湿度一致，放在温室中或温暖向阳处，也可用玻璃或塑料薄膜增温保湿，待幼苗出土后，生长到所需叶龄期。一、试材的确定和培育1.作物试材的确定和培育作物试材的培育：不同性质的除草剂要求不同作物试材及其生育状态。

《农药生物测定》多媒体课件10如除草醚、氟乐灵、敌《农药生物测定》多媒体课件89不同种类的杂草及其不同生育期、不同器官对不同种类除草剂及其不同浓度都有不同反应，因此，必须选择对供试除草剂较敏感的杂草或其部位为生测试材。一、试材的确定和培育2、杂草试材的确定和培育《农药生物测定》多媒体课件11不同种类的杂草及其不同生育《农药生物测定》多媒体课件90杂草试材的培育：不同种类和不同性质的除草剂的防除对象不同，作用部位也不同，所以测定不同除草剂时应选择不同的试材。

例如：敌草隆、阿拉特津、丁草胺等都是以杀刚发芽（露白）的杂草幼芽为主的土壤处理，所以，要求供试杂草种子大小一致、发芽率高、发芽整齐，否则，因杂草种子成熟度不一致、休眠期长短不一、发芽不整齐等，致使试验结果误差较大。

一、试材的确定和培育2、杂草试材的确定和培育《农药生物测定》多媒体课件12杂草试材的培育：不同种类和《农药生物测定》多媒体课件91二、创造试材所需的环境条件第一节除草剂生物测定试材的确定和培育

作物、杂草种子萌发、幼苗生长都需一定的水分、温度和氧气。有的还需要一定的光照等条件。

不同作物和杂草生长在不同季节和环境中，形成了对环境条件的不同要求。

如野燕麦生长在东北、西北较冷凉地区，因而最适生长温度为10-18℃；而绿狗尾24-32℃时2-3d内发芽，稗草起于南方，最适生长温度为17-32℃，燕麦、小麦要求较冷凉条件，大豆、芥菜要求较温暖条件，而棉花、水稻、西瓜等要求较高温度。对水分的要求除水稻需高含水量的土壤甚至淹水条件外，一般要求最大田间持水量70%-90%为宜。《农药生物测定》多媒体课件13二、创造试材所需的环境条件第《农药生物测定》多媒体课件92二、创造试材所需的环境条件

采用培养箱进行种子发芽较易控制温度。如高粱在25-28℃时15-20h就能发芽露白，稗草在30-33℃时2-3d内发芽，水稻在同样温度下3d后才能发芽。温室内的温度虽不如培养箱那样稳定，但有光照条件。温室内一般用盆钵进行试验。土壤、水分条件较接近于田间。人工气候室能较好地控制温度、湿度、光照、通风等，可满足生测中特殊试验要求的条件。小区试验更接近于生产条件，其实验结果可验证室内测定结果。《农药生物测定》多媒体课件14二、创造试材所需的环境条件93《农药生物测定》多媒体课件第三章除草剂的生物测定

猪殃殃第二节除草剂生物测定的鉴定技术一、除草剂活力的鉴定方法二、除草剂的药效评价15《农药生物测定》多媒体课件第三章除草剂的生物测定猪殃94《农药生物测定》多媒体课件一、除草剂活力的鉴定方法(一)萌芽鉴定

许多除草剂能强烈抑制敏感植物种子的萌发，或明显地抑制幼芽及胚根的生长，如除草醚、2,4-D、拉索等。随除草剂剂量的变化，抑制反应也有相应变化，能较精确的测定剂量与抑制率之间的关系。一般情况下，典型的根系或初生茎叶的受抑制症状可在处理后，培养24-96h

观察到。第二节除草剂生物测定的鉴定技术16《农药生物测定》多媒体课件一、除草剂活力的鉴定方法(一95《农药生物测定》多媒体课件（二）植株鉴定

通过测定供试植物的生长量来确定除草剂对试材的抑制程度及除草剂的活性。通常以鲜重为指标。如对试验要求较精确时，还要测定实验植株或特定部位的干重。许多光合作用抑制剂在伤害症状出现前，茎叶的生长或株高就产生了差异，它可代替称重来测定除草剂的活性。但测试植株的不同叶龄和生育期对除草剂的敏感性不同，一般禾本科植物测定叶片长度，豆科植物测定第一复叶的叶柄长度来鉴定。一、除草剂活力的鉴定方法第二节除草剂生物测定的鉴定技术第三章除草剂的生物测定17《农药生物测定》多媒体课件（二）植株鉴定一、除草剂活96《农药生物测定》多媒体课件

在肉眼可见的反应出现之前，试材生理生化的变化往往可以测定出来。植物呼吸和光合作用以及所含成分或新陈代谢物质的变化等都可以作为测定的指标。另外，以植物的耗水量表示除草剂的活性，可能比植物重量具有更大的敏感性。

测定用抑制光合作用的除草剂处理过的植株或子叶的光合速率，接触除草剂几小时后，CO2的交换量显著减少。生长在含有扑草净的培养基中的植物，其水分消耗在药害症状出现前几天就有变化，可用水分消耗量作为生测指标。黄化反应可由分光光度计或直观地测定叶绿素含量来估量。另外，也可用根系活力作为生测指标。一、除草剂活力的鉴定方法第二节除草剂生物测定的鉴定技术第三章除草剂的生物测定（三）生理和形态效应鉴定18《农药生物测定》多媒体课件在肉眼可见的反应出现之前，97《农药生物测定》多媒体课件某些除草剂对植物的典型症状可用于定性测定，症状的强度与剂量呈正比关系，也可用于定量测定2,4-D的存在与否。除草剂所引起的特殊反应常被发展成定量生物测定技术。如杀草强（ATA）引起植物向地性的丧失和棉花幼苗根毛发育的变化；当种子用红外光处理后，几种三氮苯类除草剂能促进莴苣种子的萌发和棉花胚轴的张开；杀草丹等氨基甲酸酯类除草剂能明显抑制稗草等敏感植物的心叶生长。一、除草剂活力的鉴定方法（三）生理和形态效应鉴定19《农药生物测定》多媒体课件某些除草剂对植物的典型症状98《农药生物测定》多媒体课件对照区杂草－处理区杂草对照区杂草抑制率(%)＝×100%二、除草剂药效评价第二节除草剂生物测定的鉴定技术第三章除草剂的生物测定

对不同类型的除草剂和不同种类的杂草，其防除效果的评价标准不同。常用0（或1）-5（或10）的分级法。

受处理的杂草、作物的高度、重量、密度等指标与对照按下列公式计算杂草抑制率或防治率并进行比较：20《农药生物测定》多媒体课件对照区杂草－处理区杂草对照区杂99《农药生物测定》多媒体课件欧洲杂草研究会用目测法进行9级法统计，国内逐渐采用。二、除草剂药效评价21《农药生物测定》多媒体课件欧洲杂草研究会用目测法进行9级100《农药生物测定》多媒体课件一、种子发芽测定法第三节除草剂生物测定技术第三章除草剂的生物测定二、植株生长量测定法三、生理生化指标测定法四、症状鉴定法五、愈伤组织鉴定法22《农药生物测定》多媒体课件一、种子发芽测定法第三节除草101《农药生物测定》多媒体课件一、种子发芽测定法（一）试验方法

发芽试验的容器通常为培养皿和小烧杯。使用前首先对器皿进行清洗和干热灭菌，然后加入适量药液，在发芽床上播种。发芽床：滤纸、脱脂棉或消毒过的砂子铺放在培养皿内而制成。第三节除草剂生物测定技术23《农药生物测定》多媒体课件一、种子发芽测定法（一）试验102《农药生物测定》多媒体课件一、种子发芽测定法1.供试植物种子（或在催芽前）先浸入0.2%次氯酸钠溶液中消毒15min，用自来水洗涤并用流水浸泡2-6h，再用蒸馏水洗涤数次，或在5%漂白粉溶液中消毒半小时后取出，用水冲洗干净，以防止试验过程中发霉，影响试验结果。2.药液应保持刚好湿润发芽床为宜；3.保持供试种子所需的环境条件，温度应是供试种子发芽所需要的适温。一般要求在黑暗下培养，特殊情况除外。4.不要把两种以上的种子种于同一器皿中（即同一发芽床上）。注意事项：24《农药生物测定》多媒体课件一、种子发芽测定法1.供试103《农药生物测定》多媒体课件（二）项目调查1、发芽率（%）＝药剂处理的发芽数/对照处理的发芽数×1002、生长抑制率（%）＝(对照发芽率－药剂发芽率)/对照发芽率×1003、发育异常描绘有些药剂尤其是激素类药剂可使供试生物根或茎畸形，因此应调查根或茎的膨大或卷曲等异常情况，并做详细描述或绘制特征图。一、种子发芽测定法25《农药生物测定》多媒体课件（二）项目调查一、种子发芽测定104《农药生物测定》多媒体课件（三）实例1、黄瓜幼苗形态法：是测定激素类除草剂及其他植物生长调节剂活性的常用方法，具有反应灵敏、测定范围大（0.1-l000μg/mL），操作简便等优点。（1）药剂配制：将2,4-D配制成一系列浓度的丙酮溶液；（2）发芽床制作：用1张直径11cm滤纸在药液中浸至饱和，取出挥发掉丙酮，放入直径12cm培养皿中，再在其下垫两张同样大小空白滤纸。（3）种子消毒：（4）培养：每皿放入20粒，加入12mL蒸馏水（此时培养皿中的实际浓度比原来丙酮液浓度低10倍)。盖好皿盖，置25℃恒温箱中黑暗培养。（5）形态描述、绘图、照相等：6天后取出观察黄瓜幼苗，描述、绘制、照相或印相各浓度下黄瓜幼苗的形态。一、种子发芽测定法26《农药生物测定》多媒体课件（三）实例一、种子发芽测定法105《农药生物测定》多媒体课件2、小杯法：可测定二苯醚类、酚胺类和氨基甲酸酯类、氯代脂肪酸类等除草剂的活性，但对抑制植物光合作用的除草剂则几乎不能采用。该法具有操作简便，测定周期短、范围较广的优点。一、种子发芽测定法

试材选用小麦、油菜、水稻、稗草等。以直径3.5cm，高5.0cm的玻璃杯或50mL的小烧杯为容器。杯底放一张圆滤纸片，吸取一定量的有机溶剂溶解的待测药液倒入杯内，挥发干溶剂。若以水稻、稗草等水生杂草种子为试材，在杯中加入2mL蒸馏水，若以小麦、油菜种子为材料时，则滤纸片底下放一层直径约为0.5cm大小的玻璃珠，再加入3mL蒸馏水。选择刚萌动的种子10粒，排放到滤纸片上，置28℃恒温室中培养，白天给予日光灯照。培养期间每天加入一定量蒸馏水补充挥发掉的水分。3d后分别记载株高或测定鲜重。计算抑制生长50%所需要的浓度（EC50）。（三）实例27《农药生物测定》多媒体课件2、小杯法：可测定二苯醚类、酚106《农药生物测定》多媒体课件2、小杯法一、种子发芽测定法药效的分级标准为：0级同对照1级抑制生长25%以下2级抑制生长50%以下3级抑制生长75%以下4级抑制生长75%以上然后计算每一浓度处理的抑制指数：抑制指数＝∑（级别×各级代表株数）总株数×4（最高级别）×100

将抑制指数（抑制百分数）转换为机率值，浓度（剂量）以对数值表示，求出EC50。（三）实例28《农药生物测定》多媒体课件2、小杯法一、种子发芽测定法107《农药生物测定》多媒体课件（三）实例3、高粱法4、稗草胚轴中胚轴法一、种子发芽测定法29《农药生物测定》多媒体课件（三）实例一、种子发芽测定法108《农药生物测定》多媒体课件（一）试验方法将所选试材进行催芽处理后，种植在含有供试药剂的基质中（液体基质或土壤）或在植株生长的某个适期施药，经一定时间、一定条件的培育后观察试验结果。二、植株生长量测定法第三节除草剂生物测定技术30《农药生物测定》多媒体课件（一）试验方法二、植株生长量测109《农药生物测定》多媒体课件（二）实例1、去胚乳小麦幼苗法：适用于测定光合作用抑制剂。

（1）选种：选择饱满度一致的小麦种子。（2）浸种催芽：浸种2h后，排列在铺有滤纸或纱布的搪瓷盘中，在室温20℃左右进行催芽，3~4d后苗高达2~3cm。（3）3-4d后精选高度一致的幼苗，轻轻取出，避免伤害根部，然后用镊子摘除胚乳，再用水漂洗掉附在上面的胚乳成分，准备种植。（4）用直径4.5cm、高5cm小玻璃杯为测定容器，每杯注入不同浓度供试药液3mL和稀释10倍的培养液6mL，每杯插入上述去胚乳小麦10株。（5）在室温21~26℃左右和光照下培养6~7天后观察药效。注意每天应该给每个小杯称重，补足损失的水分。（6）测量每株从芽鞘到最长叶尖的距离，求生长抑制率，继而求EC50。生长抑制率（%）＝(对照生长量－处理生长量)/对照生长量×100二、植株生长量测定法31《农药生物测定》多媒体课件（二）实例生长抑制率（%）＝(110《农药生物测定》多媒体课件2、萝卜子叶法3、番茄水培法4、叶鞘滴注法5、再生苗测重法（二）实例1、去胚乳小麦幼苗法

二、植株生长量测定法32《农药生物测定》多媒体课件2、萝卜子叶法（二）实例二、植111《农药生物测定》多媒体课件（一）藻类实验法：应用绿藻(chlorophyta)，蓝藻(cyanophyta)等微小的藻类进行有关除草剂实验的实例很多，其中小球藻法是最为普遍的一种方法。（二）浮萍法：（三）圆叶片漂浮法：植物在进行光合作用时，叶片组织内产生较高浓度的氧气，使叶片容易漂浮，而若光合作用受抑制，不能产生氧气，则叶片就难以漂浮。三、生理生化指标测定法第三节除草剂生物测定技术

利用植株在施药后的生理生化反应来作为测定的指标，亦被广泛应用，特别是近年来由于生理生化技术发展，使这一方法更为准确和灵敏。33《农药生物测定》多媒体课件（一）藻类实验法：应用绿藻(112《农药生物测定》多媒体课件

1、藻类培养——培养基的选择与制备；

2、试验法——用偏平烧瓶或三角瓶，将小球藻培养液分别定量加入三角瓶中，再定量加入一定浓度的除草剂。可通入一定流量的含3%CO2浓度的空气，也可用二层纱布封住三角瓶口。25℃下，荧光灯照明培养。

3、测定方法

（1）观察颜色变化：施药后5d观察小球藻退色变化情况。

（2）比色测定小球藻增殖率：因小球藻的增殖，培养液中的绿色逐渐变浓，用分光光度计在波长574nm下比色测定，吸光度与小球藻细胞数量间存在明显的直线关系，故可用此法测定小球藻的含量。

（3）浓缩细胞量测定：把一定量的小球藻悬浊液放入带刻度的离心管中，I800rpm离心5分钟，测定沉淀小球藻的体积。

（4）叶绿素含量测定：因小球藻对不同药剂反应不同，故其培养液中小球藻叶绿素总含量是不同的，据此，可把叶绿素提取出来，测定其含量，以此来比较药剂的毒力，并可求出LC50，即抑制叶绿体含量50%时所需要的除草剂浓度。三、生理生化指标测定法（一）藻类实验法34《农药生物测定》多媒体课件1、藻类培养——培养基的选113《农药生物测定》多媒体课件比色法测定小球藻的增殖率I．蛋白核小球藻的构造1．淀粉核

2．细胞核

3．载色体II、III．似亲孢子的形成和释放小球藻属于绿藻类其细胞中只有一个叶绿体，叶绿体中含有和高等植物一样的光合色素，如叶绿素A、叶绿素B等，也能进行光合作用（一）藻类实验法35《农药生物测定》多媒体课件比色法测定小球藻的增殖率I．蛋114《农药生物测定》多媒体课件三、生理生化指标测定法比色法测定小球藻的增殖率培养好的小球藻悬浮液5mLherbicide培养液45mL瓶口封上两层纱布250C1000lx光培养24h处理前、后分别测波长574nm下的吸光度（OD值）增值阻碍率（%）＝处理后的OD值－处理前的OD值对照的OD值－处理前的OD值×100（一）藻类实验法36《农药生物测定》多媒体课件三、生理生化指标测定法比色法测115《农药生物测定》多媒体课件（一）藻类实验法（二）浮萍法（三）圆叶片漂浮法三、生理生化指标测定法第三节除草剂生物测定技术37《农药生物测定》多媒体课件（一）藻类实验法三、生理生化指116《农药生物测定》多媒体课件四、症状鉴定法

除草剂对供试生物所产生的特异性症状。五、愈伤组织鉴定法1、培养基的制备2、外植体的选择及消毒3、接种4、培养条件5、生长量的测定第三节除草剂生物测定技术第三章除草剂的生物测定38《农药生物测定》多媒体课件四、症状鉴定法五、愈伤组织鉴定《农药生物测定》多媒体课件117第四节生物测定技术在除草剂研究中的应用一、除草剂的筛选二、作物的安全性测定第三章除草剂的生物测定三、除草剂的作用特性测定四、除草剂在土壤中淋溶的测定五、除草剂降解和持效测定六、除草剂田间药效试验评价七、除草剂混用药效测定八、除草剂药害症状的诊断《农药生物测定》多媒体课件39第四节生物测定技术在除草剂研《农药生物测定》多媒体课件118第四节生物测定技术在除草剂研究中的应用

利用除草剂的生物测定技术从大量化合物中发现除草活性化合物，是筛选新除草剂的重要手段。筛选程序为实验室初筛——盆栽实验——田间实验三个步骤。第三章除草剂的生物测定

一、除草剂的筛选《农药生物测定》多媒体课件40第四节生物测定技术在除草剂研《农药生物测定》多媒体课件119第四节生物测定技术在除草剂研究中的应用二、作物的安全性测定第三章除草剂的生物测定

以作物水稻、小麦、玉米、大豆、棉花、高粱、谷子、蔬菜等种子或幼苗进行测定。用药量一般与杀草谱试验一样。再根据除草剂性能分别于播前、播后，苗前、苗后进行药剂处理，处理1-2周后测定出苗率、生长势、药害、株高、鲜重。计算其选择性指数，以确定除草剂对作物的安全性。

一般认为，选择性指数在4级以上是比较安全的。数值越大，表示对作物的安全性越大，除草效果越好，因而中选程度也大。《农药生物测定》多媒体课件41第四节生物测定技术在除草剂研《农药生物测定》多媒体课件120

三、除草剂的作用特性测定

可研究除草剂吸收与作用部位、研究除草剂吸收与传导。

第四节生物测定技术在除草剂研究中的应用图3-2活性炭隔层示意图

研究除草剂吸收与传导时，在供试植物的某一部位涂抹除草剂，经一定时间后，把植物表面未吸收的除草剂冲洗下来进行生物测定，观察施药部位上下组织受害症状，判断其传导方向。通过根系吸收的除草剂可用水培法测定，把试材培养在含有一定浓度的除草剂溶液中，经一定时间后，测定除草剂在溶液中的剩余量，并与对照比较。也可采用同位素示踪法标记除草剂后，喷施导入试材中，用自显影法测定试材对除草剂的吸收、传导过程。《农药生物测定》多媒体课件42三、除草剂《农药生物测定》多媒体课件121

将供试植物种子放在狭长的装有土壤的淋溶槽中，在槽的左端加除草剂，自左部加水展开，展开时间和距离可因药剂及目的而异，完毕后，将槽移入培养箱中给以适宜的条件，一定时间后，可测出除草剂在土壤中淋溶状况。第四节生物测定技术在除草剂研究中的应用

四、除草剂在土壤中淋溶的测定《农药生物测定》多媒体课件43将供试植物种子放在狭长的装《农药生物测定》多媒体课件122（一）田间试验（二）盆栽实验（三）不同浓度下降解速度（四）除草剂的挥发和光解速度的测定第四节生物测定技术在除草剂研究中的应用五、除草剂降解和持效测定《农药生物测定》多媒体课件44（一）田间试验第四节生《农药生物测定》多媒体课件123五、除草剂降解和持效测定第四节生物测定技术在除草剂研究中的应用图3-3土壤降解试验方法图3-4土壤降解作用生物测定结果示意图《农药生物测定》多媒体课件45五、除草剂降解和持效测定第四节《农药生物测定》多媒体课件124（一）试验地选择

实验地点应根据除草剂将来可能推广的地区或有代表性的地点进行选择，如按大行政区分或按不同土壤类型地区分。作物应根据盆栽实验的结果确定1-3个主要作物，选择有其主要防除杂草的地中进行杀草谱试验，应避免多次施用