生物样本库的建设课件

生物样本库建设*生物样本库建设*1定义生物样本库biologicalspecimenbank,BSB标准化地收集、保存用于各种研究的正常或病理标本，包括人体器官组织、全血、血浆、血清、生物体液或经处理过的生物样本（DNA、RNA、蛋白等）以及与这些生物样本相关的临床、病理、治疗、随访、知情同意等资料及其质量控制、信息管理与应用系统。*定义生物样本库biologicalspecimenban2生物样本库政策法规技术标准

伦理规范ISO标准实验室安全临床实验室伦理运输标准操作规范（SOPs）

质量控制标准样本采集样本处理样本质量检验样本储存样本运输DNA质量鉴定、RNA质量鉴定、蛋白质质量鉴定知情同意书质量审查样本运输样本转移协议伦理委员会伦理审查*生物样本库政策法规技术标准伦理规范ISO标准实验室安全临床3ISO15189:2003医学实验室质量和能力的专用要求CNAS-CL02医学实验室-质量和能力的认可准则ISO/IEC17025:2005检测和校准实验室能力的通用要求CNAS-CL01检测和校准实验室认可准则ISO9001:2008/GBT19001-2008质量管理系统要求GB/T1.1-2009标准化工作导则：标准的结构和编写规则ISO标准*ISO15189:2003医学实验室质量和能力的专用要求I4实验室安全GB19489-2008实验室生物安全通用要求

CNAL/AC30-2005实验室生物安全认可准则WS/T233-2002微生物和生物医学实验室生物安全通用准则GB50346-2004生物安全实验室建筑技术规范已建立实验室生物安全管理体系*实验室安全GB19489-2008实验室生物安全通用要求5临床实验室GB/T20468-2006临床实验室定量测定室内质量控制指南GB/T20469-2006临床实验室设计总则GB/T20470-2006临床实验室室间质量评价要求WS/T102-1998临床检验项目分类与代码WS/T224-2002真空采血管及其添加剂WS/T225-2002临床化学检验血液标本的收集与处理WS/T227-2002临床检验操作规程编写要求WS/T228-2002定量临床检验方法的初步评价WS/T230-2002临床诊断中聚合酶链反应（PCR）技术应用WS/T249-2005临床实验室废物处理原则WS/T250-2005临床实验室质量保证的要求WS/T251-2005临床实验室安全准则WS/T255-2005临床检验医学参考测量实验室*临床实验室GB/T20468-2006临床实验室定量测定6赫尔辛基宣言涉及人类为研究对象的生物医学研究了国际伦理方针指南关于DNA序列申请专利的声明：专利关于早期发布原始序列数据有关专利申请问题的声明关于DNA取样的声明：控制与获取世界人类基因组与人权宣言涉及人体的生物医学研究伦理审查办法（试行）人类基因治疗申报临床试验指导原则关于利益共享的声明关于基因治疗的声明关于人类基因组数据库的声明国际涉及人类的生物医学研究伦理准则人类遗传数据国际宣言纲要人体生物医学研究国际伦理指南伦理*赫尔辛基宣言伦理*7物流术语液氮生物容器中国民用航空危险品运输管理规定危险物品航空安全运输技术细则运输*物流术语运输*8所有从业人员应取得《岗前培训考核合格证》*所有从业人员应取得《岗前培训考核合格证》*9生物样本库工作流程标本采集标本处理入库登记标本储存质控YesNo销毁《废弃物处置操作程序》抽检NoYes标本使用使用申请标本发放剩余标本回收数据库*生物样本库工作流程标本采集标本处理入库登记标本储存质控Yes10标本采集生物标本采集和储存研究成功的关键要求根据所采样本的类型和所分析的物质而定在采集和储存过程中不能受到“污染”

储存的生物标本在任何时候进行检测都可以获得一致的结果所有的生物标本都应有详细的背景材料和鉴别标识*标本采集生物标本采集和储存*11标本采集举例*标本采集举例*12标本采集尿液标本的保存-最好不超过2h

尿液化学物质和有形成份不稳定，排出后即开始发生物理和化学变化，如胆红素、尿胆原被氧化，细菌生长，尿素酵解生成氨使尿pH升高，尿液有形成份破坏，葡萄糖被细菌利用而降低。尿液保存常用方法有两种：

1.冷藏法：4℃条件下不超过8h可抑制微生物生长，维持尿液pH恒定，使尿中有形成份的形态基本不变，但是可导致磷酸盐和尿酸盐析出形成沉淀，影响尿沉渣检查。*标本采集尿液标本的保存-最好不超过2h*13标本采集尿液标本的保存-最好不超过2h

尿液化学物质和有形成份不稳定，排出后即开始发生物理和化学变化，如胆红素、尿胆原被氧化，细菌生长，尿素酵解生成氨使尿pH升高，尿液有形成份破坏，葡萄糖被细菌利用而降低。尿液保存常用方法有两种：2.化学防腐法：①甲苯：（一般用量为1.0～2.0ml甲苯/100ml尿液），防止细菌污染，通常用于尿酮体、尿糖，尿蛋白质等测定②甲醛：每100ml尿液加40%甲醛0.5ml，可抑制细菌生长并固定尿中有形成份，适用于尿液中细胞与管型的测定；③麝香草酚：用10%的麝香草酚异丙醇溶液，达到抑菌及保护代谢物的作用，适用于尿钾、钠、钙等测定④浓盐酸：每100ml尿标本中加入浓盐酸1ml即可，使尿液维持在pH2.0左右。主要可用于17-羟皮质类因醇、17-酮类固醇、儿茶酚胺、VMA等定量测定等。*标本采集尿液标本的保存-最好不超过2h*14标本采集*标本采集*15标本采集*标本采集*16标本运送血液标本采集后应尽快从采血现场运送至实验室，注意是否存在干扰血凝块。标本运送过程中要注意样本的包装、温度要求及处理方法等，要确保分析成分的稳定性，标本管在运送过程中要保持管口封闭，向上垂直放置，避免剧烈振动尿液标本从流取到检验应在2小时内完成，如不能及时送检分析，必须加防腐剂或冷藏不超过8小时细菌检查标本应采用消毒容器，防止细菌污染，室温条件不超过2小时或4℃冷藏保存。*标本运送血液标本采集后应尽快从采血现场运送至实验室，注意是否17标本运送*标本运送*18标本处理和保存标本采集后应及时处理、分装后保存血液标本处理操作规程DNA提取和纯化操作规程：血液、粪便、棉拭子、唾液RNA提取和纯化操作规程：血液、棉拭子蛋白质提取和保存操作规程*标本处理和保存标本采集后应及时处理、分装后保存*19标本处理和保存血液标本处理操作规程全血、血清、血浆、干血片、血凝块、白细胞血清：指全血不经抗凝处理，在凝固过程中，血浆中除去纤维蛋白原分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白原已被除去的血浆血浆：离开血管的全血经抗凝处理后，通过离心沉淀，所获得的不含细胞成分的液体，其中含有纤维蛋白原。全血：由液态血浆和血细胞组成*标本处理和保存血液标本处理操作规程全血、血清、血浆、干血片、20标本处理和保存血液标本处理操作规程全血标本的保存生化检验：尽可能在2小时内检验或分离血清/血浆，不能及时分离或检验时，应4℃低温冷藏，不能超过24小时。操作时动作应轻柔，避免剧烈振荡，避免温度变化过大或冻融，易导致溶血。DNA检测：4℃保存不超过7天，-20℃保存不超过一年，-80℃长期保存RNA检测：采集后应尽快分离血细胞、血清/血浆，或加入RNA抑制剂（如trizol），

-20℃保存不超过2个月，-80℃保存不超过半年。*标本处理和保存血液标本处理操作规程全血标本的保存*21标本处理和保存血液标本处理操作规程血清的分离采血时应采用无抗凝剂的采血管；采血后，室温（22～25℃）放置30～60min，加促凝剂时凝集加快（5～15min)，1000～1200g离心10min，吸取上层淡黄色上清液。有凝胶屏障的分离管可保存在4℃，24小时内吸取上层血清；无凝胶屏障的必须立即吸取上层血清。保存条件常温下不超过8小时；4℃不超过48小时；48小时以上的应置于-20℃保存；提取RNA的应立即置于-80℃保存。避免反复冻融。*标本处理和保存血液标本处理操作规程血清的分离*22标本处理和保存血液标本处理操作规程血浆的分离采血时应采用有抗凝剂的采血管；采血后，1000～1200g离心10min，吸取上层淡黄色上清液。有凝胶屏障的分离管可保存在4℃，24小时内吸取上层血清；无凝胶屏障的必须立即吸取上层血清。保存条件常温下不超过8小时；4℃不超过48小时；48小时以上的应置于-20℃保存；提取RNA的应立即置于-80℃保存。避免反复冻融。*标本处理和保存血液标本处理操作规程血浆的分离*23质量控制标本入库前应经过质量控制，符合质量标准的标本才能入库①符合标本采集、处理的要求，检查采集和处理记录②标本信息采集表填写完整③标本运送符合要求，交接运送记录完整④标本管无空管、无破损、良好密封，标签清晰完整、无脱落⑤检查标本是否受到污染，核酸质量*质量控制标本入库前应经过质量控制，符合质量标准的标本才能入库24标本入库编号原则总原则：唯一性、共享性辅原则：在满足总原则基础上，尽量精简，编号长度尽量保持统一生物样本库信息表*标本入库编号原则生物样本库信息表*25标本入库标本编号原则总原则：唯一性、共享性辅原则：在满足总原则基础上，尽量精简，编号长度尽量保持统一举例：2017年收到的第102份标本，类型是粪便，目的用于结肠道菌群分析1700102D15W212017年收到的第256份标本，类型是血清，目的用于心梗的研究1700256G01BS1*标本入库标本编号原则*26标本使用使用申请：填写《标本申请单》标本发放：填写《标本使用登记表》标本销毁：按照感染性废弃物，执行《废弃物处置操作程序》*标本使用使用申请：填写《标本申请单》*27生物安全执行《实验室生物安全管理体系》健康监测：定期体检，必要时免疫接种。个人防护：手套、口罩、防护服、护目镜；脱下手套后、离开微生物室前应洗手，接触血液体液或其它污染物时，应立即洗手。操作尖锐物品如针头，应戴防刺破手套。尽可能在生物安全柜内进行标本的操作。标本库冰箱应采用专人专锁管理，禁止随意取用，防止失窃。感染性废弃物交由专业环保公司处置。*生物安全执行《实验室生物安全管理体系》健康监测：定期体检，必28讨论*讨论*29生物样本库建设*生物样本库建设*30定义生物样本库biologicalspecimenbank,BSB标准化地收集、保存用于各种研究的正常或病理标本，包括人体器官组织、全血、血浆、血清、生物体液或经处理过的生物样本（DNA、RNA、蛋白等）以及与这些生物样本相关的临床、病理、治疗、随访、知情同意等资料及其质量控制、信息管理与应用系统。*定义生物样本库biologicalspecimenban31生物样本库政策法规技术标准

伦理规范ISO标准实验室安全临床实验室伦理运输标准操作规范（SOPs）

质量控制标准样本采集样本处理样本质量检验样本储存样本运输DNA质量鉴定、RNA质量鉴定、蛋白质质量鉴定知情同意书质量审查样本运输样本转移协议伦理委员会伦理审查*生物样本库政策法规技术标准伦理规范ISO标准实验室安全临床32ISO15189:2003医学实验室质量和能力的专用要求CNAS-CL02医学实验室-质量和能力的认可准则ISO/IEC17025:2005检测和校准实验室能力的通用要求CNAS-CL01检测和校准实验室认可准则ISO9001:2008/GBT19001-2008质量管理系统要求GB/T1.1-2009标准化工作导则：标准的结构和编写规则ISO标准*ISO15189:2003医学实验室质量和能力的专用要求I33实验室安全GB19489-2008实验室生物安全通用要求

CNAL/AC30-2005实验室生物安全认可准则WS/T233-2002微生物和生物医学实验室生物安全通用准则GB50346-2004生物安全实验室建筑技术规范已建立实验室生物安全管理体系*实验室安全GB19489-2008实验室生物安全通用要求34临床实验室GB/T20468-2006临床实验室定量测定室内质量控制指南GB/T20469-2006临床实验室设计总则GB/T20470-2006临床实验室室间质量评价要求WS/T102-1998临床检验项目分类与代码WS/T224-2002真空采血管及其添加剂WS/T225-2002临床化学检验血液标本的收集与处理WS/T227-2002临床检验操作规程编写要求WS/T228-2002定量临床检验方法的初步评价WS/T230-2002临床诊断中聚合酶链反应（PCR）技术应用WS/T249-2005临床实验室废物处理原则WS/T250-2005临床实验室质量保证的要求WS/T251-2005临床实验室安全准则WS/T255-2005临床检验医学参考测量实验室*临床实验室GB/T20468-2006临床实验室定量测定35赫尔辛基宣言涉及人类为研究对象的生物医学研究了国际伦理方针指南关于DNA序列申请专利的声明：专利关于早期发布原始序列数据有关专利申请问题的声明关于DNA取样的声明：控制与获取世界人类基因组与人权宣言涉及人体的生物医学研究伦理审查办法（试行）人类基因治疗申报临床试验指导原则关于利益共享的声明关于基因治疗的声明关于人类基因组数据库的声明国际涉及人类的生物医学研究伦理准则人类遗传数据国际宣言纲要人体生物医学研究国际伦理指南伦理*赫尔辛基宣言伦理*36物流术语液氮生物容器中国民用航空危险品运输管理规定危险物品航空安全运输技术细则运输*物流术语运输*37所有从业人员应取得《岗前培训考核合格证》*所有从业人员应取得《岗前培训考核合格证》*38生物样本库工作流程标本采集标本处理入库登记标本储存质控YesNo销毁《废弃物处置操作程序》抽检NoYes标本使用使用申请标本发放剩余标本回收数据库*生物样本库工作流程标本采集标本处理入库登记标本储存质控Yes39标本采集生物标本采集和储存研究成功的关键要求根据所采样本的类型和所分析的物质而定在采集和储存过程中不能受到“污染”

储存的生物标本在任何时候进行检测都可以获得一致的结果所有的生物标本都应有详细的背景材料和鉴别标识*标本采集生物标本采集和储存*40标本采集举例*标本采集举例*41标本采集尿液标本的保存-最好不超过2h

尿液化学物质和有形成份不稳定，排出后即开始发生物理和化学变化，如胆红素、尿胆原被氧化，细菌生长，尿素酵解生成氨使尿pH升高，尿液有形成份破坏，葡萄糖被细菌利用而降低。尿液保存常用方法有两种：

1.冷藏法：4℃条件下不超过8h可抑制微生物生长，维持尿液pH恒定，使尿中有形成份的形态基本不变，但是可导致磷酸盐和尿酸盐析出形成沉淀，影响尿沉渣检查。*标本采集尿液标本的保存-最好不超过2h*42标本采集尿液标本的保存-最好不超过2h

尿液化学物质和有形成份不稳定，排出后即开始发生物理和化学变化，如胆红素、尿胆原被氧化，细菌生长，尿素酵解生成氨使尿pH升高，尿液有形成份破坏，葡萄糖被细菌利用而降低。尿液保存常用方法有两种：2.化学防腐法：①甲苯：（一般用量为1.0～2.0ml甲苯/100ml尿液），防止细菌污染，通常用于尿酮体、尿糖，尿蛋白质等测定②甲醛：每100ml尿液加40%甲醛0.5ml，可抑制细菌生长并固定尿中有形成份，适用于尿液中细胞与管型的测定；③麝香草酚：用10%的麝香草酚异丙醇溶液，达到抑菌及保护代谢物的作用，适用于尿钾、钠、钙等测定④浓盐酸：每100ml尿标本中加入浓盐酸1ml即可，使尿液维持在pH2.0左右。主要可用于17-羟皮质类因醇、17-酮类固醇、儿茶酚胺、VMA等定量测定等。*标本采集尿液标本的保存-最好不超过2h*43标本采集*标本采集*44标本采集*标本采集*45标本运送血液标本采集后应尽快从采血现场运送至实验室，注意是否存在干扰血凝块。标本运送过程中要注意样本的包装、温度要求及处理方法等，要确保分析成分的稳定性，标本管在运送过程中要保持管口封闭，向上垂直放置，避免剧烈振动尿液标本从流取到检验应在2小时内完成，如不能及时送检分析，必须加防腐剂或冷藏不超过8小时细菌检查标本应采用消毒容器，防止细菌污染，室温条件不超过2小时或4℃冷藏保存。*标本运送血液标本采集后应尽快从采血现场运送至实验室，注意是否46标本运送*标本运送*47标本处理和保存标本采集后应及时处理、分装后保存血液标本处理操作规程DNA提取和纯化操作规程：血液、粪便、棉拭子、唾液RNA提取和纯化操作规程：血液、棉拭子蛋白质提取和保存操作规程*标本处理和保存标本采集后应及时处理、分装后保存*48标本处理和保存血液标本处理操作规程全血、血清、血浆、干血片、血凝块、白细胞血清：指全血不经抗凝处理，在凝固过程中，血浆中除去纤维蛋白原分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白原已被除去的血浆血浆：离开血管的全血经抗凝处理后，通过离心沉淀，所获得的不含细胞成分的液体，其中含有纤维蛋白原。全血：由液态血浆和血细胞组成*标本处理和保存血液标本处理操作规程全血、血清、血浆、干血片、49标本处理和保存血液标本处理操作规程全血标本的保存生化检验：尽可能在2小时内检验或分离血清/血浆，不能及时分离或检验时，应4℃低温冷藏，不能超过24小时。操作时动作应轻柔，避免剧烈振荡，避免温度变化过大或冻融，易导致溶血。DNA检测：4℃保存不超过7天，-20℃保存不超过一年，-80℃长期保存RNA检测：采集后应尽快分离血细胞、血清/血浆，或加入RNA抑制剂（如trizol），

-20℃保存不超过2个月，-80℃保存不超过半年。*标本处理和保存血液标本处理操作规程全血标本的保存*50标本处理和保存血液标本处理操作规程血清的分离采血时应采用无抗凝剂的采血管；采血后，室温（22～25℃）放置30～60min，加促凝剂时凝集加快（5～15min)，1000～1200g离心10min，吸取上层淡黄色上清液。有凝胶屏障的分离管可保存在4℃，24小时内吸取上层血清；无凝胶屏障的必须立即吸取上层血清。保存条件常温下不超过8小时；4℃不超过48小时；48小时以上的应置于-20℃保存；提取RNA的应立即置于-80℃保存。避免反复冻融。*标本处理和保存血液标本处理操作规程血清的分离*51标本处理和保存血液标本处理操作规程血浆的分离采血时应采用有抗凝剂的采血管；采血后，1000～1200g离心10min