6呼吸酶的简易测定法

中国海洋大学实验报告2021年11月17号课程：植物生理学实验题目：呼吸酶的简易测定法一、实验目的学习植物呼吸酶的定性鉴定方法，了解呼吸酶在植物呼吸代谢中的作用。二、实验原理呼吸作用是一系列的氧化复原作用，其中间步骤是靠各种氧化酶和复原酶促进的，根据它们氧化复原反响的特性和特殊的底物或受氢体，于反响后能产生特定的颜色，从而区分呼吸酶的存在。三、仪器试剂1.仪器及用品培养箱，试管，试管架，移液管，研钵，纱布，漏斗，胶头滴管2.试剂〔1〕3%H2O2〔2〕0.025%甲烯兰〔3〕液体石蜡〔4〕1.5%邻苯二酚四、实验材料马铃薯，白菜五、实验步骤1．去氢酶取马铃薯块茎去皮后，切成10块5mm见方的小块，分成两组，分别放进两个试管中，每个试管中各加5mL0.025%甲烯兰溶液，其中一组煮沸10分钟，然后在液面上各加一薄层液体石蜡，以阻止空气进入甲烯兰溶液中。将试管放入25℃的培养箱中，一天后观察试管内溶液及马铃薯小块颜色的变化，未煮沸试管内甲烯兰溶液会变成无色。然后把试管内液面上的石蜡油吸去，取出管内的马铃薯小块放在纸上暴露于空气中再观察颜色的变化，并说明变化的原因。2．氧化酶取马铃薯5g剪碎放入研钵中，加蒸馏水少许研碎，再参加蒸馏水约15ml混匀，用纱布过滤到一个小烧杯中备用。取两个试管，分别加3ml上述滤液，其中一个试管先煮沸数分钟，然后各加10滴新鲜配制的1.5%邻苯二酚溶液，观察有何现象，如溶液产生褐色、红色、紫色或蓝色，那么表示邻苯二酚已经被氧化，氧化程度不同，那么产生不同的颜色。用白菜重复上述步骤。3．过氧化物酶分别取白菜的滤液3ml加到两个试管中，其中一个试管先煮沸数分钟，然后各加10滴新鲜配制的1.5%邻苯二酚溶液和5ml3%的H2O2的溶液，如有褐色或蓝色产生，即表示过氧化物酶的存在。4．过氧化氢酶：取马铃薯块茎去皮，切四块5mm见方的小块，分为两组，其中一组煮沸10分钟，然后分别加到盛有5m13%H2O2的试管中，观察有什么变化？并加以说明。六、实验结果及分析1、去氢酶实验结果：左边为煮沸的，右边为实验组。实验组马铃薯块的外表蓝色明显变浅，说明土豆中含有去氢酶。原因：马铃薯中含有去氢酶，一开始溶液中的氧气作为氢的受体，氧气被用完后，因为溶液外表有液体石蜡，氧气不能得到补充，甲烯兰就作为氢的受体被复原成无色的复原化合物—无色甲烯兰，将马铃薯小块取出暴露于空气中后，无色甲烯兰又被空气中的氧气氧化成蓝色的甲烯兰。2、氧化酶实验结果：左边是白菜，右边是马铃薯。实验组溶液均变为褐色，说明白菜和马铃薯细胞中都有氧化酶，且马铃薯中氧化酶的含量和活性高。3、过氧化物酶实验结果：右边为煮沸试管，左边为实验组，溶液变为褐色，说明有过氧化物酶的存在。4、过氧化氢酶实验结果：左边为未煮沸的试管，右边为煮沸的试管。未煮沸的试管中产生大量气泡，而煮沸的试管中几乎没有气泡。原因：因为马铃薯种含有过氧化氢酶，可以将H2O2快速分解产生大量O2，而煮沸的试管中，马铃薯中的过氧化氢酶因高温而失活，无法分解H2O2，只有H2O2自身缓慢分解，产生少量气泡。七、思考题1、如果植物体含有氧化酶如何鉴定其是否含有过氧化物酶？往得到的植物液中加10滴新鲜配制的1.5%邻苯二酚溶液，