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文档简介
脲酶活性的测定(cèdìng)第一页,共12页。一、实验(shíyàn)目的1、掌握(zhǎngwò)大豆制品中脲酶活性的测定原理2、熟悉(shúxī)掌握用PH增值法测定大豆制品中脲酶活性第二页,共12页。二、测定(cèdìng)原理将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合,在30℃保持30分钟,尿素酶催化尿素水解产生氨,由于尿素水解释放的氨是碱性的,可使溶液PH值升高,试样溶液与空白(kòngbái)溶液的PH值之差,即可间接表示出氨量的多少。NH2CONH2+尿素(niàosù)酶2NH3↑+CO2第三页,共12页。三、仪器(yíqì)及试剂1、仪器(yíqì)分析(fēnxī)天平、样品粉碎机、样品分析(fēnxī)筛、恒温水浴、酸度计、称量瓶、移液管、角匙等第四页,共12页。样品(yàngpǐn)试验的PH值与空白试验的PH值两者之间的差异,则为脲酶活性的指数,即:样品(yàngpǐn)试验的PH值与空白试验的PH值两者之间的差异,则为脲酶活性的指数,即:分析(fēnxī)天平、样品粉碎机、样品分析(fēnxī)筛、恒温水浴、酸度计、称量瓶、移液管、角匙等分析(fēnxī)天平、样品粉碎机、样品分析(fēnxī)筛、恒温水浴、酸度计、称量瓶、移液管、角匙等△PH<0.2、熟悉(shúxī)掌握用PH增值法测定大豆制品中脲酶活性△PH<0.05mol/L磷酸盐缓冲溶液(huǎnchōnɡrónɡyè),加塞混合,置于30℃水浴中。05mol/L磷酸盐缓冲溶液(huǎnchōnɡrónɡyè),加塞混合,置于30℃水浴中。05mol/L磷酸盐缓冲溶液(huǎnchōnɡrónɡyè),加塞混合,置于30℃水浴中。脲酶活性的测定(cèdìng)NH2CONH2+尿素(niàosù)酶2NH3↑+CO2四、试样(shìyànɡ)的选取和制备05mol/L磷酸盐缓冲溶液(huǎnchōnɡrónɡyè),加塞混合,置于30℃水浴中。2、试剂(shìjì)1、掌握(zhǎngwò)大豆制品中脲酶活性的测定原理0.05mol/L磷酸盐缓冲液、尿素(niàosù)缓冲溶液等2、试剂(shìjì)四、试样(shìyànɡ)的选取和制备
选取具有代表性的试样,粉碎至40目,用“四分法”缩减至200~300g,密闭保存,以防试样组分变化或变质。第五页,共12页。NH2CONH2+尿素(niàosù)酶2NH3↑+CO2准确称取0.分析(fēnxī)天平、样品粉碎机、样品分析(fēnxī)筛、恒温水浴、酸度计、称量瓶、移液管、角匙等001g样品于称量瓶中,加入10ml尿素缓冲溶液,加塞混合,然后置于30℃水浴(shuǐyù)中,在混合操作时称量瓶切勿倒置。1、掌握(zhǎngwò)大豆制品中脲酶活性的测定原理05mol/L磷酸盐缓冲溶液(huǎnchōnɡrónɡyè),加塞混合,置于30℃水浴中。选取具有代表性的试样,粉碎至40目,用“四分法”缩减至200~300g,密闭保存,以防试样组分变化或变质。分析(fēnxī)天平、样品粉碎机、样品分析(fēnxī)筛、恒温水浴、酸度计、称量瓶、移液管、角匙等△PH<0.1、掌握(zhǎngwò)大豆制品中脲酶活性的测定原理3、样品试验与空白试验的制备应相隔(xiānggé)5分钟,并且每隔5分钟搅拌内容物一次。五、测定(cèdìng)步骤1、样品试验:准确称取0.200±0.001g样品于称量瓶中,加入10ml尿素缓冲溶液,加塞混合,然后置于30℃水浴(shuǐyù)中,在混合操作时称量瓶切勿倒置。第六页,共12页。2、空白试验:准确称取0.200±0.001g样品于称量瓶中,加入10ml0.05mol/L磷酸盐缓冲溶液(huǎnchōnɡrónɡyè),加塞混合,置于30℃水浴中。3、样品试验与空白试验的制备应相隔(xiānggé)5分钟,并且每隔5分钟搅拌内容物一次。第七页,共12页。4、30分钟后,相隔5分钟将样品与空白试验的称量瓶从水浴中取出,将上层(shàngcéng)液体移入5ml烧杯中,在从水浴中取出刚达5分钟时,分别测定此种上层(shàngcéng)液体的PH值。第八页,共12页。1、计算公式:六、结果(jiēguǒ)的计算样品(yàngpǐn)试验的PH值与空白试验的PH值两者之间的差异,则为脲酶活性的指数,即:脲酶活性=试样的PH测定(cèdìng)值-空白的PH测定(cèdìng)值第九页,共12页。每个样品应取两个平行(píngxíng)样测定,以其算术平均值为结果。2、重复性:七、注意事项1、关于(guānyú)酸度计的使用第十页,共12页。BACK2、称量瓶应塞紧3、关于(guānyú)固定质量称量
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