药典无菌检查常州培训2021完整版课件

药典无菌检查常州培训药典无菌检查常州培训12

主要内容无菌产品理念无菌和无菌检查法概念无菌操作及无菌技术要求无菌检查法的局限性医疗器具无菌检验依据实验环境条件及人员要求试验主要设备培养基种类用途及配制要求培养基适用性检查方法适用性试验供试品的无菌检查十二月2222主要内容十二月2221、无菌产品理念灭菌产品的无菌保证不能依赖最终产品的无菌检验，它是作为确定批无菌产品是否无菌的一个检验项目，而产品的无菌保证要取决于生产过程中采用合格的灭菌工艺、良好的无菌保证体系和严格的GMP管理。十二月22331、无菌产品理念十二月22334

无菌：是指某一物体或某一环境中不含有活的微生物。无菌检查法：用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。2、无菌和无菌检查法概念十二月22442、无菌和无菌检查法概念十二月3、无菌操作及无菌技术要求无菌操作

是指在无菌环境条件下，在对无菌制品或无菌器械等进行检验的过程中，能防止微生物污染与干扰的一种常规操作方法。无菌技术是指在微生物试验工作中，控制或防止各类微生物的污染及其他干扰的一系列操作方法和有关措施，无菌试验器材及无菌操作。十二月22553、无菌操作及无菌技术要求无菌操作十二月2255

4、无菌检查法的局限性若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试

品在该检验条件下未发现微生物污染。十二月22664、无菌检查法的局限性十二月22667

5、医疗器具无菌检验依据本规范选用于《中国药典》2015年版四部1101无菌检查法。GB/T14233.2-2005《医用输液、输血、注射器具检验方法，第二部分：生物试验方法中规定的无菌试验方法。十二月22775、医疗器具无菌检验依据十二月2278

6、实验环境条件要求

2015药典无菌检查：应在无菌条件下进行，试验环境必须达到无菌检查的要求，检验全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止微生物污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。隔离系统按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。十二月2288

6、实验环境条件要求十二月228

6.1实验环境洁净度要求（修改）十二月22996.1实验环境洁净度要求（修改）十二月229910

6.2实验环境人员要求：

菌检人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术培训。十二月221010

6.2实验环境人员要求：十二月2210117

、试验主要设备细菌培养箱霉菌培养箱超净工作台可调温的培养箱显微镜台式高压蒸汽灭菌器立式高压蒸汽灭菌器电热恒温干燥箱集菌仪十二月2211117、试验主要设备细菌培养箱十二月221112

试验仪器（1）-超净工作台十二月221212

试验仪器（1）-超净工作台十二月221213

试验设备（2）--隔水式恒温培养箱十二月221313

试验设备（2）--隔水式恒温培养箱十二月221314

试验设备（3）----霉菌培养箱十二月221414

试验设备（3）----霉菌培养箱十二月221415试验设备（4）-立式高压蒸汽灭菌器十二月221515试验设备（4）-立式高压蒸汽灭菌器十二月221516试验设备（5）--台式蒸汽灭菌器十二月221616试验设备（5）--台式蒸汽灭菌器十二月221617试验设备（6）--显微镜十二月221717试验设备（6）--显微镜十二月221718试验设备（7）-生物安全柜十二月221818试验设备（7）-生物安全柜十二月221819试验设备（8）Equinox全自动无菌检验系统十二月221919试验设备（8）Equinox全自动无菌检验系统十二月208、培养基种类及用途

硫乙醇酸盐流体基（主要用于厌气菌培养、也可用于需氧菌培养）胰酪大豆胨液体基（用于真菌和需氧菌培养）十二月2220208、培养基种类及用途十二月2220218.1培养基配制及要求培养基的灭菌：配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。保存时间：制备好的培养基应保存在：2～25℃、避光环境。非密闭容器中：一般在三周内使用；密闭容器中：一般可在一年内使用。十二月2221218.1培养基配制及要求十二月2221228.2培养基配制及要求硫乙醇酸盐培养基：配制后调节PH值为弱碱性，使灭菌后在25℃的pH为7.1±0.2，分装在适宜的容器中，其装量与容器高度的比列应符合培养后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度1/2。灭菌。在供试品接种前，培养基的氧化层（粉红色）的高度不得超过培养基深度的1／5，否则，须经100℃水浴加热至粉红色消失（不超过20分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。硫乙醇酸盐培养基：置30～35℃培养。十二月2222228.2培养基配制及要求硫乙醇酸盐培养基：配制后调节PH238.3培养基配制及要求

胰酪大豆胨液体基：取培养基成分混合，微温溶解，滤过，调节PH值约为7.3±0.2，加入葡萄糖，摇匀，分装，灭菌。胰酪大豆胨液体基：置20～25℃培养。十二月2223238.3培养基配制及要求十二月2223248.4培养基配制及要求

培养基装量：对于采用直接接种法检查的供试品，应根据供试品接种量确定培养基的装量，每个容器中培养基的用量应符合接种的供试品体积不大于培养基体积的10%。供试品检查时，培养基的用量和高度同方法适用性试验。十二月2224248.4培养基配制及要求十二月222425

9、培养基适用性检查无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符合培养基的无菌检查及灵敏度检查的要求。无菌性检查：每批培养基随机取不少于5支（瓶），置培养基规定的温度培养14天，应无菌生长。灵敏度检查：用于培养基灵敏度检查所用的菌株传代不得超过5代（从菌种保存中心获得的干燥菌种为0代），采用适宜的方法保存；并以保证试验菌株的生物学特性。十二月222525

9、培养基适用性检查无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基269.1培养基适用性检查菌种：试验用菌株及菌液制备：金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003铜绿色假单胞菌[CMCC(B)10104]枯草杆菌[CMCC(B)63501]生孢梭菌[CMCC(B)64941]白色念珠菌[CMCC(F)98001]黑曲霉[CMCC(F)98003]

十二月2226269.1培养基适用性检查十二月222627十二月22注：10倍梯度稀释；选择适宜的3个稀释级别；要求＜100cfu/ml。2727十二月22注：10倍梯度稀释；选择适宜的3个稀释级别；289.2

培养基适用性检查

菌液制备

接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24h；接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养24～48h，上述培养物用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌量小于100cfu菌悬液；接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，20～25℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管中，用含0.05%（V/V）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数小于100cfu孢子悬液；（如表9.3）注：菌悬液在室温下2h使用,若保存在2～8℃可在24小时内使用。十二月2228289.2培养基适用性检查菌液制备十二月29

9.3培养基灵敏度检查

菌种

接种培养基培养温度℃培养时间金黄色葡萄球菌新鲜培养物至胰酪大豆胨液体基或胰酪大豆胨琼脂基上30～35

18～24h铜绿假单孢菌枯草芽孢杆菌生孢梭菌新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中白色念珠菌新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基上20～2524～48h黑曲霉新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上20～255～7d十二月22培养基灵敏度检查使用6株菌见下表2929菌种接种培养基培养温度℃培养时间金黄309.4培养基适用性检查培养基接种

金黄色葡萄球菌2支

硫乙醇酸盐流体培养基铜绿假单胞菌2支

12ml（7支）生孢梭菌2支

空白对照1支分别接种小于100cfu金黄色葡萄球菌、铜绿假单孢菌、生孢梭菌菌悬液各2支,另1支不接种作为空白对照,培养3天，逐日观察结果。十二月2230309.4培养基适用性检查培养基接种十二月319.5培养基适用性检查

培养基接种枯草芽孢杆菌2支

胰酪大豆胨液体基白色念株菌2支9ml（7支）

黑曲霉2支

空白对照1支每分别接种小于100cfu枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支,另1支不接种作为空白对照,培养5天，逐日观察结果。

十二月2231319.5培养基适用性检查培养基接种329.6

培养基适用性检查结果判断

空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管试验菌生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。十二月2232329.6培养基适用性检查结果判断十二月2233310.

方法适用性试验试验目的:1)进行无菌检查时，应进行方法适应性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的无菌检查；2)若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，应重新进行方法适用性试验；3)方法适用性试验按“供试品的无菌检查”的规定及下列要求进行操作。对每一试验菌应逐一进行方法确认。十二月22333310.方法适用性试验试验目的:十二月22333410.1

方法适用性试验

菌种及菌液制备：除大肠埃希菌（Escherichiacoli）[CMCC(B)44102〕外，金黄色葡萄球菌

、

枯草芽孢杆菌

、

生孢梭菌、

白色念珠菌、黑曲霉同培养基灵敏度检查。

注：大肠埃希菌的菌液制备同金黄色葡萄球菌。

十二月22343410.1方法适用性试验十二月223410.2

方法适用性试验薄膜过滤法直接接种法取每种培养基规定接种的供试品总量按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入小于100cfu试验菌，过滤。加硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基至滤筒内。另取一装同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作为对照。置规定温度培养3～5天。各试验菌同法操作。取符合直接接种法培养基用量要求的硫乙醇酸盐流体培养基6管，分别接入小于l00cfu的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌各2管；取符合直接接种法培养基用量要求的胰酪大豆胨液体基6管，分别接入小于l00cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2管。其中1管接入规定量的供试品，另1管作为对照，按规定的温度培养3～5天。十二月223510.2方法适用性试验薄膜过滤法直接接种法取每种培养基规3610.3方法适用性试验结果判断

与对照管比较，如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，则说明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，照此检查法和检验条件进行供试品的无菌检查。如含供试品的任一容器中试验菌生长微弱、缓慢或不生长，则说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用。可采用：1)增加冲洗量，或增加培养基的用量；2)使用中和剂，或更换滤膜品种等方法，消除供试品的抑菌作用，并重新进行方法适用性试验。注：方法适用性试验也可与供试品的无菌检查同时进行。十二月22363610.3方法适用性试验结果判断十二月2236

11、供试品的无菌检查

无菌检查法包括薄膜过滤法和直接接种法。供试品无菌检查所采用的检查和检验条件应与方法适用性试验确认的方法相同。无菌试验过程中，若需试验表面活性剂、中和剂，应证明其有效性，且对微生物无毒性。37十二月223711、供试品的无菌检查37十二月223711.1

供试品无菌检查检验数量：

检验量：检验数量是指一次试验所用供试品最小包装容器的数量。是指供试品每个最小包装接种至每份培养基的最小量（g或ml）。十二月223811.1供试品无菌检查检验数量：检验量：检验数量是指一次11.2

供试品的无菌检查无抑菌作用及抗革兰氏阳性为主的供试品以金黄色葡萄球菌为对照菌；抗革兰氏阴性菌为主的供试品以大肠埃希菌为对照菌;抗厌氧菌的供试品以生孢梭菌为对照菌；抗真菌的供试品以白色念珠菌为对照菌。阳性对照试验的菌液制备同方法适用性试验，加菌量小于100cfu,供试品用量同供试品无菌检查时每份培养基接种的样品量。阳性对照管培养48～72小时应生长良好。

阳性对照应根据供试品特性选择阳性对照菌：十二月223911.2供试品的无菌检查无抑菌作用及抗革兰氏阳性为主的供试11.3

供试品的无菌检查

阴性对照：供试品无菌检查时，应取相应溶剂和稀释液、冲洗液同法操作，作为阴性对照；阴性对照不得有菌生长。

十二月22404011.3供试品的无菌检查阴性对照：十二月2244111.4

供试品的无菌检查

薄膜过滤法：薄膜过滤法应采用封闭式薄膜过滤器。无菌检查用的滤膜孔径应不大于0.45μm，直径约为50mm。根据供试品及其溶剂的特性选择滤膜材质。使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤润湿滤膜。油类供试品，其滤膜和过滤器在使用前应充分干燥，为发挥滤膜最大过滤效率，应注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试品经薄膜过滤后，若需要冲洗液冲洗滤膜。每张滤膜每次冲洗量为100ml.,且总冲洗量不得超过1000ml，以避免滤膜上的微生物受损伤。十二月22414111.4供试品的无菌检查薄膜过滤法：十二月11.5

供试品的无菌检查水溶性供试品：取规定量，直接过滤，或混合至含不少于100ml适宜稀释的无菌容器中，混匀，立即过滤。如供试品具有抑菌作用，须用冲洗液冲洗滤膜。冲洗次数不少于三次，所用的冲洗量、冲洗方法同方法适用性试验。除生物制品外，一般样品冲洗后，1份滤器加入100ml硫乙醇酸盐流体培养基，1份滤器加入100ml胰酪大豆胨液体培养基。例如：十二月224211.5供试品的无菌检查例如：十二月224211.6供试品的无菌检查水溶性固体供试品：取规定量，加适宜的稀释液溶解或按标签说明复溶，然后按水溶液供试品项下的方法进行操作。具有导管的医疗器具（输血、输液袋等）供试品：取规定量，每个小包装用50-100ml冲洗液分别冲洗内壁，收集冲洗液于无菌容器中，然后照水溶液供试品项下方法操作。同时应采用直接接种法进行包装中所配带的针头的无菌检查。十二月224311.6供试品的无菌检查十二月224311.7

供试品的无菌检查具有导管的医疗器具（输血、输液袋等）供试品：取规定量，每个小包装用50-100ml冲洗液分别冲洗内壁，收集冲洗液于无菌容器中，然后照水溶液供试品项下方法操作。同时应采用直接接种法进行包装中所配带的针头的无菌检查。十二月224411.7供试品的无菌检查十二月22444511.8

供试品无菌检查

直接接种法：

适用于无法用薄膜过滤法进行无菌检查的供试品，即取规定量供试品分别等量接种至硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基中。除生物制品外，一般样品无菌检查时两种培养基接种的支/瓶数相等；生物制品无菌检查时硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基接种的支/瓶数为2：1。除另有规定外，每个容器中培养基的用量应符合接种的供试品体积不得大于培养基体积的10%，同时，硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不少于15ml，胰酪大豆胨液体培养基每管装量不少于10ml。供试品检查时，培养基的用量和高度同方法适用性试验。

十二月22454511.8供试品无菌检查直接接种法：十二月2211.9供试品的无菌检查例如：混悬液等非澄清水溶液供试品取规定量，等量接种至各管培养基中。固体供试品取规定量，直接等量接种至各管培养基中。或加适宜的溶剂溶解，或按标签说明复溶后，取规定量等量接种至培养基中。非水溶液供试品取规定量，混合，加入适量的聚山梨酯80或其它适宜的乳化剂及稀释剂使其乳化，等量接种至各管培养基中。敷料供试品取规定数量，以无菌操作拆开每个包装，于不同部位剪取约100mg或1cm×3cm的供试品，等量接种于各管足以浸没供试品的适量培养基中。肠线、缝合线以及其它一次性适宜的医用材料按规定量取最小包装，无菌拆开包装，等量接种于各管足以浸没供试品的适量培养基中。灭菌医用器具取规定量，必要时应将其拆散或切成下碎段，等量接种于各管足以浸没供试品的适量培养基中。放射性药品取供试品1瓶（支），等量接种于装量7.5ml的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体基中。每管接种0.2ml。十二月224611.9供试品的无菌检查例如：混悬液等非澄清水11.10

供试品的无菌检查培养及观察：将接种的供试品后培养基容器分别按各培养基规定的温度培养14天；接种生物制品供试品的硫乙醇酸盐流体培养基的容器应分成两等份，一份置30～35℃，一份置20～25℃培养。培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。若加入供试品后或培养过程中，培养基出现浑浊，培养14天后，不能从外观上判断有无微生物生长，可取培养液适量转种同种新鲜培养基中，培养3天，观察接种新鲜培养基是否再出现浑浊；或取培养液涂片，染色，镜检，判定是否有菌。十二月224711.10供试品的无菌检查培养及观察：十二月2244810.11

供试品的无菌检查结果判断：阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长，否则试验无效。若供试品管均澄清，或显浑浊但经确证无菌生长，判供试品符合规定；若供试品中任何一管显浑浊并确证有菌生长判供试品符合规定，除非能充分证明试验结果无效，即生长的微生物非供试品所含。符合下列任何一个条件，可判试验结果无效：（1）无菌检查试验所用的设备及环境的微生物监控结果不符合无菌检查法的要求。（2）回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的因素。（3）供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌试验中所使用的物品和（或）无菌操作技术不当引起的。十二月22484810.11供试品的无菌检查十二月22484911.12

供试品的无菌检查结果判断：试验若经确认无效，应重试。重试时，重新取同量供试品，依法检查，若无菌生长，判供试品符合规定；若有菌生长，判供试品不符合规定。十二月22494911.12供试品的无菌检查结果判断：十二月2表1批出厂产品及生物制品的原液和半成品最少检验数量

十二月2250注：若供试品每个容器内的装量不够接种两种培养基，那么表中的最少检验数量加倍50表1批出厂产品及生物制品的原液和半成品最少检验数量十二十二月225151十二月225151注：①如果医用器械体积过大，培养基用量可在2000ml以上，将其完全浸没。52表3.供试品的最少检验量十二月2252注：①如果医用器械体积过大，培养基用量可在2000ml以谢谢大家！Thankyou

十二月2253谢谢大家！十二月22532.问题永远在自己身上。29、含泪播种的人一定能含笑收获。7.当一个小小的心念变成成为行为时，便能成了习惯;从而形成性格，而性格就决定你一生的成败。15.过错是暂时的遗憾，而错过则是永远的遗憾!8.只有不断找寻机会的人才会及时把握机会。17.秋天，树叶黄了，枯了，快要脱落了。枯黄的叶子离开了枝头，在风中飞舞着，怀着对金秋季节无比眷恋的心情离去。假如我是落叶，我愿意很快地落在地上，又很快地被水溶化，然后钻进又黑又香的泥土里，尽情拥抱这些又大又小又粗又细的树根。5.人生有两种痛苦，一种是努力的痛苦，一种是后悔的痛苦，但后者比前者大无数倍。13.一座城市令你念念不忘，大抵是因为，那里有你深爱的人和一去不复返的青春。18、挫折其实就是迈向成功所应缴的学费。9.也许我的点评有点苛刻，但是说的都是真话。12.昨晚多几分钟的准备，今天少几小时的麻烦。2.即使没有月亮，心中也是一片皎洁。8.向着目标奔跑，何必在意折翼的翅膀，只要信心不死，就看的见方向，顺风适合行走，逆风更适合飞翔，人生路上什么都不怕，就怕自己投降。16.我从来不认为半小时是我微不足道的很小的一段时间。6.再长的路，一步步也能走完，再短的路，不迈开双脚也无法到达。3.空想会想出很多绝妙的主意，但却办不成任何事情。8.只有不断找寻机会的人才会及时把握机会。2.问题永远在自己身上。54药典无菌检查常州培训药典无菌检查常州培训5556

主要内容无菌产品理念无菌和无菌检查法概念无菌操作及无菌技术要求无菌检查法的局限性医疗器具无菌检验依据实验环境条件及人员要求试验主要设备培养基种类用途及配制要求培养基适用性检查方法适用性试验供试品的无菌检查十二月22562主要内容十二月2221、无菌产品理念灭菌产品的无菌保证不能依赖最终产品的无菌检验，它是作为确定批无菌产品是否无菌的一个检验项目，而产品的无菌保证要取决于生产过程中采用合格的灭菌工艺、良好的无菌保证体系和严格的GMP管理。十二月2257571、无菌产品理念十二月223358

无菌：是指某一物体或某一环境中不含有活的微生物。无菌检查法：用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。2、无菌和无菌检查法概念十二月225842、无菌和无菌检查法概念十二月3、无菌操作及无菌技术要求无菌操作

是指在无菌环境条件下，在对无菌制品或无菌器械等进行检验的过程中，能防止微生物污染与干扰的一种常规操作方法。无菌技术是指在微生物试验工作中，控制或防止各类微生物的污染及其他干扰的一系列操作方法和有关措施，无菌试验器材及无菌操作。十二月2259593、无菌操作及无菌技术要求无菌操作十二月2255

4、无菌检查法的局限性若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试

品在该检验条件下未发现微生物污染。十二月2260604、无菌检查法的局限性十二月226661

5、医疗器具无菌检验依据本规范选用于《中国药典》2015年版四部1101无菌检查法。GB/T14233.2-2005《医用输液、输血、注射器具检验方法，第二部分：生物试验方法中规定的无菌试验方法。十二月226175、医疗器具无菌检验依据十二月22762

6、实验环境条件要求

2015药典无菌检查：应在无菌条件下进行，试验环境必须达到无菌检查的要求，检验全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止微生物污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。隔离系统按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。十二月22628

6、实验环境条件要求十二月228

6.1实验环境洁净度要求（修改）十二月2263636.1实验环境洁净度要求（修改）十二月229964

6.2实验环境人员要求：

菌检人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术培训。十二月226410

6.2实验环境人员要求：十二月2210657

、试验主要设备细菌培养箱霉菌培养箱超净工作台可调温的培养箱显微镜台式高压蒸汽灭菌器立式高压蒸汽灭菌器电热恒温干燥箱集菌仪十二月2265117、试验主要设备细菌培养箱十二月221166

试验仪器（1）-超净工作台十二月226612

试验仪器（1）-超净工作台十二月221267

试验设备（2）--隔水式恒温培养箱十二月226713

试验设备（2）--隔水式恒温培养箱十二月221368

试验设备（3）----霉菌培养箱十二月226814

试验设备（3）----霉菌培养箱十二月221469试验设备（4）-立式高压蒸汽灭菌器十二月226915试验设备（4）-立式高压蒸汽灭菌器十二月221570试验设备（5）--台式蒸汽灭菌器十二月227016试验设备（5）--台式蒸汽灭菌器十二月221671试验设备（6）--显微镜十二月227117试验设备（6）--显微镜十二月221772试验设备（7）-生物安全柜十二月227218试验设备（7）-生物安全柜十二月221873试验设备（8）Equinox全自动无菌检验系统十二月227319试验设备（8）Equinox全自动无菌检验系统十二月748、培养基种类及用途

硫乙醇酸盐流体基（主要用于厌气菌培养、也可用于需氧菌培养）胰酪大豆胨液体基（用于真菌和需氧菌培养）十二月2274208、培养基种类及用途十二月2220758.1培养基配制及要求培养基的灭菌：配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。保存时间：制备好的培养基应保存在：2～25℃、避光环境。非密闭容器中：一般在三周内使用；密闭容器中：一般可在一年内使用。十二月2275218.1培养基配制及要求十二月2221768.2培养基配制及要求硫乙醇酸盐培养基：配制后调节PH值为弱碱性，使灭菌后在25℃的pH为7.1±0.2，分装在适宜的容器中，其装量与容器高度的比列应符合培养后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度1/2。灭菌。在供试品接种前，培养基的氧化层（粉红色）的高度不得超过培养基深度的1／5，否则，须经100℃水浴加热至粉红色消失（不超过20分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。硫乙醇酸盐培养基：置30～35℃培养。十二月2276228.2培养基配制及要求硫乙醇酸盐培养基：配制后调节PH778.3培养基配制及要求

胰酪大豆胨液体基：取培养基成分混合，微温溶解，滤过，调节PH值约为7.3±0.2，加入葡萄糖，摇匀，分装，灭菌。胰酪大豆胨液体基：置20～25℃培养。十二月2277238.3培养基配制及要求十二月2223788.4培养基配制及要求

培养基装量：对于采用直接接种法检查的供试品，应根据供试品接种量确定培养基的装量，每个容器中培养基的用量应符合接种的供试品体积不大于培养基体积的10%。供试品检查时，培养基的用量和高度同方法适用性试验。十二月2278248.4培养基配制及要求十二月222479

9、培养基适用性检查无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符合培养基的无菌检查及灵敏度检查的要求。无菌性检查：每批培养基随机取不少于5支（瓶），置培养基规定的温度培养14天，应无菌生长。灵敏度检查：用于培养基灵敏度检查所用的菌株传代不得超过5代（从菌种保存中心获得的干燥菌种为0代），采用适宜的方法保存；并以保证试验菌株的生物学特性。十二月227925

9、培养基适用性检查无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基809.1培养基适用性检查菌种：试验用菌株及菌液制备：金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003铜绿色假单胞菌[CMCC(B)10104]枯草杆菌[CMCC(B)63501]生孢梭菌[CMCC(B)64941]白色念珠菌[CMCC(F)98001]黑曲霉[CMCC(F)98003]

十二月2280269.1培养基适用性检查十二月222681十二月22注：10倍梯度稀释；选择适宜的3个稀释级别；要求＜100cfu/ml。8127十二月22注：10倍梯度稀释；选择适宜的3个稀释级别；829.2

培养基适用性检查

菌液制备

接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24h；接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养24～48h，上述培养物用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌量小于100cfu菌悬液；接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，20～25℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管中，用含0.05%（V/V）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数小于100cfu孢子悬液；（如表9.3）注：菌悬液在室温下2h使用,若保存在2～8℃可在24小时内使用。十二月2282289.2培养基适用性检查菌液制备十二月83

9.3培养基灵敏度检查

菌种

接种培养基培养温度℃培养时间金黄色葡萄球菌新鲜培养物至胰酪大豆胨液体基或胰酪大豆胨琼脂基上30～35

18～24h铜绿假单孢菌枯草芽孢杆菌生孢梭菌新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中白色念珠菌新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基上20～2524～48h黑曲霉新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上20～255～7d十二月22培养基灵敏度检查使用6株菌见下表8329菌种接种培养基培养温度℃培养时间金黄849.4培养基适用性检查培养基接种

金黄色葡萄球菌2支

硫乙醇酸盐流体培养基铜绿假单胞菌2支

12ml（7支）生孢梭菌2支

空白对照1支分别接种小于100cfu金黄色葡萄球菌、铜绿假单孢菌、生孢梭菌菌悬液各2支,另1支不接种作为空白对照,培养3天，逐日观察结果。十二月2284309.4培养基适用性检查培养基接种十二月859.5培养基适用性检查

培养基接种枯草芽孢杆菌2支

胰酪大豆胨液体基白色念株菌2支9ml（7支）

黑曲霉2支

空白对照1支每分别接种小于100cfu枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支,另1支不接种作为空白对照,培养5天，逐日观察结果。

十二月2285319.5培养基适用性检查培养基接种869.6

培养基适用性检查结果判断

空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管试验菌生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。十二月2286329.6培养基适用性检查结果判断十二月2238710.

方法适用性试验试验目的:1)进行无菌检查时，应进行方法适应性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的无菌检查；2)若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，应重新进行方法适用性试验；3)方法适用性试验按“供试品的无菌检查”的规定及下列要求进行操作。对每一试验菌应逐一进行方法确认。十二月22873310.方法适用性试验试验目的:十二月22338810.1

方法适用性试验

菌种及菌液制备：除大肠埃希菌（Escherichiacoli）[CMCC(B)44102〕外，金黄色葡萄球菌

、

枯草芽孢杆菌

、

生孢梭菌、

白色念珠菌、黑曲霉同培养基灵敏度检查。

注：大肠埃希菌的菌液制备同金黄色葡萄球菌。

十二月22883410.1方法适用性试验十二月223410.2

方法适用性试验薄膜过滤法直接接种法取每种培养基规定接种的供试品总量按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入小于100cfu试验菌，过滤。加硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基至滤筒内。另取一装同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作为对照。置规定温度培养3～5天。各试验菌同法操作。取符合直接接种法培养基用量要求的硫乙醇酸盐流体培养基6管，分别接入小于l00cfu的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌各2管；取符合直接接种法培养基用量要求的胰酪大豆胨液体基6管，分别接入小于l00cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2管。其中1管接入规定量的供试品，另1管作为对照，按规定的温度培养3～5天。十二月228910.2方法适用性试验薄膜过滤法直接接种法取每种培养基规9010.3方法适用性试验结果判断

与对照管比较，如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，则说明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，照此检查法和检验条件进行供试品的无菌检查。如含供试品的任一容器中试验菌生长微弱、缓慢或不生长，则说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用。可采用：1)增加冲洗量，或增加培养基的用量；2)使用中和剂，或更换滤膜品种等方法，消除供试品的抑菌作用，并重新进行方法适用性试验。注：方法适用性试验也可与供试品的无菌检查同时进行。十二月22903610.3方法适用性试验结果判断十二月2236

11、供试品的无菌检查

无菌检查法包括薄膜过滤法和直接接种法。供试品无菌检查所采用的检查和检验条件应与方法适用性试验确认的方法相同。无菌试验过程中，若需试验表面活性剂、中和剂，应证明其有效性，且对微生物无毒性。91十二月229111、供试品的无菌检查37十二月223711.1

供试品无菌检查检验数量：

检验量：检验数量是指一次试验所用供试品最小包装容器的数量。是指供试品每个最小包装接种至每份培养基的最小量（g或ml）。十二月229211.1供试品无菌检查检验数量：检验量：检验数量是指一次11.2

供试品的无菌检查无抑菌作用及抗革兰氏阳性为主的供试品以金黄色葡萄球菌为对照菌；抗革兰氏阴性菌为主的供试品以大肠埃希菌为对照菌;抗厌氧菌的供试品以生孢梭菌为对照菌；抗真菌的供试品以白色念珠菌为对照菌。阳性对照试验的菌液制备同方法适用性试验，加菌量小于100cfu,供试品用量同供试品无菌检查时每份培养基接种的样品量。阳性对照管培养48～72小时应生长良好。

阳性对照应根据供试品特性选择阳性对照菌：十二月229311.2供试品的无菌检查无抑菌作用及抗革兰氏阳性为主的供试11.3

供试品的无菌检查

阴性对照：供试品无菌检查时，应取相应溶剂和稀释液、冲洗液同法操作，作为阴性对照；阴性对照不得有菌生长。

十二月22949411.3供试品的无菌检查阴性对照：十二月2249511.4

供试品的无菌检查

薄膜过滤法：薄膜过滤法应采用封闭式薄膜过滤器。无菌检查用的滤膜孔径应不大于0.45μm，直径约为50mm。根据供试品及其溶剂的特性选择滤膜材质。使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤润湿滤膜。油类供试品，其滤膜和过滤器在使用前应充分干燥，为发挥滤膜最大过滤效率，应注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试品经薄膜过滤后，若需要冲洗液冲洗滤膜。每张滤膜每次冲洗量为100ml.,且总冲洗量不得超过1000ml，以避免滤膜上的微生物受损伤。十二月22954111.4供试品的无菌检查薄膜过滤法：十二月11.5

供试品的无菌检查水溶性供试品：取规定量，直接过滤，或混合至含不少于100ml适宜稀释的无菌容器中，混匀，立即过滤。如供试品具有抑菌作用，须用冲洗液冲洗滤膜。冲洗次数不少于三次，所用的冲洗量、冲洗方法同方法适用性试验。除生物制品外，一般样品冲洗后，1份滤器加入100ml硫乙醇酸盐流体培养基，1份滤器加入100ml胰酪大豆胨液体培养基。例如：十二月229611.5供试品的无菌检查例如：十二月224211.6供试品的无菌检查水溶性固体供试品：取规定量，加适宜的稀释液溶解或按标签说明复溶，然后按水溶液供试品项下的方法进行操作。具有导管的医疗器具（输血、输液袋等）供试品：取规定量，每个小包装用50-100ml冲洗液分别冲洗内壁，收集冲洗液于无菌容器中，然后照水溶液供试品项下方法操作。同时应采用直接接种法进行包装中所配带的针头的无菌检查。十二月229711.6供试品的无菌检查十二月224311.7

供试品的无菌检查具有导管的医疗器具（输血、输液袋等）供试品：取规定量，每个小包装用50-100ml冲洗液分别冲洗内壁，收集冲洗液于无菌容器中，然后照水溶液供试品项下方法操作。同时应采用直接接种法进行包装中所配带的针头的无菌检查。十二月229811.7供试品的无菌检查十二月22449911.8

供试品无菌检查

直接接种法：

适用于无法用薄膜过滤法进行无菌检查的供试品，即取规定量供试品分别等量接种至硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基中。除生物制品外，一般样品无菌检查时两种培养基接种的支/瓶数相等；生物制品无菌检查时硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基接种的支/瓶数为2：1。除另有规定外，每个容器中培养基的用量应符合接种的供试品体积不得大于培养基体积的10%，同时，硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不少于15ml，胰酪大豆胨液体培养基每管装量不少于10ml。供试品检查时，培养基的用量和高度同方法适用性试验。

十二月22994511.8供试品无菌检查直接接种法：十二月2211.9供试品的无菌检查例如：混悬液等非澄清水溶液供试品取规定量，等量接种至各管培养基中。固体供试品取规定量，直接等量接种至各管培养基中。或加适宜的溶剂溶解，或按标签说明复溶后，取规定量等量接种至培养基中。非水溶液供