重视细菌耐药性,正确采集微生物标本及运送

检验科卢宝卫重视细菌耐药性、正确采集临床微生物标本及运送抗生素时代感染仍是人类健康的主要“杀手”如果说抗菌药物的出现是人类第一次征服病菌，细菌耐药性则是对人类智慧的又一次严峻挑战。

细菌耐药性的产生是微生物的一种天然抗生现象。解决细菌耐药问题，不能单纯依靠开发抗生素，因为许多细菌耐药性是在和抗生素接触过程中产生的。

合理使用抗菌药物对细菌耐药性的产生和发展具有重要影响。合理使用抗菌药物可以降低耐药菌增长率，有效控制耐药菌感染、减少耐药菌交叉感染、降低院内感染发病率和病死率以及延长抗生素的使用寿命.卫生厅关于深入开展全区抗菌药物临床应用专项整治活动的通知〔2012〕33号通知

(一）接受限制级抗菌药物治疗的住院患者抗菌药物使用前微生物检验样本送检率不低于50%。（二）接受特殊使用级抗菌药物治疗的住院患者抗菌药物使用前微生物检验样本送检率不低于80%。。（三）科室住院患者抗菌药物使用前微生物检验样本送检率不低于30%。。临床微生物送检率包括哪些项目按照感染性疾病病原诊断与管理要求，以下各项检查可以作为计算微生物检查送检率的项目。无菌体液细菌涂片染色细菌检查合格标本细菌细菌培养肺炎链球菌尿抗原军团菌、抗原抗体检查真菌涂片及培养血清真菌G实验或GM实验成功治疗感染症三因素

‧成功分离病源菌–标本收集、运送、保存–标本处理方法–检验医师专业知识‧医师正确判读病源菌培养结果‧选择适当治疗方法标本采集的规范化是微生物检验分析前质量控制的重要内容之一

微生物检验结果是临床医师在诊疗感染症过程中所需要的重要信息，临床医师可以根据这些检验结果及病人的临床情况来区分疾病的不同阶段，观察疾病的变化，判断预后或观察疗效。所以分析前阶段样本的质量保证是直接关系到检验结果能否真实客观地反应患者当前病情的一个重要环节。标本规范化采集的重要性正确采集、处理与运送细菌培养的标本直接关系到致病菌培养的正确性与阳性率的高低，是临床细菌检验成功的关键。标本质量的好坏直接影响诊断结果的正误，不当的标本可导致假阴性、假阳性结果的出现，因此标本采集与处理的规范化是准确、及时地向临床提供重要的临床感染信息的基础。好的微生物检验标本可提升实验室工作效率及病患照顾质量，降低医疗成本。国内微生物标本的采集目前存在的问题

标本送检率低从全国来看，抗感染治疗前，送检相关标本可能只占应送标本的一半左右，与抗菌药物应用率之高形成鲜明的反差。一些医师在经验性治疗受挫后方送标本，此时已失去阳性培养的机会。标本有缺陷正确收集各种临床标本，关注特检标本采样与送检的方法和条件，是完成病原学诊断的先决条件。微生物样本采样基本原则1.及时采集微生物标本作病原学检查2.在抗菌药物使用前采集标本3.采样时严格执行无菌操作4.采样后立即送检，甚至床旁接种尤其是厌氧培养5.棉拭子标本宜用运送培养基6.混有正常菌群污染标本，不可置肉汤培养7.标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂。8.送检标本应注明来源和检验目的常见不合格标本主要有以下问题：

标本采集时间错误容器错误标本量不足标本采集延误标本未及时正确运送。。。。。。

常见易被污染的标本和部位★尿液：容易被前尿道或会阴部细菌污染★血液：常被静脉穿刺部位共生菌污染★宫颈分泌物：被无关阴道杂菌污染★瘘道：被来自胃肠的微生物污染★中耳：容易被外耳道细菌污染★鼻窦：容易被鼻咽部正常菌群污染★感染伤口：容易被皮肤和粘膜上共生菌污染最有价值的细菌学检测项目血液培养脑脊液培养胆汁培养胸腹水培养关节液其他无菌体液或分泌液2023/1/12血培养

BloodCulture目前我院血培养的问题：采血时机不合适采血套数不够采血量不足只做需氧培养，不同时做厌氧培养采血前或采血时正在使用抗生素治疗同样规模医院的血培养数国内多数三甲综合医院 2~10 瓶/天复旦大学中山医院 20～50瓶/天香港玛丽医院 200瓶/天台湾大学医院 300瓶/天“只有在发热时，才需要进行血培养。”————关于血培养指征想采就采？答案：血培养采集的症状指征怀疑患者有血流感染的症状有：不明原因的发烧(＞38℃)或体温过低(＜36℃)白细胞增多（＞10,000/ul），粒细胞减少（＜1,000ul）CRP/PCT升高休克，寒颤，僵直皮疹、肝脾肿大、关节疼痛心率异常加快低血压或高血压呼吸频率加快多器官衰竭答案：血培养采集的疾病指征严重的局部感染(脑膜炎，心内膜炎，肺炎，肾盂肾炎，腹部术后感染，…)化脓性病灶或损坏黏膜损伤性疾病肝脏疾病、血液疾病及恶性肿瘤糖尿病、艾滋病长期输液火导管介入疾病、血液透析患者“何时采血进行血培养，无特殊时间要求。”———关于采血时机？答案：采集血培养样本的最佳时间尽可能在患者寒战或开始发热时采血在患者接受抗生素治疗前采血如患者已经应用抗菌药物进行治疗，应在下一次用药之前采血培养

“为减轻患者痛苦，只从一个穿刺部位采一份血液标本即可。”———关于采血套数及部位？基本概念成人“一套”血培养应该包括需氧瓶和厌氧瓶各一个，也叫“一份”注意：一次穿刺采血，算“一套”，采集第二套应从另一个穿刺点获得。儿童一般只做需氧培养，但仍需从多个部位采集多次。特殊患者才考虑厌氧培养。

采血套数Weinsteinetal.DetectionofBloodstreamInfectionsinAdults:HowManyBloodCulturesAreNeededJClinMicrobiol.2007;45:3546-3548表皮葡萄球菌的临床意义2－3套血培养，有助于污染的判断。Tokars,JI.ClinInfectDis2004;39:333污染菌致病菌？

采集1套无法判断是病原菌还是污染菌。答案：关于血培养套数与采血部位每位患者每次采血最少2套，3套更好初发患者，绝不能只采1套标本多个穿刺部位采血。因多部位同时发生污染的几率较小，便于对结果进判断

“两套血培养采集间隔无特殊要求。”———关于采血间隔？答案：关于标本采集间隔时间对于非持续性菌血症，同时或短时间内采集2－3套血培养，因为体内巨噬细胞吞噬系统会在15～30min内清除掉进入人体内的细菌。可疑急性心内膜炎患者要立即取血作血培养，30分钟内完成3套血培养的采集，采集后立即进行抗菌药的经验治疗。如果24小时内报告阴性，则继续采集2套血培养。可疑的亚急性心内膜炎患者每间隔30分钟至1h采集1套，连续采集3套标本。如果24小时内报告阴性，则继续采集2套血培养。

“每瓶采集多少血液无特殊要求。”———关于采血量？菌血症病人血中细菌浓度成年病人:

链球菌心内膜炎1to30organisms/ml

葡萄球菌心内膜炎1to20organisms/ml

革兰氏阴性菌血症少于1to10organisms/ml

革兰氏阳性菌血症1to300organisms/ml幼儿病人:

革兰氏阴性菌血症5to1000organisms/ml75%幼儿菌血症病人血液有＞100organisms/mlInfectDisClinicsNAmer2001;15:1009

所以采血量一定要足够！

采血量(ml)与检出率的关系

Overall血培养物每增加一毫升，真性菌血症成年人微生物的检出率增加3％但并非越多越好，超过一定数量的采血量会稀释培养瓶内的肉汤，使肉汤无法有效中和血中的抑制物质（补体、抗体、抗生素）。所以血液与肉汤的最佳比例为1：4－1：10答案：关于采集血液量采血量是影响灵敏度最关键因素成人一份标本2个培养瓶（需氧＋厌氧），每瓶8－10ml，共20ml；要求至少采两份标本，即40ml。儿童一般只需采集需氧瓶，在保证采集血量＜1％总血量下，一般为1－3ml采血量不足时应优先保证需氧瓶，因临床90％以上的感染为需氧菌或兼性需氧菌感染

先采生化、凝血标本，再采血培养标本。”———关于各种血液标本的采集顺序？血培养对无菌操作的要求比注射、采集生化、凝血等其它标本要高。所以要最先采集血培养标本。污染率的指标是<3%

（100份标本里只能有不到3个标本出现污染。）答案：采各种血液标本的先后顺序“消毒的重点是足够量的消毒剂。”———关于皮肤及培养瓶消毒？皮肤消毒程序：

推荐使用碘町、洗必泰或碘伏作为皮肤消毒剂。碘町作用1min碘伏作用1.5-2min洗必泰作用时间与碘町一样（但不能用于少于2个月婴儿皮肤消毒）培养瓶的消毒程序：去掉培养瓶口的塑料瓶盖。75%酒精消毒血培养瓶橡皮塞子60秒。自然待干。将标本注入培养瓶内。5.

颠倒混匀标本与肉汤，以避免血液凝集。“培养瓶未使用时，需要冷藏或冷冻。”———关于培养瓶的储存温度？不需冷藏，更不能冷冻。保存在15－25℃的室温即可，温度过低会导致对温度敏感的耐瑟氏菌等死亡。答案：关于未用培养瓶的储存温度

“加入标本后的培养瓶夜班未能及时送到检验科，可以冷藏或放入35℃的温箱。”———关于夜班血培养的送检？

培养瓶夜班未能及时送到检验科，存在室温即可，不能冷藏也不能放入35

℃的温箱。过夜不会对检测造成影响，但仍需尽快送检。冷藏可能导致对温度敏感的耐瑟氏菌等死亡。温箱会导致细菌进入生长对数期，从而错过检测的最佳时期。答案：关于夜班血培养的送检“患者静脉中插有导管，可直接从导管采血。”———关于采血部位？

不可以，常规血培养不宜从静脉导管或静脉留置装置中采集，检出污染或定植菌的可能性较大。除非怀疑导管相关性血流感染，请参照导管相关性血流感染的采血方法。答案：关于从静脉留置装置直接采血关于导管相关性菌血症诊断依据血、导管留置部位、导管尖是同一菌脓毒血症、对抗菌药无反应、把管即好有不同的定量培养数（静脉血：导管血=1:>10)有不同的阳性报警时间上呼吸道标本

鼻咽拭子细菌培养的临床意义正常菌群干扰对病原菌的判断，所以不主张进行常规的鼻咽拭子培养只需要进行特定微生物检测（如淋病奈瑟氏菌、酵母菌、溶血隐秘杆菌、A群化脓性链球菌等拭子培养等）注意：除了有据可查的流感嗜血杆菌会炎炎病例外，没有科学证据证明流感嗜血杆菌、肺炎链球菌或金黄色葡萄球菌能引起剧烈的咽喉痛反而是进行抗生素治疗后以上菌包括肠杆菌科细菌定居会有所增加。2023/1/12下呼吸道标本

LowerRespiratoryTractSpecimens

咳痰标本的采集标本采集方法医师或护士直视下采集标本病人先漱口，去除表面的菌群教育病人深咳，收集从下呼吸道咳出的痰液临床上约半数咳痰标本不合格！2023/1/12标本质量带血痰唾液or诱导痰(?)脓痰粘液样痰关于咳痰标本在抗生素应用前采集痰标本;标本采集后1～2h内必须立即进行实验室处理咳痰标本应用最早且广泛，但也是最受争议的标本取标本前应摘去牙托，清洁口腔如刷牙和漱口深咳，采集标本过程中要有专业的医务人员指导无痰可用3％～5％NaCl5ml雾吸约5min导痰也可用物理疗法、体位引流、鼻导管抽吸等法取痰几种下呼吸道直接采集的标本经气管穿刺吸引（transtrachealaspiration,TTA）经胸壁针刺吸引（transthoracicneedleaspiration,TNA）经支气管镜采样支气管肺泡灌洗（bronchoalveolarlavage,BAL）经支气管镜直接吸引防污染样本毛刷（protectivespecimenbrush,PSB）开胸肺活检（open-lungbiopsy，OLB）经人工气道吸引分泌物（endotrachealaspirates，ETA）痰培养的送检次数对于普通细菌性肺炎，痰标本送检每天1次，连续2～3天。不建议24h内多次采集，除非痰液外观性状出现改变；怀疑分枝杆菌感染者，应连续收集3天清晨痰液送检；怀疑军团菌或深部真菌感染，痰标本理想的送检次数尚无定论。痰培养的运送和保存尽快（<2h）送至实验室。如不能及时送达，应将标本暂存于4℃，但放置时间不可超过24h。厌氧培养标本的最佳运送时间取决于标本量。被口咽部菌群污染的标本如咳痰等不可用于厌氧菌培养。2023/1/12尿培养标本

UrineCulture你知道吗？尿液通常是无菌的或一过性有少量微生物，但是尿道内或尿道周围皮肤的菌群会污染尿液标本，从而可能导致错误的培养结果。诊断症状明显的病人（如尿急、尿频、尿痛），一份标本就已足够，治疗48-72小时后再采集第二份标本。对于症状不明显的病人，需采集2-3份标本。怀疑肾结核时，应连续3天采集晨尿。多次收集或24小时尿不能用作培养。室温都有利于病原菌和污染菌会生长繁殖，因此若30min内不能及时培养尿液则必须冷藏，但也不能超过24小时。尿培养标本清洁中段尿导尿导管尿经耻骨上皮肤穿刺采集膀胱内尿液送检标本以晨起第一次尿液为佳不能立即送检者，可暂存4℃冰箱，但保存不超过8h清洁中段尿液尽量取早晨第一次尿液弃去开始流出的尿液，以冲刷尿道口的细菌，取能代表膀胱部位病原菌的中段尿详细告知病人以下操作步骤女性病人收集标本前用清洗液冲洗干净，从前向后仔细擦洗尿道区域分开阴唇，开始排尿排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿男性病人回缩包皮并清洗龟头排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿导尿管尿液集尿袋内的尿液不能用作培养；导尿管末端的尿液也不能用于培养，因为很难避免没有尿道菌群污染。留置导管尿液标本常通过专门的采样端口采集，不能把导尿管与尿袋拔开后收集尿液。采样端口用酒精消毒；必要时，可先夹住导尿管但不能超过30分钟；将注射器针头插入采样端口，抽吸出尿液；注入无菌杯或试管中耻骨上穿刺吸取尿液常用于患儿、泌尿道厌氧菌感染或脊柱损伤病人等。可避免尿道或会阴细菌的污染，但对膀胱内少量尿液的小儿难以实施。方法：消毒自脐以下至尿道之间区域的皮肤，局麻穿