槐花米中芦丁的提取、分离和鉴定

槐花米中芦丁的提取、分离

和鉴定制作人：熊燕一、实验目的要求1、掌握黄酮类化合物的提取和分离的原理和方法。2、掌握黄酮类成分的主要理化性质及鉴别方法。3、了解IR及NMR在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。二、实验原理中药槐米中的主要化学成分主要含有芦丁、槲皮素，还含少量皂苷类及多糖、粘液质等。槐米含芦丁可高达23.5%，槐花开放后降至13.0%。芦丁可用于治疗毛细血管脆性引起的出血症，并用作高血压辅助治疗剂。芦丁还可以作为制备槲皮素、羟乙基槲皮素、羟乙基芦丁、二乙胺基乙基芦丁等的原料。芦丁的化学结构式槲皮素的化学结构式芦丁为浅黄色粉末或极细微淡黄色针状结晶，含3分子结晶水（C27H30O16·3H2O），加热至185℃以上熔融并开始分解。芦丁的性质芦丁可溶于乙醇、吡啶、甲酰胺、甘油、丙酮、冰醋酸、乙酸乙酯中，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚。芦丁的溶解度，在冷水中1:10000，沸水中1:200，沸乙醇中1:60，沸甲醇中1:7芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液中，酸化后又可析出，因此可以用碱溶酸沉的方法提取芦丁。碱溶酸沉法原理由槐花米中提取芦丁的方法很多，本实验是根据芦丁在冷水和热水中的溶解度差异的特性进行提取和精制，或根据芦丁分子中具有酚羟基，显弱酸性，能与碱成盐而增大溶解度，以碱水为溶剂煮沸提取，其提取液加酸酸化后则芦丁游离析出。

三、实验流程搅拌下加入石灰乳加水300ml槐花米（15g）调节PH8-9直火加热保持微沸30min双层滤纸趁热抽滤滤液残渣在60-70度下，用浓盐酸调PH3-4静置1、芦丁的提取注意及时补充水和石灰乳，维持PH8~9趁热抽滤时，注意防止滤液因减压而沸腾。1.5gCaO

加10ml水

第一次实验所得滤液滤液沉淀（粗品芦丁）均分2份重结晶水解抽滤按1:60量加入蒸馏水，沉淀悬浮于蒸馏水中，加热煮沸15分钟后，趁热抽滤残渣滤液冷却静置，抽滤精制芦丁按1:70量加入2%硫酸，加热40min，放冷静置，抽滤沉淀滤液干燥、95％乙醇重结晶槲皮素糖鉴定酸水解过程中，注意补充蒸馏水，维持原体积。

2%的硫酸用98%浓硫酸自己配制，注意浓硫酸和水的加入顺序。抽滤时，热烧杯勿直接放在实验台上，防止烧杯炸裂。2、芦丁的精制与水解实验名称实验试剂现象芸香苷槲皮素Molish反应10%α-萘酚乙醇、溶液-浓硫酸紫色环无现象盐酸-镁粉反应盐酸-镁粉红色～紫红色醋酸镁反应1％醋酸镁甲醇溶液黄色荧光（紫外灯）三氯化铝反应1％三氯化铝乙醇溶液（紫外灯）黄色荧光锆-柠檬酸反应2％二氯氧锆甲醇溶液2％柠檬酸甲醇溶液3～4滴黄色并褪色黄色不褪色3、芦丁、槲皮素的理化鉴别方法4、芦丁的TLC鉴定样品：①自制芦丁乙醇液;②自制槲皮素乙醇液。对照品：①芦丁对照品乙醇液;②槲皮素对照品乙醇液。吸附剂：聚酰胺薄膜。展开剂：①氯仿—甲醇—甲酸(15：5：1);②醋酸乙酯—甲酸—水(8：1：1)。显色剂：①喷三氯化铝试液，待乙醇挥干后，置紫外灯(365nm)下观察。5、芦丁的IR、1HNMR鉴定样品：自制芦丁。实验：KBr压片，红外分光光度仪测试。IR谱图与芦丁标准谱图对照。DMSO-d6作溶剂，测芦丁的1HNMR。四、注意事项在提取前应将槐花米粉碎，使芦丁易于被热水溶出。粉碎不可过细，以免过滤时速度过慢；本实验用碱溶酸沉法提取，加入石灰乳可以达到碱性溶解的目的，又可除去槐花米中所含的大量粘液质，但应严格控制其碱性pH8～9，不可超过pH10。如pH值过高，加热提取过程中芦丁可被水解破坏，降低收得率。加酸沉淀时，控制pH3～4,不宜过低，否则芦丁可生成佯盐而溶于水，也降低收得率。

五、思考题苷类结构的检识大体程序如何？苷类水解的方法？怎样确定芦丁结构中的糖基是