第四节 红细胞比容

第一章血液一般检验第四节网织红细胞计数网织红细胞定义网织红细胞形态网织红细胞染色方法网织红细胞计数方法网织红细胞计数参考区间网织红细胞计数的临床意义网织红细胞生成指数网织红细胞计数网织红细胞（reticulocyte，Ret）是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的过渡阶段细胞，其胞质中尚残留部分嗜碱性物质（核糖体和核糖核酸），可被某些染料活体染色后呈蓝色或紫色的网状或颗粒状结构，故名为网织红细胞。Ret体积略大于成熟红细胞（直径8.0～9.5μm），仍具有合成血红蛋白的能力，约1～2天后，过渡为成熟红细胞。ICSH将网织红细胞分成I～IV型。定义I型（丝球型）

Ⅱ型（网型）

III型（破网型）

Ⅳ型（点粒型）网织红细胞分型及特征分型形态特征正常存在部位I型（丝球型）RBC几乎被网织物充满仅存在于正常骨髓II型（网型）位于RBC中央线团样结构松散大量存在于骨髓，极少见于外周血中III型（破网型）网状结构稀少，呈不规则枝点状排列少量存在于外周血中IV型（点粒型）嗜碱性物质少，呈分散的细颗粒、短丝状主要存在于外周血中网织红细胞计数（一）试管法1．原理

网织红细胞内带负电荷的RNA磷酸基，与新亚甲蓝、灿烂甲酚兰等碱性染料带正电荷的有色反应基团结合，使RNA胶体间的负电荷减少而发生凝缩，形成蓝色的点状、线状或网状结构，显微镜下计数可得网织红细胞的相对值（%）和绝对值（×109/L）（Ret#=RBC×Ret%）。2．试剂

10g/L煌焦油蓝或新亚甲蓝染液。3．简要操作

染液与待检血液1︰1混合→室温放置10～15分钟→制备血涂片→低倍镜下观察→油镜计数→计算。网织红细胞计数（二）玻片法1．原理同试管法2．试剂

10g/L煌焦油蓝乙醇溶液。3．简要操作

滴加染液于玻片上→待干→加同体积待检血液→充分混匀，染色→制备血涂片低倍镜下观察→油镜计数→计算。网织红细胞计数网织红细胞示意图网织红细胞计数黄焦油兰染色的网织红细胞网织红细胞计数黄焦油兰染色的网织红细胞网织红细胞计数（三）Miller窥盘法BAMiller窥盘为圆形玻片，玻片上刻有两个正方形格子，计数时用小方格A计数红细胞，用大方格B（包含A）计数网织红细胞，大方格B（包含A）面积为小方格A的9倍。ICSH及我国卫计委临床检验中心推荐使用Miller窥盘进行网织红细胞计数。网织红细胞计数B格2个Ret，A格5个RBC网织红细胞计数A格内红细胞数（RBC）B格内网织红细胞数（Ret）121102140120120121130140111合计11055110×9Ret%==0.5%

Ret#=RBC×Ret%网织红细胞计数（四）仪器法带网织红细胞计数参数的血液分析仪、流式细胞仪（FCM）和网织红细胞专用计数仪均可，网织红细胞中RNA经特殊荧光染料染色可进行RNA定量，能精确计数网织红细胞占红细胞的百分数（Ret%）。网织红细胞可分为低荧光强度网织红细胞（LFR）、中荧光强度网织红细胞（MFR）以及高荧光强度网织红细胞（HFR）。还可计算未成熟网织红细胞（IMR）和网织红细胞成熟指数（RMI）。

IMR=HFR+MFR网织红细胞计数方法分类Ret计数方法手工法试管法玻片法Miller法仪器法FCM、BCA

试管法和玻片法原理、试剂基本相同，均可使用米勒窥盘，方便计数提高效率网织红细胞计数（五）质量保证1．及时检测陈旧标本检查结果将降低。2．选择合适的染料3．染色过程

染色时间不能过短，室温低时，可放置37℃温箱或适当延长染色时间。染液与血液的比例以1︰1为宜。严重贫血时，可适量增加血液的比例，制片时血膜应厚薄适宜，避免网织红细胞分布不匀。4．计数

选择红细胞分布均匀、网织红细胞着色好的部位计数。外周血网织红细胞主要为Ⅳ型，凡含有2个或2个以上颗粒、且颗粒远离细胞边缘的红细胞均应计为网织红细胞。网织红细胞计数（六）方法学评价计数方法评价普通显微镜法简便、成本低，可直观细胞形态；但影响因素多，重复性差玻片法水分易蒸发，染色时间短，结果偏低试管法易掌握，重复性较好，易复查Miller窥盘计数法规范计算区域，减少了实验误差（CV值在10%左右），为ICSH推荐方法血液分析仪法检测细胞多，精密度高，与手工法相关性好，易标准化，但仪器贵，在出现H-J小体、有核红细胞、巨大血小板时结果常假性增高网织红细胞计数（七）参考区间网织红细胞计数（八）临床意义1．反映骨髓的造血功能2．作为贫血治疗效果的观察指标3．作为观察病情的指标网织红细胞计数1．反映骨髓的造血功能（1）网织红细胞增多：表示骨髓造血功能旺盛，见于各种增生性贫血，溶血性贫血尤为显著。溶血性贫血时由于大量网织红细胞进入血循环，网织红细胞百分数可增至6%～8%或更多。急性溶血时可高达20%，严重者甚至可达40%～50%以上；急性失血性贫血时网织红细胞可明显增高；缺铁性贫血和巨幼红细胞性贫血时，网织红细胞正常或轻度增高。（2）网织红细胞减少：表示骨髓造血功能低下，多见于再生障碍性贫血。网织红细胞低于15×109/L为诊断急性再生障碍性贫血的标准之一。急性白血病时，由于骨髓中异常细胞大量浸润，使红细胞生成受到抑制，可造成网织红细胞减少。网织红细胞计数（3）网织红细胞生成指数

（reticulocyteproductionindex，RPI）反映骨髓造血功能指标，代表网织红细胞的生成相当于健康人多少倍。其计算公式为：网织红细胞成熟时间：①健康人RPI为1。②RPI＞3：提示为溶血性贫血或急性失血性贫血。③RPI＜1：提示为骨髓增生低下或红系成熟障碍所致贫血。网织红细胞计数2．作为贫血治疗效果的观察指标缺铁性贫血和巨幼红细胞性贫血患者在治疗前，外周血网织红细胞仅轻度增高（也可正常或轻度减少），有效治疗后2～3天网织红细胞便开始上升，7～10天达到高峰（可达10%以上）。治疗2周左右网织红细胞逐渐下降，之后红细胞及血红蛋白才逐渐升高。网织红细胞计数贫血治疗有效时网织红细胞的变化Ret#(×1