OlympusFV1200激光共聚焦显微镜系统操作手册

OlympusFV1200激光共聚焦显微镜系统操作手册、开关机步骤1、开机步骤1）打开计算机2）打开汞灯电源开关3）打开显微镜开关4）打开载物台控制器开关5）打开显微镜触屏面板开关6）打开扫描头开关（先开开关键，然后将钥匙顺时针拧到on位置）7）打开激光器①405nm，633nm：打开开关键即可②559nm：先开开关键，绿色指示灯闪烁（约两分钟），停止闪烁后将钥匙顺时针拧到on位置（红灯闪烁，停止闪烁后即开启完成）③多线氩离子（458nm，488nm，514nm）：先开开关键，然后将钥匙顺时针拧到on位置8）双击电脑桌面上打开8）双击电脑桌面上打开FV10-ASW4.0应用软件。2、关机步骤1）关闭FV10-ASW4.0应用软件2）关闭激光器（注意：多线氩离子458nm，488nm，514nm需先关钥匙，等风机散热20分钟后再关闭开关键）3）关闭扫描头（先将钥匙拧到off位置，再关开关键）4）关闭显微镜触屏面板5）关闭载物台控制器6）关显微镜开关7）关汞灯，先关前面off按钮，倒计时30s，再关后方开关键8）关计算机二、显微镜观察1、用触屏面板选择物镜；2、点击触屏面板EPI，选择需要的荧光滤片，如下图：|至〔紫外激发/蓝色光正蓝色激发/绿色荧光史绿色激发/红色荧光）打开:坐.］，显微镜目镜下观察样品，推动载物台控

制手柄可水平方向移动样品，转动调焦旋钮可调节焦距;三、获图XY多通道扫描1、镜下调好之后，点击软件中的 按钮，关闭汞灯快门。2、首先进行软件设置：在AcquisitionSetting里将扫描速度设置为8us/Pixel，像素数一般设置为1024*1024。在ImageAcquisitionControl里点击DyeListJlft按钮，在染料列表中，双击用于观察的荧光染料（注：再次双击已选项目可取消），然后点击Apply按钮。3、将ImageAcquisitionControl面板中FilterMode里Kalman打钩选中，设置线平均Line2次，这样可以降低图像的噪声。（见下图）4、对于多通道扫描，将ImageAcquisitionControl里Sequential打钩，并选择面序列（Frame）方式,并将下方的激光通道按波长从大到小排序。5、点击Focusx2按钮开始扫描，在选中的Channel里可先调节探测器的灵敏度（HV），一般控制在800丫以内，然后调节Laser功率的百分比以调节激发光强度，过程中可微调焦距以获得更清晰的图像，如果图像的背景值略高，可调节Offset的数值去背景（控制在10%以内），点击Stop按钮停止扫描。6、每个通道都调好之后，勾选上全部通道，点击XY按钮获得一幅图像。7、在拍完生成的2D-ViewImage文件里，点击左边工具栏电图标添加标尺。XYZ多层扫描rMicroscopeLPLSAPOZttXNA0.7&rMicroscopeLPLSAPOZttXNA0.7&Set-O urnGournGournDp.Clearnd|SlicesFocusHandleDnEscapeX^).3fi2uin 2umZ:2.321Lim1、获取多层图像需要将ImageAcquisitionControl里Depth■0 点上。一stopLam优招「0?网1『Im-2、在预览时调节调焦旋钮，图像显示到达上限和下限时分别在Microscope面板里点SetStart&End设置多层扫描的范围。设置好之后输入5士©口Size大小（点击Op.按钮可以使用推荐的数值）并在StepSize前打钩。3、点击XYZ按钮获得图像。扫描结束点击XYZ下方SeriesDone-『zw按钮成图。点击图像上方图标并归选择图标进|成 行3D图像的最大化叠加，鼠标右击此图，选择SaveDisplay可直接保存此图。n20'/itc,-tmageUPL^PO205NA075OO&I、«国巨演J画目|7珞MAXOFullScreEnumageSendThisAreaoftheImdgetoClipboardlaveCtrl*SSaveAs..,CtrkShift+SExport...Ctrl+EExportMutti-TIFF.Ctr1*Shift*ESavaDisplay-.4«国巨演J画目|7珞MAXOFullScreEnumageSendThisAreaoftheImdgetoClipboardlaveCtrl*SSaveAs..,CtrkShift+SExport...Ctrl+EExportMutti-TIFF.Ctr1*Shift*ESavaDisplay-.4加、堂Animation...SelectAllROhCtrl+ACancelSelectionFlipSsEediefiDeleteAIIROIsPasteR01CtrkVSihcwPrafik(Vtrt.jSho-^Profile(Hori：Print-XYT扫描时间序列扫描可根据AcquisitionSetting里每个Frame的时间FrameTimeScan设置Timescan的参数，•:1- '■ ■京,两次拍摄的时间间隔Interval要大于所有拍摄通道Frame时间之和，拍摄的总次数Num可以根据拍摄时长计算。设置好扫描时间间隔和扫描的次数后，点击进行拍摄。拍摄结束点SeriesDone吧吧吧!按钮成图。rairCHS2CH3AleicaFluor405AlexaFluorS46GainOffs&lTD1伯TFCHS1坦ImageAcquisitionControl|c73HVGamOTfselHVGainOffselHVGainOTfselVBF320660vLaser664) 1 13v w %Laser|405 &0.0%2E78

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