微生物的实验室培养公开课专家讲座

了解相关培养基基础知识，进行无菌技术操作，进行微生物培养。

一、课题目标：

掌握培养基制备、高压蒸气灭菌和平板划线法等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。无菌技术、平板划线法等基本操作二、课题重点和难点：三、技能目标：微生物的实验室培养公开课专家讲座第1页一.微生物类群微生物原核类:真核类非细胞类：细菌、支原体、放线菌、蓝藻个体微小、结构简单酵母菌、霉菌、食用菌真菌：原生生物：显微藻类、原生动物（如：草履虫、变形虫等）病毒◆微生物共同特点：微生物的实验室培养公开课专家讲座第2页1.细菌形态微生物的实验室培养公开课专家讲座第3页2.细菌菌落⑴.定义：单个或者少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，会形成一个肉眼可见、含有一定形态结构子细胞群体，叫做菌落。⑵.特征：大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。⑶.功效：每种细菌在一定条件下所形成菌落，能够作为菌种判定主要依据。微生物的实验室培养公开课专家讲座第4页几个菌落及其形态微生物的实验室培养公开课专家讲座第5页1.概念：人们按照微生物对营养物质不一样需求，配制出供其生长繁殖营养基质。二.培养基思索：微生物要生存繁殖，需要“吃”什么？微生物的实验室培养公开课专家讲座第6页2.培养基营养物质1.水2.碳源（提供碳元素物质）3.氮源（提供氮元素物质）4.无机物（无机盐）微生物的实验室培养公开课专家讲座第7页3.培养基类型（1）按物理状态分：固体培养基

半固体培养基液体培养基区分：加入琼脂量决定培养基物理状态。注意：普通细菌不能利用琼脂。微生物的实验室培养公开课专家讲座第8页单个或者少数微生物在固体培养基表面生长繁殖,能够形成肉眼可见子细胞群体——菌落固体培养基用途：用于微生物纯化、计数、判定微生物的实验室培养公开课专家讲座第9页液体培养基：工业生产表面生长均匀混浊生长沉淀生长微生物的实验室培养公开课专家讲座第10页半固体培养基：观察运动微生物的实验室培养公开课专家讲座第11页天然培养基合成培养基化学成份不恒定天然有机物如：牛肉膏蛋白胨培养基、马铃薯培养基化学成份完全了解物质配制而成培养基（2）按化学成份划分：微生物的实验室培养公开课专家讲座第12页判别培养基将某种类微生物从混杂微生物群体中分离出来用于判别不一样类型微生物培养基选择培养基（3）按用途划分：微生物的实验室培养公开课专家讲座第13页选择培养基和判别培养基比较种类用途例子选择培养基判别培养基从众多微生物中分离所需微生物判别不一样种类微生物不加含碳有机物无碳培养基，伊红—美篮培养基使大肠杆菌菌落呈黑色，能够判别大肠杆菌分离自养型微生物微生物的实验室培养公开课专家讲座第14页2.无菌范围：试验操作空间消毒操作者手、衣着消毒试验用具灭菌试验操作过程3.无菌方法：酒精灯旁操作三.无菌技术预防外来杂菌污染1.无菌意义：消毒与灭菌微生物的实验室培养公开课专家讲座第15页（1）消毒（2）灭菌概念较为温和理化方法杀死部分有害微生物强烈理化原因杀死全部微生物2.无菌方法微生物的实验室培养公开课专家讲座第16页接种室内空气、接种箱、超净工作台紫外线消毒试验者手臂、试验台等化学药剂消毒牛奶等不宜高温消毒灭菌巴氏消毒日常食物、罐装食品煮沸消毒法适用范围方法（1）消毒微生物的实验室培养公开课专家讲座第17页培养基、试验器材高压蒸汽灭菌耐高温需干燥物品（玻璃器皿等）干热灭菌接种工具、试管口、瓶口灼烧灭菌适用对象灭菌方法灼烧灭菌干热灭菌箱高压蒸汽灭菌锅（2）灭菌微生物的实验室培养公开课专家讲座第18页请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。假如需要，请选择适当方法。（1）培养细菌用培养基与培养皿（2）玻璃棒、试管、烧瓶（3）试验操作者双手思考答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。微生物的实验室培养公开课专家讲座第19页我们已经对培养基和无菌技术有了一定了解，你能不能用培养基进行大肠杆菌纯化培养？思考微生物的实验室培养公开课专家讲座第20页大肠杆菌纯化培养：（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基四.试验操作（二）纯化大肠杆菌微生物的实验室培养公开课专家讲座第21页1000ml牛肉膏蛋白胨培养基配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g琼脂20.0g1.计算：依配方计算各成份用量2.称量：3.溶化：牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、称量纸、少许水加热溶解→取纸→蛋白胨、NaCl→琼脂、搅拌→补水定容4.灭菌：5.倒平板：（一）制备培养基培养基高压蒸汽灭菌，培养皿干热灭菌微生物的实验室培养公开课专家讲座第22页计算称量溶化灭菌倒平板（一）制备培养基1.将培养皿放在火焰旁桌面上，右手拿装有培养基锥形瓶，左手拨出棉塞。12342.右手拿锥形瓶，使瓶口快速经过火焰。3.用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口缝隙，右手将锥形瓶中培养基(约10～20mL)倒入培养皿，左手马上盖上皿盖。4.等候平板冷却凝固（约需5～

10min）。然后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。微生物的实验室培养公开课专家讲座第23页1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么方法来预计培养基温度？问题讨论答：能够用手触摸盛有培养基锥形瓶，感觉温度下降到刚才不烫手即可。2.为何需要使锥形瓶瓶口经过火焰？答：经过灼烧灭菌，预防瓶口微生物污染培养基。微生物的实验室培养公开课专家讲座第24页3.平板冷凝后，为何要将平板倒置？4.在倒平板过程中，假如不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为何？答：①预防皿盖上水珠落入培养基造成污染

②防止培养基中水分过快蒸发。答：最好不要用这个平板培养微生物。预防空气中微生物可能在皿盖与皿底之间培养基上滋生。微生物的实验室培养公开课专家讲座第25页单个细胞单个菌落（二）纯化大肠杆菌怎样纯化？接种常见方法平板划线法怎样分散成单个细胞？稀释涂布平板法微生物群分散微生物的实验室培养公开课专家讲座第26页1.平板划线法：分区划线法连续划线法（1）概念与原理：聚集菌群连续划线稀释分散单个细胞菌落生长繁殖微生物的实验室培养公开课专家讲座第27页(2)“平板划线”试验操作微生物的实验室培养公开课专家讲座第28页（1）为何在操作第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,依然需要灼烧接种环吗？为何？问题讨论杀死接种环上残留菌种，防止细菌污染环境和感染操作者接种结束后杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线菌种直接起源上次划线末端，从而使每次划线时菌种数目逐步降低，直至得到单个细胞每次划线前杀死接种环上原有微生物取菌种前目标灼烧时期微生物的实验室培养公开课专家讲座第29页（2）在灼烧接种环之后，为何要等其冷却后再进行划线？

答：以免接种环温度太高，杀死菌种。（3）在作第二次以及其后划线操作时，为何总是从上一次划线末端开始划线？答：线条末端细菌数目比线条起始处要少，每次从上一次划线末端开始，能使细菌数目伴随划线次数增加而逐步降低，最终得到单个细菌繁殖而来菌落。微生物的实验室培养公开课专家讲座第30页3个划线平板1个不划线平板（重复试验）（空白对照）（3）培养放入37℃恒温箱中培养12h～24h微生物的实验室培养公开课专家讲座第31页2.稀释涂布平板法①菌液梯度稀释：②涂布平板操作：(1)概念与原理：聚集微生物单个细胞菌液梯度稀释菌落涂布平板(2)操作：生长繁殖微生物的实验室培养公开课专家讲座第32页①系列梯度稀释操作9mL无菌水9mL无菌水9mL无菌水9mL无菌水9mL无菌水9mL无菌水注意：移液管需要经过灭菌；试管口和移液管离火焰1～2cm处。微生物的实验室培养公开课专家讲座第33页②涂布平板操作：微生物的实验室培养公开课专家讲座第34页各梯度分别涂布3个平板1个不涂布作空白对照稀释103倍稀释104倍稀释105倍放入37℃恒温箱中培养12h～24h（3）培养微生物的实验室培养公开课专家讲座第35页1.暂时保藏：试管固体斜面培养基上4℃2.长久保留：菌种易被污染、变异甘油管藏1ml甘油＋1ml菌液－20℃三菌种保留3～6个月，转移培养微生物的实验室培养公开课专家讲座第36页2．分析下面培养基配方：KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂。请回答：(1)在该培养基配方中，为微生物生长提供碳源和氮源分别是________和________。(2)想一想这种培养基对微生物是否含有选择作用？假如含有，又是怎样进行选择？________________________________________________________________________。有选择作用。因为此配方中尿素是唯一氮源，所以，只有能够利用尿素微生物才能够生长葡萄糖尿素微生物的实验室培养公开课专家讲座第37页3.培养基、培养皿、接种环、试验操作者双手、空气、牛奶所采取灭菌、消毒方法依次是 (

)①化学消毒②灼烧灭菌③干热灭菌④紫外线灭菌⑤高压蒸汽灭菌⑥巴氏消毒法A．⑤③②①④⑥ B．①②③④⑤⑥C．⑥②③④①⑤ D．③④②①⑥⑤A微生物的实验室培养公开课专家讲座第38页四结果评价假如未接种培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长，说明培养基制备是成功，不然需要重新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求假如培养基上生长菌落颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落特点，则说明接种操作是符合要求；假如培养基上出现了其它菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未到达要求。（一）培养基制作是否合格微生物的实验室