微生物学病原学与诊断

微生物学病原学与诊断第1页/共25页第八章病原学诊断与防治

第2页/共25页标本的采集和运送避免杂菌污染运送注意保存不同期不同标本用抗菌素以前采集病变明显部位标本必须新鲜第一节细菌学诊断第3页/共25页病原菌的检查程序药物敏感试验标本直接涂片镜检分离培养生化试验血清学试验动物试验确诊初步诊断分子生物学技术其他检测技术培养特征形态特征病原菌抗原的检测第4页/共25页原理血清学诊断双份血清标本，恢复期血清中抗体效价比急性期血清中抗体效价升高≥4倍者方有意义种类

用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异性抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。标本凝集试验：沉淀试验：补体结合试验：中和试验：

肥达试验、外斐试验、显微镜凝集试验等梅毒VDRL等抗“O”试验等Q热柯克斯体抗体检测等第5页/共25页L型细菌的诊断

诱因：破坏细胞壁的物质

症状：慢性为主，症状不典型

培养：高渗培养基（油煎蛋样菌落）

镜检：多型性快速诊断1、自动化检测系统2、免疫学方法3、核酸的检测（PCR）第6页/共25页第二节病毒学诊断1、 标本采集与送检：用于分离培养的标本：血清学诊断的标本：采取急性期、防止病毒灭活双份血清第7页/共25页2、常规分离与鉴定动物接种鸡胚接种组织培养器官培养移植培养

细胞培养

原代细胞培养二倍体细胞培养传代细胞培养三大培养方法第8页/共25页病毒在细胞内增殖的指标1、CPE2、红细胞吸附正常细胞病变细胞第9页/共25页病毒数量和感染性测定1、蚀斑试验2、ID50

或TCID50

病毒感染鸡胚动物或细胞后，引起50%发生死亡或病变的最小量

病毒感染单层细胞后，产生的局限性病灶，称蚀斑，蚀斑是由一个感染性病毒体复制使局部单层细胞脱落形成的，称蚀斑形成单位，病毒悬液中的感染性病毒量以每毫升的蚀斑形成单位来表示。第10页/共25页

病毒的血清学诊断中和试验补体结合试验血凝抑制试验免疫扩散等第11页/共25页病毒的快速诊断光镜-----包涵体电镜免疫荧光ELISA分子生物学技术杂交SouthernblotPCRNorthernblotbiochip第12页/共25页第三节真菌学诊断标本

浅部感染真菌取毛发等标本深部感染真菌取痰、血液、脑脊液等直接镜检：标本（皮屑、毛发）＋10%KOH假丝酵母菌--取材涂片，革兰染色隐球菌--脑脊液离心，沉淀涂片，墨汁负染

结果判断：①阴性不能排除感染。②组织中分隔分枝的菌丝为曲霉;粗大、不分隔或不分枝的菌丝为毛霉。③皮肤癣菌菌丝肥大粗长为处于活跃状态。④酵母型和二相型真菌在组织内常为孢子。第13页/共25页分离培养

Sabouraud培养基快速诊断

血清学诊断核酸的诊断毒素的检测第14页/共25页第15页/共25页新生隐球菌脑脊液涂片第16页/共25页第四节特异性预防和治疗第17页/共25页将疫苗或类毒素接种于人体，使机体获得免疫力的一种防治微生物感染的措施。人工主动免疫主要生物制品死疫苗活疫苗类毒素亚单位疫苗DNA重组疫苗核酸疫苗合成肽疫苗特异性预防第18页/共25页比较死疫苗与活疫苗区别点死疫苗活疫苗制剂特点死，强毒株活减毒株接种剂量与特点量较大，2~3次量较小，1次保存及有效期易保存，约1年不易保存，4℃数周免疫效果较低，维持数月~2年较高，维持3~5年甚至更长第19页/共25页人工被动免疫注射含有特异性抗体的免疫血清或纯化免疫球蛋白抗体，或细胞因子等免疫制剂，使机体获得特异性免疫力抗毒素细胞免疫制剂（IFN\ILCSF\LAK\TIL\CTL）主要生物制品抗菌血清胎盘球蛋白丙种球蛋白第20页/共25页人工主动免疫与人工被动免疫区别要点人工主动免疫人工被动免疫免疫物质抗原抗体或细胞因子等免疫出现时间满，2~4周快，立即免疫维持时间长，数年~数月短，2~3周主要用途预防治疗或紧急预防比较第21页/共25页病原生物感染的治疗一、细菌感染的治疗抗菌药物的种类：抗菌药物的作用机制：第22页/共25页抗病毒药物金刚烷胺-------抑制病毒脱壳-----预防感冒RNA或DNA类似物------治疗疱疹性脑炎等疱疹病毒感染阿糖腺苷类、无环鸟苷