第6章线粒体与叶绿体

第一节线粒体与氧化磷酸化●线粒体的形态结构●线粒体的化学组成及酶的定位●氧化磷酸化1现在是1页\一共有47页\编辑于星期四一、线粒体的形态结构

线粒体的形态、大小、数量与分布线粒体一般呈粒状或杆状，但因生物种类和生理状态而异，可呈环形，哑铃形、线状、分杈状或其它形状。数目一般数百到数千个，线粒体通常分布在细胞功能旺盛的区域。

线粒体的超微结构图1图2

外膜(outermembrane）：含孔蛋白(porin)，通透性较高。图2

内膜（innermembrane）：高度不通透性，向内折叠形成嵴（cristae），嵴能显著扩大内膜表面积（达5~10倍）。含有与能量转换相关的蛋白

（执行氧化反应的电子传递链酶系、ATP合成酶、线粒体内膜转运蛋白）。膜间隙（intermembranespace）：含许多可溶性酶、底物及辅助因子。基质（matrix）：含三羧酸循环、脂肪酸和丙酮酸氧化等酶系、线粒体基因表达酶系等以及线粒体DNA,RNA，核糖体。2现在是2页\一共有47页\编辑于星期四3现在是3页\一共有47页\编辑于星期四4现在是4页\一共有47页\编辑于星期四二、线粒体的化学组成及酶的定位线粒体的化学组成蛋白质(线粒体干重的65～70％)脂类(线粒体干重的25～30％)：磷脂占3/4以上，外膜主要是卵磷脂，内膜主要是心磷脂。线粒体脂类和蛋白质的比值:0.3:1（内膜）；1:1（外膜）线粒体酶的定位

5现在是5页\一共有47页\编辑于星期四二、线粒体的功能-氧化磷酸化线粒体主要功能是进行氧化磷酸化，合成ATP，为细胞生命活动提供直接能量。什么是氧化磷酸化：当电子从NADH或FADH2经呼吸链传递给氧形成水时，同时伴有ADP磷酸化形成ATP，这一过程称为氧化磷酸化。什么是呼吸链：在线粒体内膜上存在有关氧化磷酸化的脂蛋白复合物，它们是传递电子的酶体系，由一系列可逆地接受和释放电子或H+的化学物质组成，在内膜上相互关联地有序排列，称为电子传递链（electron-transportchain）或呼吸链（respiratorychain）。线粒体中的代谢活动图氧化磷酸化的分子基础ATP合成机制ATP分子结构氧化磷酸化的偶联机制—化学渗透假说和结合变构机制6现在是6页\一共有47页\编辑于星期四7现在是7页\一共有47页\编辑于星期四氧化磷酸化的分子基础电子载体呼吸链电子载体主要有：黄素蛋白、细胞色素、铁硫蛋白、辅酶Q等。黄素蛋白：含FMN或FAD的蛋白质，每个FMN或FAD可接受2个电子2个质子。细胞色素：分子中含有血红素铁，以共价形式与蛋白结合，通Fe3+、Fe2+形式变化传递电子，呼吸链中有5类，即：细胞色素a、a3、b、c、c1，其中a、a3含有铜原子。铁硫蛋白：在其分子结构中每个铁原子和4个硫原子结合，通过Fe2+、Fe3+互变进行电子传递，有2Fe-2S和4Fe-4S两种类型。辅酶Q：是脂溶性小分子量的醌类化合物，通过氧化和还原传递电子。有3种氧化还原形式即氧化型醌Q，还原型氢醌（QH2）和介于两者之者的自由基半醌（QH）。8现在是8页\一共有47页\编辑于星期四电子传递链的四种复合物：复合物Ⅰ：NADH-CoQ还原酶复合物（既是电子传递体又是质子移位体）组成：含42个蛋白亚基，至少6个Fe-S中心和1个黄素蛋白。作用：催化NADH氧化，从中获得2高能电子辅酶Q；泵出4H+复合物Ⅱ：琥珀酸脱氢酶复合物（是电子传递体而非质子移位体）组成：含FAD辅基，2Fe-S中心，作用：催化2低能电子FADFe-S辅酶Q(无H+泵出)

复合物Ⅲ：细胞色素bc1复合物（既是电子传递体又是质子移位体）组成：包括1cytc1、1cytb、1Fe-S蛋白作用：催化电子从UQH2cytc；泵出4H+

（2个来自UQ，2个来自基质）

复合物Ⅳ：细胞色素C氧化酶（既是电子传递体又是质子移位体）组成：二聚体，每一单体含13个亚基，cyta,cyta3,Cu,Fe作用：催化电子从cytc分子O2形成水，2H+泵出，2H+参与形成水9现在是9页\一共有47页\编辑于星期四10现在是10页\一共有47页\编辑于星期四两条主要的呼吸链：NADH呼吸链：复合物Ⅰ、Ⅲ、IV组成的呼吸链，催化NADH的脱氢氧化。FADH2呼吸链：复合物Ⅱ、Ⅲ、IV组成的呼吸链，催化琥珀酸的脱氢氧化。呼吸链各组分的排列是高度有序的使电子按氧化还原电位从低向高传递，呼吸链中有三个部位有较大的自由能变化，足以使ADP与无机磷结合形成ATP。部位Ⅰ在NADH至CoQ之间。部位Ⅱ在细胞色素b和细胞色素c之间。部位Ⅲ在细胞色素a和氧之间。电子传递起始于NADH脱氢酶催化NADH氧化，形成高能电子(能量转化)，终止于O2形成水。电子传递链各组分在膜上不对称分布11现在是11页\一共有47页\编辑于星期四ATP合成机制分子结构图基粒（elementaryparticle），基粒由头部（F1偶联因子）和基部（F偶联因子）构成，F0嵌入线粒体内膜。F1由5种多肽组成α3β3γδε复合体，具有三个ATP合成的催化位点（每个β亚基具有一个）。α和β单位交替排列，状如桔瓣。γ贯穿αβ复合体（相当于发电机的转子），并与F0接触，ε帮助γ与F0结合。δ与F0的两个b亚基形成固定αβ复合体的结构（相当于发电机的定子）。F0由三种多肽组成ab2c12复合体，嵌入内膜，12个c亚基组成一个环形结构，具有质子通道,可使质子由膜间隙流回基质。

12现在是12页\一共有47页\编辑于星期四13现在是13页\一共有47页\编辑于星期四14现在是14页\一共有47页\编辑于星期四ATP合酶的作用研究现在是15页\一共有47页\编辑于星期四氧化磷酸化偶联机制化学渗透假说内容：当电子沿呼吸链传递时，所释放的能量将质子从内膜基质侧（M侧）泵至膜间隙（胞质侧或C侧），由于线粒体内膜对离子是高度不通透的，从而使膜间隙的质子浓度高于基质，在内膜的两侧形成pH梯度（△pH）及电位梯度（Ψ），两者共同构成电化学梯度（图7-9），即质子动力势（proton-motiveforce,△P）。质子沿电化学梯度穿过内膜上的ATP酶复合物流回基质，使ATP酶的构象发生改变，将ADP和Pi合成ATP。电化学梯度中蕴藏的能量储存到ATP高能磷酸键。

图16现在是16页\一共有47页\编辑于星期四17现在是17页\一共有47页\编辑于星期四ATP合成机制—构象耦联假说

(Boyer1979)1、“结合变构”模型图12、亚单位相对于亚单位旋转的直接实验证据图218现在是18页\一共有47页\编辑于星期四19现在是19页\一共有47页\编辑于星期四日本的吉田（MassasukeYoshida）等人将α3β3γ固定在玻片上，在γ亚基的顶端连接荧光标记的肌动蛋白纤维，在含有ATP的溶液中温育时，在显微镜下可观察到γ亚基带动肌动蛋白纤维旋转。γ亚基旋转的观察（引自Lodish等1999）20现在是20页\一共有47页\编辑于星期四21现在是21页\一共有47页\编辑于星期四线粒体与疾病线粒体与疾病、衰老和细胞凋亡有关，线粒体的异常会影响整个细胞的正常功能，从而导致病变，称为“线粒体病”（MitochondrialDiseases，MD）。克山病人类线粒体疾病的原发机制线粒体与细胞凋亡22现在是22页\一共有47页\编辑于星期四克山病是一种“心肌线粒体病”（mitochondrialcardiomyopathy）：是以心肌损伤为主要病变的地方性心肌病，因营养缺乏（缺硒）而引起。硒对线粒体膜有稳定作用，患者因缺硒而导致心肌线粒体出现膨胀、嵴稀少和不完整；琥珀酸脱氢酶、细胞色素氧化酶和H+-ATP酶活性及其对寡霉素的敏感性都有明显降低；膜电位下降，膜流动性减低；对电子传递和氧化磷酸化偶联均有明显影响。23现在是23页\一共有47页\编辑于星期四目前已知的100多种人类线粒体疾病，其原发机制都是mtDNA和核DNA异常（突变、缺失、重排）引起的遗传性疾病，表现为呼吸链的电子传递酶系和氧化磷酸化酶系的异常。线粒体是细胞内自由基的源泉，机体95％以上的氧自由基都来自线粒体的呼吸链，电子传递过程中的单电子漏给分子氧是氧自由基（和过氧化氢）等活性氧生成的主要原因。正常情况下，氧自由基可被线粒体中的Mn2+-SOD所清除，机体衰老及退行性疾病时Mn2+-SOD活性降低，氧自由基积累在线粒体中，据估计其氧化损伤的mtDNA的积累量可比核DNA高16倍。导致mtDNA转译呼吸链酶系异常。24现在是24页\一共有47页\编辑于星期四此外，线粒体还与细胞凋亡有关。1995年Wang等人发现各种凋亡诱导因子诱发细胞凋亡后，胞质中细胞色素c含量增加。进一步研究还发现，只有成熟的细胞色素c（holocytochromec）才有引起细胞凋亡的作用，而在胞质中内质网核糖体合成的细胞色素c前体则无此作用，亦即只有线粒体释放的细胞色素c才有凋亡作用。表明线粒体可通过释放细胞色素c参与细胞凋亡。25现在是25页\一共有47页\编辑于星期四第二节叶绿体与光合作用●叶绿体(Chloroplast)的形态结构●叶绿体的功能—光合作用(photosynthesis)26现在是26页\一共有47页\编辑于星期四一、叶绿体(Chloroplast)的形态结构形态、数目：在高等植物中叶绿体象双凸或平凸透镜，叶肉细胞一般含50～200个叶绿体，可占细胞质的40%，叶绿体的数目因物种细胞类型，生态环境，生理状态而有所不同。27现在是27页\一共有47页\编辑于星期四28现在是28页\一共有47页\编辑于星期四叶绿体超微结构（图）外被（chloroplastenvelope）叶绿体外被由双层膜组成，膜间为10~20nm的膜间隙。外膜的渗透性大，如核苷、无机磷、蔗糖等许多细胞质中的营养分子可自由进入膜间隙。内膜对通过物质的选择性很强，，CO2、O2、Pi、H2O、磷酸甘油酸、丙糖磷酸，双羧酸和双羧酸氨基酸可以透过内膜，ADP、ATP已糖磷酸，葡萄糖及果糖等透过内膜较慢。蔗糖，NADP+及焦磷酸等不能透过内膜，需要特殊的转运体才能通过内膜。类囊体（thylakoid）是单层膜围成的扁平小囊，沿叶绿体的长轴平行排列。膜上含有光合色素和电子传递链组分，又称光合膜。许多类囊体象圆盘一样叠在一起，称为基粒，组成基粒的类囊体，叫做基粒类囊体，构成内膜系统的基粒片层（granalamella）。基粒由10~100个类囊体组成。贯穿在两个或两个以上基粒之间的没有发生垛叠的类囊体称为基质类囊体，它们形成了内膜系统的基质片层（stromalamella）。类囊体膜的内在蛋白主要有细胞色素b6/f复合体、质体醌（PQ）、质体蓝素（PC）、铁氧化还原蛋白、黄素蛋白、光系统Ⅰ、光系统Ⅱ复合物等。基质（stroma）主要成分包括：碳同化相关的酶类（如RuBP羧化酶占基质可溶性蛋白总量的60%）、叶绿体DNA、蛋白质合成体系：如，ctDNA、各类RNA、核糖体等。一些颗粒成分：如淀粉粒、质体小球和植物铁蛋白等。29现在是29页\一共有47页\编辑于星期四30现在是30页\一共有47页\编辑于星期四31现在是31页\一共有47页\编辑于星期四

二、叶绿体的功能—光合作用

(photosynthesis)光合作用：绿色植物利用体内的叶绿素吸收光能，把二氧化碳和水转化为有机物，并释放氧气的过程称为光合作用。

(1)光合电子传递反应—光反应(LightReaction)

(2)碳固定反应—暗反应(DarkReaction)光反应暗反应(碳固定)32现在是32页\一共有47页\编辑于星期四光反应在类囊体膜上由光引起的光化学反应，通过叶绿素等光合色素分子吸收、传递光能，水光解，并将光能转换为电能（生成高能电子），进而通过电子传递与光合磷酸化将电能转换为活跃化学能，形成ATP和NADPH并放出O2的过程。包括原初反应、电子传递和光合磷酸化。33现在是33页\一共有47页\编辑于星期四光合色素和电子传递链组分1．光合色素类囊体中含两类色素：叶绿素和类胡萝卜素，全部叶绿素和几乎所有的类胡萝卜素都包埋在类囊体膜中，与蛋白质以非共价键结合。2．集光复合体（lightharvestingcomplex）由大约200个叶绿素分子和一些肽链构成。大部分色素分子起捕获光能的作用，并将光能以诱导共振方式传递到反应中心色素。因此这些色素被称为天线色素。3．光系统Ⅱ（PSⅡ）吸收高峰为波长680nm处，又称P680。至少包括12条多肽链。包括一个集光复合体（light-hawestingcomnplexⅡ，LHCⅡ）、一个反应中心和一个含锰原子的放氧的复合体（oxygenevolvingcomplex）。D1和D2为两条核心肽链，结合中心色素P680、去镁叶绿素(pheophytin)及质体醌(plastoquinone)。4．细胞色素b6/f复合体(cytb6/fcomplex)可能以二聚体形成存在，每个单体含有四个不同的亚基。细胞色素b6（b563）、细胞色素f、铁硫蛋白、以及亚基Ⅳ（被认为是质体醌的结合蛋白）。5．光系统Ⅰ（PSI）能被波长700nm的光激发，又称P700。包含多条肽链。由集光复合体Ⅰ和作用中心构成。结合100个左右叶绿素分子、除了几个特殊的叶绿素为中心色素外外，其它叶绿素都是天线色素。三种电子载体分别为A0（一个chla分子)、A1(为维生素K1)及3个不同的4Fe-4S。34现在是34页\一共有47页\编辑于星期四原初反应（primaryreaction)原初反应是指叶绿素分子从被光激发至引起第一个光化学反应为止的过程，包括光能的吸收、传递与转换，即光能被捕光色素分子吸收并传递至反应中心，在反应中心发生最初的光化学反应，使电荷分离从而将光能转换为电能的过程。光能的吸收、传递与转换，形成高能电子35现在是35页\一共有47页\编辑于星期四电子传递

P680接受能量后，由基态变为激发态（P680*），然后将电子传递给去镁叶绿素（原初电子受体），P680*带正电荷，从原初电子供体Z（反应中心D1蛋白上的一个酪氨酸侧链）得到电子而还原；Z+再从放氧复合体上获取电子；氧化态的放氧复合体从水中获取电子，使水光解。在另一个方向上去镁叶绿素将电子传给D2上结合的QA，QA又迅速将电子传给D1上的QB，还原型的质体醌从光系统Ⅱ复合体上游离下来，另一个氧化态的质体醌占据其位置形成新的QB。质体醌将电子传给细胞色素b6/f复合体，同时将质子由基质转移到类囊体腔。电子接着传递给位于类囊体腔一侧的含铜蛋白质体蓝素(plastocyanin,PC)中的Cu2+，再将电子传递到光系统Ⅱ。P700被光能激发后释放出来的高能电子沿着A0→

A1

→4Fe-4S的方向依次传递，由类囊体腔一侧传向类囊体基质一侧的铁氧还蛋白（ferredoxin,FD）。最后在铁氧还蛋白-NADP还原酶的作用下，将电子传给NADP+，形成NADPH。失去电子的P700从PC处获取电子而还原。

图36现在是36页\一共有47页\编辑于星期四37现在是37页\一共有47页\编辑于星期四光合磷酸化光合磷酸化的概念：由光照所引起的电子传递与磷酸化作用相偶联而生成ATP的过程

光合磷酸化类型：分为非循环式光合磷酸化和循环式光合磷酸化两条通路。循环式传递的高能电子在PSⅠ被光能激发后经cytb6f复合物回到PSⅠ。结果是不裂解H2O、产生O2，不形成NADPH，只产生H+跨膜梯度，合成ATP。38现在是38页\一共有47页\编辑于星期四暗反应自己看书吧！39现在是39页\一共有47页\编辑于星期四第三节线粒体和叶绿体是半自主性细胞器半自主性细胞器的概念：

自身含有遗传表达系统(自主性)；但编码的遗传信息十分有限，其RNA转录、蛋白质翻译、自身构建和功能发挥等必须依赖核基因组编码的遗传信息(自主性有限)。线粒体和叶绿体的DNA线粒体和叶绿体的蛋白质合成线粒体和叶绿体合成蛋白质的种类十分有限参加叶绿体组成的蛋白质来源有３种情况：由ctDNA编码，在叶绿体核糖体上合成；