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第3章基因工程小测基因工程的操作原理及结果:;(定向/不定向)改造生物的遗传特性。基因工程的工具酶:“分子手术刀”——和“分子缝合针”——。既可以缝合黏性末端,又可以缝合平末端。请写出能与—G互补的粘性末端:—CCTAG基因工程的载体“分子运输车”种类有:等。质粒是一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞之外,并具有能力的环状分子。作为载体必须具备的条件:。可用检测DNA,需置于,呈现。DNA粗提取实验中,体积分数为95%的酒精起的作用。基因工程的一般操作步骤:(1)目的基因的。(2)的构建。(3)将目的基因导入。(4)目的基因的。PCR是的缩写,它的原理是,基本条件:DNA模板、4种、、的DNA聚合酶、缓冲液(含,作用:)。PCR扩增X基因的前提条件及原因是:。目的基因能否在受体细胞中稳定遗传的关键是:PCR的过程及对应的温度:(℃)、(℃左右)、(℃左右)常用来鉴定PCR产物。检测时,凝胶中的DNA分子通过染色,可以在波长为300nm的下被检测出来。PCR过程中(需要/不需要)解旋酶,需要通过打开氢键。基因表达载体构建的目的:。启动子和终止子位于上,是基因表达载体必需的部分,决定的开始和结束;而起始密码子和终止密码子位于上,决定的开始和结束。导入植物细胞常用的方法:;(侵染植物和植物)。农杆菌的特点:农杆菌细胞内含有质粒,当它侵染植物细胞后,能将质粒上的(可转移的DNA)转移到被侵染的细胞,并且将其整合到该细胞的上。导入动物细胞常用方法:技术。导入微生物细胞:常以大肠杆菌作为受体细胞,一般先用处理大肠杆菌细胞,使细胞处于一种的生理状态,然后再将重组的基因表达载体导入其中。将胰岛素基因的表达载体导入大肠杆菌,从大肠杆菌中获得的“胰岛素”(能/不能)达到期待的生物活性。原因是:。因此,可以选用生产胰岛素较为便捷。可用等技术检测受体生物的染色体DNA上是否插入目的基因或检测目的基因是否转录出了mRNA。利用,检测目的基因是否翻译成相关蛋白质。蛋白质工程手段:通过或,来改造现有蛋白质,或制造一种新的蛋白质。基因工程的不足:基因工程在原则上只能生产自然界中的蛋白质。蛋白质工程的基本思路:→设计预期的→推测应有的序列→找到并改变相对应的序列或合成新的→获得所需要的蛋白质。基因工程的操作原理及结果:基因重组;定向(定向/不定向)改造生物的遗传特性。基因工程的工具酶:“分子手术刀”——限制性内切核酸酶和“分子缝合针”——DNA连接酶。T4噬菌体既可以缝合黏性末端,又可以缝合平末端。请写出能与—G互补的粘性末端:GATCC——CCTAGG—基因工程的载体“分子运输车”种类有:质粒、噬菌体、动植物病毒等。质粒是一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外,并具有自我复制能力的环状双链DNA分子。作为载体必须具备的条件:①必须有一个至多个限制酶切割位点;②必须具备自我复制的能力;③必须有特殊的标记基因。可用二苯胺试剂检测DNA,需置于沸水中加热,呈现蓝色。DNA粗提取实验中,体积分数为95%的酒精起析出DNA的作用。基因工程的一般操作步骤:(1)目的基因的筛选与获取。(2)基因表达载体的构建。(3)将目的基因导入受体细胞。(4)目的基因的检测与鉴定。PCR是聚合酶链式反应的缩写,它的原理是DNA半保留复制,基本条件:DNA模板、4种脱氧核苷酸、2种引物、耐高温的DNA聚合酶、缓冲液(含Mg2+:激活DNA聚合酶)。PCR扩增X基因的前提条件及原因是:有一段已知X基因的核苷酸序列,以便根据这一序列合成引物。目的基因能否在受体细胞中稳定遗传的关键是:目的基因需要整合到受体细胞染色体的DNA上。PCR的过程及对应的温度:变性(超过90℃)、复性(50℃左右)、延伸(72℃左右)常用琼脂糖凝胶电泳来鉴定PCR产物。检测时,凝胶中的DNA分子通过染色,可以在波长为300nm的紫外灯下被检测出来。PCR过程中不需要(需要/不需要)解旋酶,需要通过升高温度打开氢键。基因表达载体构建的目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时使目的基因能够表达和发挥作用。启动子和终止子位于DNA上,是基因表达载体必需的部分,决定转录的开始和结束;而起始密码子和终止密码子位于mRNA上,决定翻译的开始和结束。导入植物细胞常用的方法:花粉管通道法;农杆菌转化法(侵染双子叶植物和裸子植物)。农杆菌的特点:农杆菌细胞内含有Ti质粒,当它侵染植物细胞后,能将Ti质粒上的T—DNA(可转移的DNA)转移到被侵染的细胞,并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。导入动物细胞常用方法:显微注射技术。导入微生物细胞:常以大肠杆菌作为受体细胞,一般先用Ca2+处理大肠杆菌细胞,使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态,然后再将重组的基因表达载体导入其中。将胰岛素基因的表达载体导入大肠杆菌,从大肠杆菌中获得的“胰岛素”不能(能/不能)达到期待的生物活性。原因是:大肠杆菌是原核生物,无内质网、高尔基体等细胞器,大肠杆菌中基因表达获得的蛋白质未经加工。因此,可以选用酵母菌生产胰岛素较为便捷。可用PCR等技术检测受体生物的染色体DNA上是否插入目的基因或检测目的基因是否转录出了mRNA。利用抗原—抗体杂交,检测
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