流式培训封闭抗体专家讲座

主要内容一、流式细胞仪介绍二、人类白细胞抗原（HLA-B27）中临床应用三、封闭抗体检测在临床中应用流式培训封闭抗体专家讲座第1页流式细胞术流动细胞测量术FlowCytometry(FCM)Fluorescence-activatedcell-sorting(FACS)流式培训封闭抗体专家讲座第2页流式细胞术流式培训封闭抗体专家讲座第3页流式细胞术快速检测流动单细胞或颗粒，达上万个/每秒检测物能够是细胞、细菌或各种微粒，0.5-50mm范围内

多参数同时分析，FS/SS/FLs(荧光)

可分析，可分选特点特点：流式培训封闭抗体专家讲座第4页人类白细胞抗原系统（HumanLeucocyteAntigen,HLA），俗称为白细胞血型，是人类组织相容性抗原，HLA抗原受控于HLA基因。

HLA基因是由一组高度多态性基因组成染色体区域，因其产物代表移植供者与受者相互接收程度，故又称其产物为移植抗原或组织相容性抗原。一、HLA介绍流式培训封闭抗体专家讲座第5页HLA基因遗传区域位于人类第六号染色体短臂，区域内包含224个基因座位,已发觉等位基因数共1288种。依据编码分子特征不一样，可将整个复合体基因分成：I类、II类、III类。流式培训封闭抗体专家讲座第6页I类基因：区位于着丝点远端，主要包含HLA-A、B、C三个位点，各位点有数目不一样等位基因，HLA-B27是B位点一个等位基因。II类基因区：位于着丝点近端，主要由DR、DQ、DP三个亚区组成，每个亚区又分若干个位点。在B细胞和上表示，这两类抗原都与移植相关

III类基因区：含有编码补体成份C2、C4、B因子及TNF、热休克蛋白和21羟化酶基因，其产物是一些可溶性蛋白质。流式培训封闭抗体专家讲座第7页一、HLA-B27HLA-B27抗原属于HLA-Ⅰ类抗原，由α和β两条肽链组成。第6号染色体HLA-Ⅰ类基因编码α链，15号染色体编码β链。基本上表示在机体全部有核细胞上，尤其是淋巴细胞表面含量丰富。当前，在HLA与疾病关联研究中，较有临床应用价值当数HLA-B27与强直性脊柱炎关联。在诊疗和判别强直性脊柱炎中有主要应用价值。流式培训封闭抗体专家讲座第8页

二、HLA-B27检测方法1.HLA-B27抗原检测CDC:微量淋巴细胞毒法FCM:流式细胞学法2.HLA-B27基因学检测荧光定量PCR流式培训封闭抗体专家讲座第9页（一）微量淋巴细胞毒法1.原理：待检淋巴细胞表面HLA-B27抗原与已知HLA-B27抗体结合，在补体参入下，造成细胞膜溶解，能透过染料使细胞着色，在显微镜下判断HLA-B27为阳性，不着色为阴性。2.方法学应用评价：该方法结果稳定，可靠，不需要特殊仪器，是当前通用方法，普通试验室均可开展。流式培训封闭抗体专家讲座第10页流式培训封闭抗体专家讲座第11页（二）流式细胞学法1.原理：利用荧光标识抗B27单抗与淋巴细胞表面B27抗原结合，使细胞带有荧光强度，用流式细胞仪检测，判断B27抗原阳性或阴性。2.方法学应用评价：优点：无须分离淋巴细胞，操作简便、快速、标本用量少，自动化程度高，特异性高，稳定性好，重复性高，结果判断准确，降低了人为原因影响，为当前较为理想方法。缺点:是仪器昂贵，当前只在较大医院应用。流式培训封闭抗体专家讲座第12页（三）荧光定量PCR1.试验原理：在PCR反应体系中，加入荧光染料，特异地掺入DNA双链后发射荧光信号，而不掺入荧光染料DNA分子不会发射任何荧光信号，经过检测荧光信号强度，到达检测PCR产物扩增目标。2.优点：基因水平检测，直接对HLA-B27原基因进行扩增分型，灵敏度高，特异性强。缺点：需要特定试验仪器及严格试验条件和熟练操作技术，在临床上普遍开展此项检验有一定难处。流式培训封闭抗体专家讲座第13页四、HLA-B27检测与强直性脊柱炎应用评价

1.普通人群中HLA-B27阳性率有种族与地域差异：不一样作者报道不尽一致，白种人4%-13%，黑种人2%左右，日本人0.2%，中国人2%-19%。2.B27与AS强相关联，中国人AS患者HLA-B27阳性率65-100%。绝大多数B27阳性者并未患AS，所以，B27检测不能够作为AS筛查指标。3.HLA-B27表示已成为临床诊疗与判别诊疗血清阴性脊柱关节病最惯用试验室检验指标。流式培训封闭抗体专家讲座第14页4.AS诊疗主要靠临床检验和影像学改变，提醒双侧骶髂关节炎和脊柱炎。结合HLA-B27阳性，诊疗AS。HLA-B27阴性不能排除AS。5.假如症状和体征脊柱关节病变发生可能性超出50%，那么，B27阳性显著增加正确诊疗机会。6.一级亲属HLA-B27出现率25%-100%，预测患者家眷组员发生AS可能性。治疗性选择胎儿。7.AS与HLA-B27高度相关，表明AS是一个遗传易感性疾病。流式培训封闭抗体专家讲座第15页二、流式在封闭抗体中应用封闭抗体检测概念为何做怎样做怎样解读流式培训封闭抗体专家讲座第16页基本概念重复自然流产

自然流产连续或不连续发生2次或2次以上者，约占总妊娠数0.5%~3.0%病因

解剖原因、遗传原因、内分泌原因、感染原因、男方原因、免疫学原因（>50%）流式培训封闭抗体专家讲座第17页RSA

本身免疫型：与本身免疫病相关本身抗体相关，如SLE、RA等同种免疫型：封闭抗体，如：抗HLA抗体、抗滋养细胞淋巴细胞交叉反应抗原抗体（TLX）;非特异性BA、特异性非细胞毒抗体、抗独特型抗体等

主动免疫疗法所产生BA部分是针对TLX，所以，当夫妻双方TLX相同时，不能激发母体产生BA

流式培训封闭抗体专家讲座第18页封闭抗体作用

1.一个抗配偶淋巴细胞特异性IgG类抗体，存在于正常孕妇血清中，能够抑制淋巴细胞反应，封闭母体淋巴细胞对胚胎滋养层细胞毒作用。2.预防辅助性T细胞识别胎儿抗原抑制物，并可阻止母亲免疫系统对胚胎攻击。3.封闭同种抗原刺激淋巴细胞产生巨噬细胞移动抑制因子。封闭抗体作用流式培训封闭抗体专家讲座第19页父系抗原母体淋巴细胞封闭抗体没有封闭抗体胎儿不受母体攻击胎儿被母体攻击，造成流产流式培训封闭抗体专家讲座第20页封闭抗体检测方法-怎样做细胞毒试验ELISA流式细胞术流式培训封闭抗体专家讲座第21页流式细胞术检测封闭抗体流程标本：男女双方EDTA抗凝全血方法：

室温孵育裂解红细胞上机

计算公式：封闭效率=对照管CD%-试验管CD%

结果判定：

1.三项中有一项出现负值即判断封闭抗体缺乏2.封闭效率均为正值，判断阳性，正常

男方全血男方血浆女方血浆混合单抗对照管10010