上海市临检中心 临床检验质量管理培训 4.刘华芬-临床实验室参考范围建立- HFL short

质谱临床中方法学临床参考范围的建立刘华芬杭州凯莱谱

2019©2017CALIBRA凯莱谱版权所有提纲•

为什么选择质谱•

如何建立质谱临床参考区间•

自建参考区间需要考虑的因素•

如何建立有临床意义参考区间案例–

激素：人种的差异–

干血片：样品介质的差异–

多组分诊断：胆汁酸©2017CALIBRA凯莱谱版权所有传统生化酶法检测胆汁酸挑战：为什么只能检测总胆酸？传统生化酶法检测基于3α-HSD，即将胆酸胆汁酸C3上α位的羟基（3α-OH）脱氢形成羧基（3α-O），同时氧化型NAD＋还原成NADH。该原理仅能检测总胆汁酸（TBA），不能鉴别区分。©2017CALIBRA凯莱谱版权所有为什么质谱是小分子定量的金标准？

分子水平的检测N2Q0Q1Q2Q3Detector15种胆汁酸MRMCholicAcid脱熊氧胆酸407/343

定量407/389确认408-1=407离子化离子碎片：389,

343…ChenodeoxycholicAcid391/345

定量391/391

确认离子碎片：391,

345…392-1=391离子化鹅去氧胆酸4©2017CALIBRA凯莱谱版权所有免疫法仅测总胆汁酸和质谱测每个亚型对诊断的差异UDCA用药后，UDCA（游离态及结合态）浓度大幅上升，其他四类胆汁酸浓度降低。但总胆汁酸可能浓度并未发生变化。若仅监测总胆汁酸，无法正确体现治疗效果MayoClinicLabCorpQuestARUPCholic

Acid分型检测✓✓✓✓✓✓✓脱熊氧胆酸ChenodeoxycholicAcid✓✓x✓✓✓✓✓✓✓✓鹅去氧胆酸Deoxycholic

Acid去氧胆酸UrsodeoxycholicAcid熊去氧胆酸TotalBile

Acids✓总胆汁酸©2017CALIBRA凯莱谱版权所有质谱

精准的结果，临床应用方法及质量控制是根本！凯莱谱质谱临床应用规范化的发展历程：CAP盲样LDT方法开发/验证规范化IVD认证的仪器测试/能力评估/CDC标准化实验室开发试剂，

方法©2017CALIBRA凯莱谱版权所有LDTMethod

Development

and

Validation试验方法开发是一个系统工程：准确度，重现性，成本，效率，收费，

环境影响MatricesSelectionCurve

andQC

DesignSamplePreparationHPLCMethodMass

SpecMethodAutomationPanelDesignPatientSampleClinicalAnalyticalAnalyticalSpecificityinterferenceLinearity(AMR)sensitivity(LOB/LOD/LOQ)MatrixEffectStabilityAccuracy

PrecisionCarryoverReferenceRange©2017CALIBRA凯莱谱版权所有参考区间的建立：

中华医学检验分会，

卫计委临检中心指南与共识

2017，

10

月©2017CALIBRA凯莱谱版权所有临床参考区间的建立：NCCLS

指南：

parametric

andnonparametric

（参数，

非参数）•

NCCLS

recommends

testing

atleast120patientsamples

forestablishmentof

astatistically

significantreference

interval

range.•

ForanFDA

approvedtestmethod,theclinicallaboratory

canadoptthe

manufacturer’sstatedreferencerangeifitspatientpopulationgivessimilar

resultstothosepublished

inthemanufacturer'spackageinsert.

A

totalof40samples,20fromhealthymen

and20fromhealthywomen,

should

betestedandtheresultscompared

tothe

publishedreferencerange.©2017CALIBRA凯莱谱版权所有参考区间的建立

(C28-A2)•

已知参考区间从健康人群采集20个样本并对其进行分析。可接受标准：20个样本中，1个样本可以偏离已知参考区间。•

新参考区间的建立:从两个不同地理区域获得120个样本并对其进行分析，用软件计算得到参考区间。•

对于年龄或者性别等因素有依赖性的检测，其参考区间需要重复以上步骤分别建立。10©2017CALIBRA凯莱谱版权所有NCCLS

指南：

parametricandnonparametric（参数，

非参数）•

参数：

mean

andstandarddeviationtodetermine

the

rangeof

valuesthatfallwithinthe

95%confidenceinterval.Beforethismethodcanbeusedthepopulation

distributionmustbeexamined

toensure

thataGaussian(bellshaped)

distribution

ispresent.•

非参数：The

nonparametric

approach

involvesestablishingthevaluesfalling

atthe2.5and97.5percentilesof

thepopulation

as

thelower

andupper

referencelimits.•

For

example,ifthedatasetconsistedof120

specimens,the

2.5and97.5percentilerankswould

becalculatedby

multiplying;

120x0.025=3;

120x0.975=

117;outliner:3+/-STD11©2017CALIBRA