草地牧草种质资源收集与保存技术规范

草地牧草种质资源收集与保存技术规范范围本文件规定了广西地区草地牧草种质资源收集与保存的过程，包括工作准备、样品采集及营养成份测定、图片信息采集、标本采集、标本制作及管理、种质资源的入库保存和信息数据库建立的流程。本文件适用于广西行政区域内的草地牧草种质资源收集与保存。规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6435饲料中水分的测定GB/T6432饲料中粗蛋白测定方法凯氏定氮法GB/T6433饲料中粗脂肪的测定GB/T6434饲料中粗纤维的含量测定过滤法GB/T6438饲料中粗灰分的测定GB/T2930.2牧草种子检验规程净度GB/T2930.6草种子检验规程健康测定健康检验GB/T2930.4牧草种子检验规程发芽率GB/T2930.8牧草种子检验规程水分测定水分测定术语和定义下列术语和定义适用于本文件。

种质资源Germplasmresources具有特定种质或基因，可供育种及相关研究利用的各种生物类型及品种。

草地Grassland本文件所称的草地，是指由饲用植物和食草动物为主的生物群落及其着生的土地构成的生物土地资源，包括天然草原和人工草地。

收集Collection利用现场采集、引进等方法收集的牧草种质资源。

保存Preservation对收集的牧草种质资源进行保存，以维持其原有种质资源的稳定性。

生境Habitat是指物种或物种群体赖以生存的生态环境。

居群Population在野生植物群落中某一个物种的一组个体植株，具有共同的基本特点。

入库Putinstorage指草种、标本等放进仓库或库房贮存。

中期库Long-termgenebanks利用仪器设备控制贮藏环境，长期贮存作物种质的仓库，贮藏温度控制在-10℃，相对湿度（RH）控制在30-40%。

长期库Middle-termgenebanks利用仪器设备控制贮藏环境，长期贮存作物种质的仓库，贮藏温度常年控制在-18℃±2℃，相对湿度（RH）控制在50%以下。总则确定牧草种质资源采集与保存过程中的方法和流程，采集的种质资源信息清晰、准确，样品材料完整、规范、标准化；为牧草种质资源收集、评价和利用提供理论依据。收集前期准备组建调查团队并落实人员分工根据工作内容和工作量组建团队并进行培训，培训主要内容包括地理信息解读、草地类型判别、植物鉴定、植物摄影、标本制作和植物材料保存等；明确分工，落实具体工作。工具及耗材参见附录A的表A.1。考察地点和考察路线查阅预采集行政区域的草地资源方面的草地类型图、历年草地调查和国土调查涉及草地分布的基础图件、行政区域图、交通路线图、植被类型图及遥感地理影像等，规划考察路线和重点考察区域。工作计划其中包括调查取样时间、取样区域及取样路线、行程、出行方式，以及详细的经费预算表等。收集对象草地牧草种质资源，包括有性繁殖材料（种子）和无性繁殖材料（根茎、根蘖、幼苗等），以及相应的植物图片、标本和营养成分等。种质资源样本收集原则采样应具有代表性、典型性和适时性。采样工具网袋、布袋、标签、铅笔、记录本、电子天平称、镰刀、枝剪等。采样方法根据种质类型和繁育方式的差异，具体要求如下:自交牧草至少要从50株～100株上采取种子；异交牧草至少要从200株～300株上采集种子，且每株采集的种子粒数应平均分布；野生近缘牧草种质资源要以居群为单位，居群内有亚居群分化的，每个亚居群均要采样；同一草种不同生境，每个生境均要采样。采样量按照储存标准，牧草种子的取样量见表2；采集过程中应尽量达到中期库保存要求，如无法达到，可先采集，后期扩繁再进行保存；无性繁殖牧草资源一个采集区要采集30份～50份材料。采样编号调查中对每份样品都要进行编号，同一个采集号不得重复使用；同一时间、同一地点、同一草种的多份样本应编同一号；同一块草地、不同调查点、相同草种的样本应编不同号；同一大型草种若干部分组成的样本编为相同的号；编号格式宜采用“采集日期（8位，年月日）+地区名称前两字的字母缩写+序号（3位）”；示例：2019年5月4日XX自治区龙胜县南山牧场采集的第2份标本记为20190504LS002。填写原始记录表参见附录A的表A.2。样本保管样本是种子的，要及时晾晒，装在透气的纱袋或网袋内，妥善保存；样本是根茎、根蘖、幼苗的，采样时要连根带土，根部放在塑料袋中保湿。采样植株营养成分测定需测定营养成分的采样植株按附录B要求进行。样本图片资料采集与管理需图片资料的样本按附录C要求进行。样本标本的采集、制作与管理需制作标本的样本按附录D要求进行。保存有性繁殖资源的入库保存入库前处理a） 净度应大于90%，净度检验按GB/T2930.2的规定执行；b） 健康检验按GB/T2930.6的规定执行；c） 发芽率检验按GB/T2930.4的规定执行。规程中没有提及的草种，按照该属的发芽方法进行检验；d） 符合入库条件的种子应及时干燥。干燥时间的长短依草种的大小、数量、最初含水量和干燥条件而定，水分测定按照GB/T2930.8的规定执行；e） 干燥处理的种子应及时密封包装，不耐压的种子用硬质容器盛装。入库保存流程入库对象名称入库的种质材料学名以《中国植物志》为准，并标注其拉丁名。入库登记库管理人员检查种子基本信息资料、种子袋上的编号、对种质信息进行核对，并按照入库的数量和质量标准，登记种质的基本信息资料，并填写入库登记表附表1。种质资源保存信息表采集编号资源库编号采集来源（单位、个人）库分类号科中文名科拉丁名属中文名属拉丁名种名学名来源地采集时间生境经纬度、海拔健康状况纯净度净重千粒重入库时间入库种子发芽率生活力监测时间、人员生活力监测结果下一次生活力监测时间备注入库前资料是否存档查重及去重检查新获得种质材料与已保存种质材料之间是否有重复。主要重点检查入库种子和已有资源、入库种子自身是否重复两个方面。保存种子数量要求保存种子数量与草种类型有关，种子数量要求详见表2。种子保存数量最低要求种子大小分类千粒重中期库种子保存长期库种子保存示例最低重量（g）最少粒数（粒）最低重量（g）最少粒数（粒）极小粒<120200001010000早熟禾属、猫尾草属、画眉草属等较小粒1～520～1002000010～5010000苜蓿属、山蚂蝗属、柱花草属等小粒6～2090～2001500060～20010000红豆草属、野豌豆属、田菁属等中粒21～100210～100010000100～5005000山黎豆属、豇豆属等大粒101～1000250～5005000200～5003000银合欢属、豌豆、玉米等特大粒>100050030005002000刀豆、蚕豆等入库定位根据种质材料种类及特点，对符合入库条件的种子按照分类编号方法，编号和库位号，每份材料一个固定的库位号，将包装好的种子编码后入库定位保存。库存种子生活力监测原则定期取出少量种子进行测定发芽率，检验种子生活力丧失程度，同时对贮藏种子数量进行检查，确定是否需要进行繁殖更新。一般来说，长期库监测间期为10年，中期库为5年。长期库保存在发芽率为85%及以上时，生活力监测间期禾本科及大粒种子为10年，小粒豆科种子为15年，其他科种子为10年。当发芽率低于85%时，生活力监测间期依种类不同而缩短。中期库保存生活力监测间期为5年。寿命短的种子应缩短监测间期。繁殖更新当种子的生活力水平不能满足长期储存条件时，应进行繁殖更新，具体条件如下：草种子发芽率降至60%以下，活种子数量不足4次繁殖所需种子量，自花授粉草种和自交系的每份活种子数量低于600粒，异花授粉草种每份活种子数量低于800粒时，需要繁殖更新；当种子在中期库绝种时，该种质长期库中的种子应繁殖更新；贮存过程中的种子生活力监测和向使用者分发种子，使得库存种子数量减少到更新临界值以下，也需要繁殖更新。无性繁殖材料的入圃保存隔离处理采集的根茎、根蘖、幼苗等无性繁殖材料，应按照检疫对象名单严格检疫，对病虫害进行消毒，隔离观察周期按照采集牧草资源的类型而定，经检疫合格的种质方可进入资源圃种植。试种观察对种植的牧草种质进行观察，观察其种植前期的生长情况，提供适宜的生长环境；同时，通过生物学特征和植物学特征进一步鉴定其类别。入圃定位种植后，应在资源圃平面信息图上标注种质的种植位置，标明每份种质的圃位号、种植时间、保存株数，并建立采集编号和圃位号对应表。种质资源圃每次增减资源都要在圃位图上进行标注，同时注明制图人和审核人的姓名和制图日期。每份种质在资源圃保存数量不低于3株，珍稀种质资源可适当增加保存数量。种植时对每份种质挂牌，牌上标注种质名称，编号。监测与更新保存过程中定期对种质存活株数、植株状态、病虫害、土壤状况进行观察监测。出现下列情况之一时及时更新复壮：当植株数量减少到原保存量的50%；植株出现显著地衰老症状；遭受严重病虫危害。建立信息数据库将牧草种质资源收集、保存工作中获取的相关数据资料进行整理建档，包括搜集的资料、工作方案、工作记录、影像图片资料、收集信息、保存信息等，同时备份纸质档案和电子档案，保证档案资料的连续性和完整性，便于全过程追溯。

（资料性）

牧草种质资源收集与保存广西草地牧草种质资源收集与保存物资表类别名称用途数量电子设备类笔记本电脑存储、整理电子资料等1GPS定位仪资源采样点定位2数码照相机资源图片采集1电子天平称用于样品采集称重1移动硬盘备份资料1工具类调查记录本记录采集信息若干标签记录样品采集号若干标本采集号牌标本编号若干塑料自封袋存放野外采集的标本；包裹根蘖等无性繁殖材料若干热风机烘制腊叶标本1标本布包包裹标本若干标本夹、标本纸压制标本若干夹板、瓦楞板压制标本若干标本夹绑带压制标本若干台纸标本上台若干乳胶标本上台若干蜡纸标本上台若干集标签标本上台若干标本采集签标本上台若干标本鉴定签记录标本鉴定信息若干网袋采集种子及无性繁殖材料若干布袋采集种子若干牛皮纸袋用于小粒种子采集若干大整理箱归类存放物资若干枝剪、镰刀采集用2锄头、铲子挖取材料2小刀采集用2插座电子设备充电使用2文具类铅笔、记号笔标签记录用若干橡皮修改错误若干记事本调查笔录整理若干宽胶带样品封装若干美工刀样品封装若干卷尺、小尺子植株测量性状若干档案袋调查信息归类整理若干塑料袋保存活体样品若干7号电池GPS用若干常用药应急使用若干雨衣、雨伞、水鞋雨天工作用若干采样服装（迷彩服）防护野外刮伤若干书籍《中国植物志》查阅鉴定1《中国高等植物图鉴》查阅鉴定1地方植物志查阅鉴定1基础图件调查范围和路线参考1中国高等植物科属检索表查阅鉴定1广西草地牧草种质资源采集原始记录表引种号/采集号：学名：

拉丁名：科或亚科名：属或亚属名：资源类型：1.野生资源（群体）2.野生资源（家系）3.野生资源（个体）4.地方品种5.选育品种6.品系7.遗传材料8.其他采集地点：采集时间：经度：。纬度：。海拔：m引种/采集材料：1.种子2.苗3.茎4.芽5.组织6.其他采集生境：1.平地2.谷地3.山坡4.山顶5.梯形台地6.路边7.水边8.滩涂地9.沙地10.其他物候期：1.播种期2.出苗期（返青期）3.花前期4.孕蕾期5.开花期6.结实期（绿果期）7.成熟期（果熟期）8.初始枯黄期利用方法：1.饲用2.食用3.纤维4.药用5.生态6.观赏7.材用8.其它丰富程度：1.偶见种2.稀有种3.伴生种4.常见种5.优势种6.建群种采集单位/个人：图像编号：标本编号：备注：

（规范性）

营养成分分析测定采样取样时期根据取样时的牧草生长时期进行取样，并在标签上标明所处营养生长期、开花期、成熟期或枯黄期等信息。取样部位选取外形、长势、生育期基本一致的植株，全株取样时植株处于营养生长期的宜采集主茎或主枝顶部的部分，开花期和成熟期、枯黄期则采取茎秆、籽粒、果实、块茎、块根等样品；现场称重，记为样品鲜重。取样量同一样点，不少于3个位点的植株，鲜样重不少于500g。样品编号种质资源样品编号一致（见）。营养成分分析样品的制备用湿布擦净表面的玷污物，去除泥土、施肥喷药等污染；如需要测定鲜样的，必须放在事先准备好的保湿器皿中，确保样品与采样之前的情况基本一致；用于营养成分分析的鲜样应105℃杀青15min～30min，然后降至60～70℃烘干12～24h，除尽水分直至恒重时称重，计算干物质含量；干燥的样品用磨样机粉碎，过φ1mm筛，如样品量少过φ0.1～0.5mm筛，混匀，置广口瓶中，密封，内外均贴签，保存。检测项目和测定方法检测项目和测定方法见表B.1。营养成分测定方法检测项目测定方法水分GB/T6435饲料中水分的测定蛋白质GB/T6432饲料中粗蛋白测定方法凯氏定氮法粗脂肪GB/T6433饲料中粗脂肪的测定粗纤维GB/T6434饲料中粗纤维的含量测定过滤法粗灰分GB/T6438饲料中粗灰分的测定无氮浸出物干物质％－（粗蛋白％＋粗脂肪％＋粗纤维％＋粗灰分％）注：以上数据指标均用%表示，精确到0.01%。记录填写广西草地牧草种质资源营养成分测定表，见表B.2。草地牧草种质资源营养成分测定表种质编号物候期干物质含量%粗蛋白%粗脂肪%粗纤维%粗灰分%无氮浸出物%

（规范性）

图片信息采集与管理原则图片应清晰，被摄主体保持背景简洁。图片采集生境拍摄使用大景深拍摄方法，使整体环境清晰覆盖整个图片，具体操作应遵守以下规则：同等焦距下，可通过缩小光圈，增大景深；使用广角镜头，相同光圈下，焦距越广，景深越大；选择合适的对焦点，达到最大景深。植物主体拍摄确定所要拍摄的植物，选择合适角度进行拍摄，使周围环境和被摄主体分处不同平面，保持一定的位置差，以达到突显主体的目的；优化拍摄的植物环境，拍摄低矮植物时应去除周围杂物，降低杂物入镜率；环境光控制，对周围环境较暗的区域，通过内置曝光补光、提高感光度、增大光圈等手段完成拍摄。植物局部拍摄取下所需拍摄的部位，再从周围环境中选择色彩较一致的作为背景，通过点测光、大光圈、长焦端拍摄。拍摄要求图片大小应大于2M，数据格式为jpg；要客观反映被摄主体的植物学特征，从不同的角度对植株分类特性进行描述，XX居群、植株、花、果实、种子、叶片、茎干、根系等；重点拍摄植物分类鉴定的关键部位，XX禾本科的叶舌、叶鞘等，豆科的托叶等；每个编号下的被摄物种应包含体现植株及局部形态特征的图片5张以上；珍稀濒危或特有种要尽可能收集细部特征照片，增加微距照片或解剖镜拍摄照片；每个被调查草地应有3张以上广角照，每个被调查草地应有3张以上调查队集体工作照。图片管理命名与种质资源样品编号一致（见）。整理保存图片保存以“当次调查时间+地区名称前两字的字母缩写+草地名称”为名称建立一级文件夹，如2019年5月4日至7日在广西龙胜县南山草地牧草资源的一级文件夹记为“20190504-07广西龙胜南山草地”，体现被调查草地样貌的广角照或航拍照和调查队集体工作照合并存于一级文件夹中；被调查草种的图片以“编号+种名”形式建立二级文件夹保存于一级文件夹之下。

（规范性）

标本的采集、制作、装订与管理原则标本应尽可能地反映种质植物原貌，可作为鉴定、考证和研究的依据。标本的采集采集工具枝剪、小刀、镰刀、铲子、塑料自封袋、标本采集号牌。采集原则每个调查点，每个草种的标本至少采集2～3份；同一草地，应独立编号并完整采集所调查点的草种标本，每个种采集2～3份；标本采集后，如条件允许，应立即在野外进行干燥，或将标本放在吸水纸中。标本要求标本须具有根、茎、叶、花、果等营养器官和生殖器官，雌雄异株的植物，要分别采取雄花枝和雌花枝；小型一年生草种或具有走茎、球茎、根茎、鳞茎等多年生草种应连根部或地下部一起采集；大型禾草可分段采集，由花序、完整的茎节、完整的叶片等分段组成，各段统一编相同的号；受光叶或庇阴叶、老叶、幼叶、二型叶或萌枝等各种发育阶段形态不同者，均须采集；木本或灌木类植物标本采集大小应控制于35～40cm内，要求所采标本应含花序、果实（果荚）及具完整顶端的枝条。标本编号采集时应及时对标本进行编号挂签，与种质资源样品编号一致（见）。标本制作所需工具枝剪、标本夹，比衬纸和干燥纸略大的瓦楞板或其他材质的夹板；标本夹绑带、纸袋或网袋、热风机、标本布包。标本整理压制之前先将标本的尘土、病斑叶等作洁净处理；将茎、叶、花、果展平放置，尽可能避免叶片重叠，如果干燥需很长时间，为避免叶片重叠粘连，可在中间夹一条干燥纸；至少应有一片叶反转过来以便观察其背面，最好幼叶和老叶各有一片；花的正、反面也都应朝上显示；若有额外的果实，可把一些纵向切开，另一些横向切开；若个体过大，则可切成片分开干燥；大型标本可折成“Ｎ”字型或“Ｖ”字型，使其合于台纸长度即可；标本叶子太多，可剪除一部分，但应保留叶柄，以示其着生的方式；若叶子太大，可对称的剪除一半，但不可将先端剪除；标本有厚而凹凸不平的地方，可加干燥纸或报纸予以支撑，避免柔嫩的叶子、花瓣可能因受不到挤压而在干燥过程中起皱褶。标本干燥标本压制前3d，宜每天更换干燥的吸水纸1～2次，含水量过高或者大而厚的标本增加换纸频率；标本换纸到8～10次，标本已基本干燥，可改为隔天换纸，直至标本完全干燥为止；换纸时，注意对标本继续修整，铺枝展叶，