生物化学类实验室安全管理PPT完整全套教学课件

生物、化学类实验室安全管理1第1章生物实验室安全管理简介2第2章生物实验室安全操作规范3第3章生物安全实验室消毒技术规范4第4章生物实验室废弃物的处理5第5章生物安全应急体系与预案6第6章化学实验室安全管理简介7第7章化学实验室安全操作规范8第8章化学实验室废弃物的处理9第9章化学实验室事故的预防与应急处理第一章

生物实验室安全管理简介第一节实验室生物安全A第二节实验室生物危害B目录2003年7月新加坡国立大学1位研究生在做病毒实验时因安全程序处理不当而感染SARS病毒。2004年4月北京疾病控制中心病毒所腹泻病毒室2名研究生在做病毒实验时感染SARS病毒。2010年12月，东北农业大学动物医学学院由于相关教师在实验中使用了未经检疫的山羊，导致2011年3月至2011年5月，该校27名学生和1名教师陆续被确诊感染布鲁氏菌病。实验室生物安全01一、生物安全生物安全是指避免危险生物因子造成实验人员暴露，向实验室外扩散并导致危害的综合措施。它贯穿于实验的整个过程，其面临的对象主要包括实验者本人、实验对象、实验者身边的人和环境。因此实验室生物安全涉及的绝不仅仅是实验室及相关工作人员，一旦发生事故，极有可能会给社会带来不可预知的危害。实验室生物安全事件或事故的发生是难以完全避免的。重要的是实验室工作人员应事先了解所从事活动的风险，同时应在风险可控制和可接受的状态下，从事相关的活动。实验室工作人员应认识但不应过分依赖于实验室用于安全保障的设施设备，绝大多数生物安全事故发生的根本原因是缺乏生物安全意识和疏于管理。二、国内外的生物安全要求世界卫生组织（WorldHealthOrganization，简称WHO）《实验室生物安全手册》为全世界各国提供了生物安全实验室建设的重要依据，提出了生物安全的原理和原则性要求。它对微生物的危险等级、实验室物理防护等级、标准实验室操作、感染性物质的处理、个人防护、生物安全柜的使用等作出了明确的规定。美国《微生物和生物医学实验室生物安全手册》着重描述生物实验室标准操作、实验室设计和安全设备的不同组合，形成1~4级的实验室微生物安全防护等级。我国《中华人民共和国传染病防治法》规定对传染病防治实行预防为主的方针，防治结合、分类管理、依靠科学、依靠群众。同时规定将传染病分为甲、乙和丙3类，详细说明流行病预防、疫情报告、疫情控制、医疗救治和监督管理等内容，并要求医疗保健部门、卫生防疫机构和从事致病微生物实验研究的单位必须严格执行国务院卫生行政部门制定的管理制度和操作规定。一类：鼠疫耶尔森氏菌、霍乱弧菌；天花病毒、艾滋病病毒。二类：布氏菌、炭疽菌、麻风杆菌、肝炎病毒、狂犬病毒、出血热病毒、登革热病毒；斑疹伤寒立克次体。三类：脑膜炎双球菌、链球菌、淋病双球菌、结核杆菌、百日咳嗜血杆菌、白喉棒状杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、破伤风梭状杆菌；钩端螺旋体、梅毒螺旋体；乙型脑炎病毒、脊髓灰质炎病毒、流感病毒、流行性腮腺炎病毒、麻疹病毒、风疹病毒。我国《中华人民共和国传染病防治法实施办法》第十六条将传染病的菌（毒）种分为以下3类：二、国内外的生物安全要求我国《中华人民共和国传染病防治法实施办法》第十七条规定对传染病菌（毒）种的保藏、携带、运输实行严格管理：菌（毒）种的保藏由国务院卫生行政部门指定的单位负责。一、二类菌（毒）种的供应由国务院卫生行政部门指定的保藏管理单位供应。三类菌(毒)种由设有专业实验室的单位或者国务院卫生行政部门指定的保藏管理单位供应。使用一类菌（毒）种的单位，必须经国务院卫生行政部门批准；使用二类菌（毒）种的单位必须经省级政府卫生行政部门批准；使用三类菌（毒）种的单位，应当经县级政府卫生行政部门批准。一、二类菌（毒）种，应派专人向供应单位领取，不得邮寄；三类菌（毒）种的邮寄必须持有邮寄单位的证明，并按照菌（毒）种邮寄与包装的有关规定办理。中华人民共和国卫生行业标准WS233—2017《病原微生物实验室生物安全通用准则》规定了病原微生物实验室生物安全防护的基本原则、分级和基本要求。根据实验室对病原微生物的生物安全防护水平，并依照实验室生物安全国家标准的规定将实验室分为一级（BiosafetyLevel1，BSL1）、二级（BSL2）、三级（BSL3）、四级（BSL4）。GB19489—2008《实验室生物安全通用要求》规定了对不同生物安全防护级别实验室的设施、设备和安全管理的基本要求。实验室生物危害02一、微生物危害等级第二类病原微生物，是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物之间传播的微生物。第一类病原微生物，是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。第三类病原微生物，是指能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。第四类病原微生物，是指在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物。《病原微生物实验室生物安全管理条例》第三条提到根据病原微生物的传染性、感染后对个体或者群体的危害程度，将病原微生物分为4类：二、实验室感染类型及来源（1）气溶胶导致的实验室感染。相关实验人员吸入以气溶胶形式散在空气中的病原微生物造成感染。（2）事故性感染。由于实验人员操作疏忽，导致病原微生物污染环境直接或间接感染人员或者周围环境。（3）人为破坏导致实验室感染。生物武器可以说是一种人为的实验室感染。（一）实验室感染类型（二）实验室感染来源（1）标本：包括实验室标本和临床标本。当实验室涉及传染性或潜在传染性生物因子时，应先进行危害程度评估。临床工作者接收的各种病人的血液、尿液、粪便等标本可能含致病因子，极大威胁医务工作者的健康，因此医院临床实验室和检验科要求实验室最低应达到二级生物安全防护标准。（2）菌毒种：在《生物制品生产检定用菌毒种管理规程》中，以《人间传染的病原微生物名录》为基础，根据病原微生物的传染性、感染后对个体或者群体的危害程度，将生物制品生产用菌毒种分为4类。第一类病原微生物，是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及中国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。第二类病原微生物，是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。第三类病原微生物，是指能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。第四类病原微生物，是指在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物。（二）实验室感染来源（3）仪器设备使用过程：如离心机可能产生气溶胶、离心管泄露等感染。（4）操作过程：如接种环操作不当产生气溶胶、样本滴落引起危害性物质泄漏、操作不当导致擦伤或切割伤等。（5）实验动物：动物实验中管理不当，导致病原微生物传播而感染。生物学实验室往往含较多致病微生物标本，是引起相关人员发生感染的危险场所，因此必须做好实验室安全防护。根据对所操作生物因子采取的防护措施，将实验室生物安全防护水平分为一级、二级、三级和四级，一级防护水平最低，逐级升高，四级防护水平最高。（三）实验室生物安全防护水平分级（三）实验室生物安全防护水平分级生物安全防护水平为一级的实验室适用于操作在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物。生物安全防护水平为二级的实验室适用于操作能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。生物安全防护水平为三级的实验室适用于操作能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物之间传播的微生物。生物安全防护水平为四级的实验室适用于操作能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。谢谢观看第二章

生物实验室安全操作规范第一节生物实验室安全标准化概述A第二节实验室仪器设备使用规范B第三节玻璃器皿的使用规范C第四节感染性物质的操作与防护规范D目录生物实验室安全操作的目的是保证实验人员不受实验因子的伤害，减少暴露于感染性物质的机会，避免感染性事件的发生。明确标准操作规范的定义并依据其内容实施、熟悉和掌握生物实验室安全的主要设备和仪器可以降低实验室危险事件的发生概率。规范的实验操作是保障实验室安全的基础，具体包括生物安全柜、高压灭菌器、离心机、玻璃器皿等的规范化使用。生物实验室安全标准化概述01生物实验室是主要从事生物学的基础研究、检测和鉴别、治疗药物研发和疫苗制备等的工作场所。对实验室进行安全管理的目的在于保护实验人员及其相关人员、保护试验的内环境和外环境不受实验生物因子的污染、保护实验材料。因此需要制定一个完整的涵盖整个过程各环节的标准操作规程（StandardOperatingProcedure，SOP）。实验从取样开始到处理潜在危险的材料、实验室的清洁消毒、废弃物的处理和安全管理，都应该严格按照标准操作规程实施。通过标准操作规程的执行，实验人员需明确如何有效正确地完成自身的工作。同时，标准操作规程必须与其他质量保证系统紧密联系，标准操作规程和安全手册必须每年进行审查,必要时进行调整修订。需要强调的是,不同等级生物安全实验室所规定的安全操作规程，不仅要归纳到标准安全操作规程，还应充分考虑特殊的安全操作规程。实验室仪器设备

使用规范02一、生物安全柜生物安全柜（BiologicalSafetyCabinet，BSC）是生物洁净实验室中的重要设备，是保障生物安全的一级屏障，是防止工作人员在操作含有感染性因子的材料时发生接触性、暴露性感染，保护操作者本人、实验室环境以及实验材料，为使其避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的。生物安全柜与规范的实验室技术相结合，为防止病原体感染提供有效的一级防护。在二级生物防护设施内，生物安全柜用于处理高浓度、大容量或可能产生气溶胶的感染材料。在三、四级生物防护设施内，生物安全柜用于所有感染材料的处理。实验人员需要经过严格培训和指导操作，熟悉生物安全柜的原理和注意事项。会用生物安全柜才安全。生物安全柜是在整个实验中起到重要作用的设备。气溶胶是指悬浮于气体介质中、粒径一般为0.001～100μm的固态、液态微粒所形成的胶溶态分散体系。在实验操作过程中，会产生肉眼无法看到的直径小于5μm的气溶胶以及直径为5～100μm的微小液滴。实验操作人员是无法意识到有这样大小的颗粒在生成的，并可能吸入或交叉污染工作台面的其他材料。通常该现象容易出现在操作液体或半流体时，例如摇动、倾注、搅拌或将液体滴加到固体表面上或其他种类液体中时，均有可能产生气溶胶。在对感染性液体进行离心、动物操作、琼脂板划线接种，对感染性物质进行匀浆及涡旋振荡、用吸管接种细胞培养瓶等都可能产生感染性气溶胶。研究显示，正确科学地使用生物安全柜能有效减少由于气溶胶暴露所造成的实验室感染以及培养物交叉污染，生物安全柜起到一个过滤和保护的作用。1.生物安全柜的作用到目前为止，生物安全柜的基本设计经历了无数次的优化和修改。每一次的调整主要集中于排风系统的变化，第一是增加了高效空气过滤器，它可以高效率截留直径为0.3μm的颗粒，若颗粒直径更大，截留效率可升高至99.99%，能够有效地截留所有已知传染因子，保证安全柜中只排出不含微生物的空气。第二是将经高效空气过滤器（HighEfficiencyParticleAir，HEPA）过滤的空气输送到工作台面上，一般是按照循环风和排风比例70%∶30%。循环风经过滤后以垂直单向气流方式流向操作区。由于有30%的排风，生物安全柜需源源不断地吸入空气，经前面的吸风槽将室内空气和部分下送气流进行充分混合后进入生物安全柜回风道，使生物安全柜内的污染气溶胶始终不会通过人员的操作窗口向外界扩散，保护操作人员，保证工作台面上的物品不受污染。需要注意，不能用超净工作台代替生物安全柜操作，因为超净工作台产生的是垂直或水平方向的无湍流气流。1.生物安全柜的作用2.生物安全柜的类型（1）一级现在已经很少有了。一级生物安全柜可保护操作人员、环境，但对样品未进行保护。与实验室通风橱气流原理大致相当，区别在于排气口设置有HEPA过滤器。该等级的生物安全柜没有风机，主要借助外接通风管中的风机带动气流。（2）二级生物安全柜目前最常用。相对于一级生物安全柜而言，优势在于“下沉气流”，即HEPA过滤器过滤的垂直层流气流从生物安全柜顶部吹下，可以有效保护样品不受外界尘埃或细菌污染。（3）三级生物安全柜是目前防护等级最高的生物安全柜，应用于四级实验室生物安全等级。该生物安全柜所有气体不会循环，气体全部排放，操作人员利用连接在柜子上的手套完成实验，通过传递窗将样品送入生物安全柜，以免发生污染。通常用于操作高风险的生物实验。（二）实验室生物安全柜使用的注意事项（1）应参考国家标准和相关文献，制定适合实验室的操作标准规范。在操作前，应介绍生物安全柜的使用方法和局限性。需要强调的是，若出现溢出、破损或不良操作，安全柜就不能对实验人员进行有效保护。（3）双臂垂直缓慢进入前面的开口，在生物安全柜中等待大约1min，待安全柜调整完毕后才可对物品进行处理。（2）生物安全柜运行正常时才能使用。（4）生物安全柜在使用中不能打开玻璃观察挡板。（二）实验室生物安全柜使用的注意事项（5）生物安全柜内应尽量少放置器材或标本，不能影响后部压力排风系统的气流循环。尽量避免污染的物品进入洁净区。（7）所有工作必须在工作台面的中后部进行，并能够通过玻璃观察挡板看到。（6）生物安全柜内不能使用明火，否则燃烧产生的热量会干扰气流并可能损坏过滤器。允许使用微型电加热器消毒接种环，但最好使用一次性无菌接种环。（8）尽量减少操作者身后的人员活动。（二）实验室生物安全柜使用的注意事项（9）所有操作应在距前窗10cm以外的工作区进行，不应反复移出和伸进手臂，以免干扰气流。（11）不要使实验记录本、移液管以及其他物品阻挡空气格栅，因为这将干扰气体流动，引起物品的潜在污染和操作者的暴露。（10）在生物安全柜内操作时，不能进行文字工作。（12）工作完成后以及每天下班前，应使用适当的消毒剂对生物安全柜的内壁和台面进行擦拭。（13）等待5min后，关闭前窗、关灯、关风机，可以选择紫外灯照射30min。二、高压灭菌锅实验室用灭菌锅分为手提式高压灭菌锅和立式高压灭菌锅，是利用加压的饱和蒸汽对物品、器械、药液等灭菌的设备，高压灭菌也是对实验材料进行灭菌的最有效和最可靠的方法之一。灭菌锅具有自带蒸汽的双层结构，门体采用自封式密封法。通过加热容器底部的水形成蒸汽，由下而上置换空气并经排气孔排出。当灭菌锅内的空气全部排出，关闭排气孔的阀门，缓慢加热使压力和温度上升到安全阀预置的水平。通常情况下，确保高压灭菌器灭菌效果的最有效组合为：134℃、3min；126℃、10min；121℃、15min；115℃、25min。灭菌器的控制应用了计算机自动控制技术，能精确地控制灭菌温度及时间，直接用数字显示。灭菌结束后停止加热，降温到80℃以下再打开盖子。为保证蒸汽的渗透和空气的有效排出，放置高压灭菌的物品应松散包装，使蒸汽可完全作用到其内容物。（一）高压灭菌锅原理（二）高压灭菌锅使用的注意事项（1）需经专业培训才可使用，并做好日常维护工作，包括门的封闭性、灭菌器柜腔、控制器及仪表等。（3）需要高压灭菌的物品都应放在空气能够排出并具有良好热渗透性的容器中；灭菌器柜腔装载要松散，有利于蒸汽均匀作用于装载物。（2）每次使用都需检查水位。加水不能太少，否则容易烧干或爆裂，最好添加离子水，不易产生水垢。（4）当灭菌器内部加压时，互锁安全装置可以防止门被打开，针对不具备互锁装置的高压灭菌器，应关闭主蒸汽阀并待温度下降到80℃以下时再打开门。同时，需要戴合适的头套和面罩进行防护，以免烫伤。（二）高压灭菌锅使用的注意事项（5）高压灭菌液体时，应采用慢排式设置，不可放气减压，否则取出时液体可能因过热而沸腾，容易冲掉瓶塞而外溢甚至导致容器爆裂。（7）应当注意保证高压灭菌器的安全阀没有被高压灭菌物品中的纸等物品堵塞。（6）灭菌器的排水过滤器（如果有）应当每天拆下清洗。（8）灭菌过程中，人不可离开现场。三、烘箱烘箱是利用电热丝隔层加热使物体干燥的设备。通过数显仪表与温感器的连接来控制温度，采用热风循环送风方式。它适用于比室温高5～300℃范围的烘焙、干燥、热处理等，灵敏度通常为±1℃。烘箱有很多型号，但基本组成结构相似，通常包含箱体、电热系统和自动控温系统3部分。由送风电动机运转带动风轮经由电热器，将热风送至风道后进入烘箱工作室，且将使用后的空气吸入风道再度循环加热运用，如此可有效提高温度均匀性。如果箱门在使用中被开关，可借此送风循环系统迅速恢复操作状态温度值。（一）烘箱原理（二）烘箱使用的注意事项（1）烘箱应安放在室内干燥和水平处，防止振动和腐蚀。（3）当一切准备工作就绪后方可将样品放入烘箱内，然后连接并开启电源，红色指示灯亮表示箱内正在加热。当温度达到所控温度时，红灯熄灭绿灯亮，开始保持恒温。为了防止温控失灵，必须定时查看。（2）要注意安全用电。根据烘箱耗电功率安装足够容量的电源闸刀，选用足够的电源导线，并应有良好的接地线。（4）放入样品时应注意排列不能太密，散热板上不应放置样品，以免影响热气流向上流动。禁止烘焙易燃、易爆、易挥发及有腐蚀性的物品。（二）烘箱使用的注意事项（5）当需要观察工作室内样品情况时，可开启外道箱门，透过玻璃门进行观察，但箱门应尽量少开，以免影响恒温。特别是当烘箱内温度在200℃以上时，开启箱门有可能使玻璃门因骤冷而破裂。（7）工作完毕后应及时切断电源，确保安全。（8）烘箱内外要保持干净。（6）有鼓风的烘箱，在加热和恒温的过程中必须将鼓风机开启，否则会影响工作室温度的均匀性和损坏加热零件。（9）使用时，温度不要超过烘箱的最高使用温度。（10）为防止烫伤，取放样品时要用专门工具。离心机是生物安全实验室不可缺少的设备，应用领域广泛，适用于生物细胞、血清、核酸、病毒、蛋白质等的分离、浓缩、提取等。若操作不当，会对实验人员、周围环境和其他人员的安全造成威胁，因此规范化使用离心机非常重要。一旦离心机出现故障，气溶胶可能会泄漏到开放环境中造成潜在的污染，实验室离心机离心管破裂属于重度气溶胶泄漏。为了预防因使用离心机造成的气溶胶泄漏，除了遵循离心机的正确操作外，可以使用离心机盖和离心机外排风机。四、离心机（一）离心机原理它是根据物质的沉降系数、质量、密度等的不同，用强大的离心力完成物质的分离、浓缩和提纯。（二）离心机使用的注意事项（1）按照操作手册运行离心机，使用前应经过严格的专业技术培训。（3）离心管或盛放离心标本的容器应当由厚制玻璃支撑，最好是塑料制品。（4）离心机必须将其放置在平稳、坚固的地面（台面）上，低于使用者能看到离心腔的平均高度位置。（2）应特别注意离心样品的平衡装载。不仅要保证静平衡，即对称的两管样品等重，还要保证动力平衡。（5）使用中，若听到声音不正常，应立即关机，并进行检查维修，严禁在未停转和开机运转的状态下打开机盖，应让它自行停转。（6）每次使用完毕，应将离心桶保持干燥倒置存放，清除转子、离心桶和离心机腔的污染。五、实验室其他仪器在进行生物实验的过程中，工作人员还会使用到其他常见设备比如电炉、冰箱、振荡器等，使用人员必须经过严格的专业技术培训，熟练掌握仪器的操作过程和注意事项，严格按照说明书和标准操作规范实施，防止意外事故的发生。（1）熟悉高温装置使用方法，进行专业技术操作。做好防护措施，选用容易脱除的服装和干燥手套。若手套潮湿，导热性会增大，同时，手套中的水分汽化后变为水蒸气易使人烫伤。故最好用难吸水的材料做手套。（2）使用高温装置的实验，要求在防火建筑内或配备有防火设施的室内进行，并注意保持室内通风良好。配备最适合的灭火设备，如粉末、泡沫或二氧化碳灭火器等。（3）不得已将高温炉之类高温装置置于耐热性差的实验台上进行实验时，装置与台面之间要保留1cm以上的距离，以防台面着火。（4）高温实验禁止接触水。若高温物体中混入水，水会急剧汽化，发生水蒸气爆炸。高温物质落入水中时，也同样会因产生大量爆炸性的水蒸气而四处飞溅。（5）注意不要用金属棒之类的物品去接触电炉材料，避免触电。有些耐火材料在高温情况下其导电性往往会增强。（一）电炉等高温装置（1）冰箱应放置于水平地面并留有一定的散热空间，不被阳光直射。（2）保持冰箱出水口通畅；非自动除霜冰箱应定期除霜；定期清洁冰箱，清洁时切断电源，用软布蘸水擦拭冰箱内外，必要时可用中性洗涤剂。清理时应戴上厚的橡胶手套并进行面部防护，清理后要对内表面进行消毒。（3）冰箱内禁止存放与本实验室无关的物品。放入冰箱内的所有试剂、样品、质控品等必须密封保存。对内装物品需标记好科学名称、储存时间、储存者姓名等。若未进行标记，应放置高压灭菌锅进行消毒后丢弃。（4）不应安放在有易燃、易爆和有腐蚀性物品的环境中。（5）应当保存一份冻存物品的清单。（二）冰箱冰柜玻璃器皿的使用规范03玻璃器皿是实验室必备工具，是实验室常用常损且不为人所重视的一种易耗品。由于玻璃器皿容易发生破碎，所以在操作时应格外小心，避免割伤、因化学试剂泄漏而引发感染、中毒、起火、爆炸等事故，目前发生最多的事故是割伤和烧伤。为了避免以上事故的出现，要求实验人员充分熟悉玻璃的物理性质。玻璃的导热、导电性差，质地脆弱，易折断，局部存在温差可导致破碎。因此，厚壁玻璃不能加热。对于不能修复的玻璃器皿，应当按照废物处理。一、使用玻璃器皿的注意事项（1）使用玻璃器皿前需仔细检查它是否存在损坏或裂痕。特别是要进行加热和加压的实验操作。（2）烧杯、烧瓶及试管之类仪器因为玻璃壁相对薄，容易破碎，在加热操作时应更加小心。吸滤瓶及洗瓶之类属于厚壁容器，也需要小心加热。（3）烧杯、烧瓶内放入固体物时，要防止固体物撞破容器底部。操作时，要把容器略微倾斜然后将固体物慢慢滑入。（4）打开封闭管或紧密塞着的容器时，因其有内压，往往会发生喷液或爆炸事故，要多加小心。一、使用玻璃器皿的注意事项（5）将温度计或玻璃管向软木塞中插入时，容易发生折断导致割伤。操作时可以使用润滑剂，比如蘸些水或涂上碱液、清甘油等。操作时左手拿住软木塞，右手拿住管子，慢慢旋转进入塞子中。最好用毛巾保护着手，这样相对安全。（6）安瓿瓶在启开时，应充分冷却，然后用毛巾等紧紧裹着，瓶口向前，再用锉刀锉出凹痕，随即可打开。（7）真空玻璃瓶稍有损伤就会发生爆炸性的破裂。所以，不可以把手放入瓶里，也不要将脸靠近真空瓶口。二、玻璃器皿的使用方式（1）可以直接用来加热的玻璃器皿有试管、坩埚、蒸发皿，不能在电炉上直接加热的玻璃器皿有漏斗、量筒、烧杯、烧瓶(圆底烧瓶、平底烧瓶)、锥形瓶等。（2）在使用时不能加热，但可以在不加热的条件下进行化学反应的玻璃器皿有启氏气体发生器、集气瓶、表面皿、干燥管等。（3）在使用时不能加热，也不能在其中进行化学反应的玻璃器皿有胶头滴管、分液漏斗、长颈漏斗、水槽、量筒、酸式滴定管、碱式滴定管、干燥器、试剂瓶、滴瓶、冷凝管等。三、玻璃器皿的清洗实验后的玻璃器皿往往有残留物附着在器皿的内壁。特别是放置时间过久或某些特殊反应后的杂质还不易清理。若器具不清洁干净，将直接影响到实验效果,误导实验人员作出错误的判断和总结，最终实验失败。因此，在准备实验时必须对待用的玻璃器皿进行认真清洗。最常用的洗涤剂是肥皂、肥皂液（特制商品）、洗衣粉、去污粉、洗液、有机溶剂等。一般对玻璃器皿的洗涤可选用市售的合成洗涤剂。若遇到合成洗涤剂也无法清洗的难溶物质，需根据附着物的特征和性质，使用对应的洗涤剂。比如酸性残留物选用氢氧化钠溶液；碱性残留物选用稀盐酸或稀硫酸等进行溶解；既不溶于酸也不溶于碱，但易溶于某些有机溶剂的残留物选用有机溶剂作洗涤剂。比如器皿的内壁沾有油垢，选用热的纯碱溶液进行清洗；久盛高锰酸钾溶液的容器壁上有黑褐色附着物，常选用浓盐酸作洗涤剂。（一）选择合适的洗涤剂对于长久存放附有尘灰或附有易于去除物质的玻璃器皿，如试管、烧杯等，先用清水冲去，再按要求选用合适的洗涤剂刷洗。如用去污粉，将刷子蘸上少量去污粉，转动或上下移动试管刷，用力适当，将器皿内外全刷一遍，再边用水冲边刷洗至肉眼看不见有去污粉时，用自来水洗3～6次，再用蒸馏水冲3次以上。倒置器皿，器壁形成一层均匀的水膜，以挂不住水珠为度，当不成滴水珠，也不成股流下时，即已洗净。用指示剂检查应为中性。对附有难去除附着物的玻璃器皿，在使用合适的洗涤剂使附着物溶解后，去掉洗涤残液，再用试管刷刷洗，然后用自来水冲洗干净，最后用蒸馏水清洗。对某些构造比较精细、复杂的玻璃器皿，比如容量瓶、移液管等，无法用毛刷刷洗，在使用后应立即浸泡于凉水中，勿使沾污物质干涸，然后用流水冲洗，初步除去附着的试剂、蛋白质等物质，晾干后浸泡于铬酸洗液中4～6h或过夜，然后用自来水充分冲洗干净，再用蒸馏水或去离子水漱洗2～3次，置于量器架上自然干燥。（二）玻璃仪器的洗涤方法（三）玻璃器皿的干燥和保管2.烘干急用的玻璃器皿可采用烘干的方法，这也是最常用的方法。用烘箱或烘干机在110～120℃进行干燥。1.自然晾干对于不急用的玻璃器皿可用此方法干燥，但需注意周围环境清洁。3.吹干急用的仪器也可用电吹风吹干。4.用乙醇、甲醇或乙醚干燥若急需使用，可于量器中加入少量无水乙醇或甲醇、乙醚之类的溶剂，慢慢转动使其布满整个容器内壁，然后倒出，再吹干或加负压抽干，即可达到快速干燥的目的。感染性物质的操作与

防护规范04感染性物质，是指含有已知或有理由认为会使动物或人生病甚至死亡的活性微生物的物质，包括细菌、病毒、立克次氏体、寄生虫、真菌、重组体等。在对感染性物质进行操作时，应严格遵循操作规程，注意个人防范。1.避免感染性物质的扩散（1）在微生物接种过程中，为防止接种物洒落，手不能大幅度抖动，接种环应完全封闭且直径在2～3mm最适宜，接种柄长度不超过6cm。（2）接种环的消毒应使用封闭式微型电加热器，可以避免在酒精灯明火加热过程中引起感染性物质爆溅。若条件允许，可使用不需要进行消毒的一次性接种环。（3）废弃标本应放置于防漏的容器中，顶部固定好，使用高压灭菌处理。（4）每一阶段实验操作结束，必须使用合适的消毒剂对实验区域进行清理。2.避免感染性物质的误食以及与皮肤和眼睛的接触（1）在实验室内不能储存食物、吃东西，不能将物品放入嘴里，如铅笔、口香糖等，同样也不能化妆。（2）实验过程中感染性气溶胶或液滴会迅速降落到操作台面和实验员手上，因此应戴好一次性手套。（3）在可能会发生感染性物质喷散的实验中，工作人员应做好防护措施，遮挡住口、鼻、眼等处。3.避免感染性物质的伤口接触（1）通过专业的培训和练习，可防止破损玻璃器皿的割伤、刺伤引起感染。无特殊要求，可以选择塑料制品。（2）用巴斯德塑料吸管代替玻璃吸管。（3）实验中尽量减少使用注射器和针头，如必须使用，应采用锐器安全装置。二、感染性物质的防护方法（1）始终遵循标准防护方法，所有操作均要戴手套，并建议对眼睛和黏膜进行保护（护目镜或面罩）。（3）应当在生物安全柜内打开标本管，用纸或纱布抓住塞子以防止喷溅。（4）尽可能用塑料制品代替玻璃制品。只能用实验室级别（硼硅酸盐）的玻璃，任何破碎或有裂痕的玻璃制品均应丢弃。（2）若需采集血样，应当由受过专业训练的实验人员完成采集病人或动物的血样。用完后废弃针头。二、感染性物质的防护方法（5）用于显微镜观察的感染性物质标本在固定和染色时，不必杀死涂片上的所有微生物和病毒。应使用镊子取拿物品，最后经清除污染和高压灭菌后再丢弃。（7）建议使用次氨酸盐和高级别的消毒剂来清除污染。通常情况下，处理溢出的血液时可使用新鲜配制次氯酸盐（5g/L有效氯），清除表面污染可采用戊二醛。（6）为了避免液滴和气溶胶的扩散，涡旋混合器应采用封闭型。谢谢观看第三章

生物安全实验室消毒

技术规范第一节生物安全实验室消毒管理A第二节生物安全实验室消毒与灭菌B第三节消毒灭菌效力的确认C第四节实验室常用消毒灭菌方法D目录自然界存在广泛的微生物，因此在实验室进行相关微生物操作时，为了防止微生物污染实验室及感染实验人员，掌握消毒与灭菌的基本概念和方法就尤为重要。微生物由蛋白质、核酸、脂类和多糖等有机物质所组成。利用多种物理、化学方法，能够对其有杀灭或抑制作用。常用的消毒灭菌方法包括:物理消毒灭菌法、化学消毒灭菌法。生物安全实验室消毒

管理01一、消毒相关概念消毒：消除或杀灭除芽孢以外的所有病原微生物，使其数量减少至无害程度。灭菌：杀灭或清除全部微生物（包括细菌芽孢），含致病菌的和非致病菌。灭菌剂：能杀灭各种微生物（包括细菌芽孢、真菌孢子），达到灭菌要求的制剂。高效消毒剂：可杀灭各种微生物（包括细菌芽孢）的消毒剂。其作用时间长，可达到灭菌要求者，称为灭菌剂。一、消毒相关概念中效消毒剂：可杀灭各种细菌繁殖体（包括结核杆菌），以及多种病毒、真菌，但不能杀灭细菌芽孢的消毒剂。低效消毒剂：可杀灭细菌繁殖体和亲脂病毒的消毒剂。杀灭时间：用于生物指示物抗力鉴定时，指受试指示物样本经杀菌因子作用后，培养的全部样本均无菌生长的最短作用时间。随时消毒：疫源地内有传染源存在时进行的消毒。一、消毒相关概念终末消毒：传染源离开疫源地后进行的彻底消毒。预防性消毒：对可能受到病原微生物污染的物品和场所进行的消毒。（一）对消毒实验室条件的要求微生物实验室的布局应采取封闭式，建筑应便于清洁、消毒。为避免污染应在相对正压洁净条件下进行，但有时因特殊需要，用致病菌作指示菌时，则应在生物安全柜（负压）内进行。对无菌产品的无菌检查试验，应该在100级洁净度的实验室，或100级层流操作箱中进行检查。（二）对无菌操作的要求（1）试验开始前，应以湿式方法清洁台面和打扫室内地面，然后以紫外线或其他方法对实验室内进行消毒。（2）实验人员进入实验室内应穿戴好衣、帽、鞋，戴好口罩。（3）每吸取一次不同样液应更换无菌吸管,并应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。（4）接种环（针）在接种前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环（针）与杆的连接处，方能再次使用。（5）要求无菌的试剂，如蒸馏水、生理盐水、培养基，都应经灭菌或滤过除菌。（6）在使用所有无菌物品之前都应检查用物是否完整，有无破损。（7）进行移液或接种时，应将试管口和琼脂平板靠近火焰，防止污染。（8）若不慎发生微生物培养物摔碎或其他试验微生物泄漏时，不论是否具有致病性，均应立即对污染及可能波及的区域进行消毒处理，必要时上报。（9）全部试验结束后，常规对室内环境和物品表面进行消毒处理。（三）对实验的要求实验前，应详细阅读产品的相关说明书。了解产品的相关使用方法、用途、适用范围，并检测产品其性质、用途、是否完整可用。依据科学性、准确性、实用性和安全性等原则以求得对该产品全面、准确的评价。科学性是指检测相关项目要方法合理，符合相关规定及说明。准确性是指实验所得数据重复性好、准确可靠，误差小，检测值均在规定范围内。实用性是指检测条件要联系实际，符合实用要求。安全性是指在设计相关用品剂量时，注意效果的同时还应考虑其对人体的安全性，对环境无污染及对物品无损害。生物安全实验室消毒与灭菌02（一）热力灭菌法热力灭菌法是利用热能使微生物中的核酸或蛋白质变性的一种灭菌方法。分为干热灭菌法和湿热灭菌法两种，前者由空气导热，传导较慢；后者由空气和水蒸气导热，传导快，穿透力强。1.干热灭菌法（1）燃烧或焚化。直接点燃或焚烧是一种最彻底的灭菌方法，但破坏性大，仅适用于废弃物品或动物尸体等。（3）干烤。在干烤箱中进行，可选择的灭菌条件为：150℃，2.5h；160℃，2h；170℃，1h。常用于耐高温的玻璃器皿、瓷器等的灭菌。（2）烧灼。直接用火焰灭菌，常用于实验室的接种环、试管口、镊子和剪刀等的灭菌。干热灭菌法是在干燥环境下，用高温杀死细菌和细菌的芽孢的技术。一般80～100℃，1h能使细菌繁殖体被杀死，但160℃，2h才能杀死细菌的芽孢。主要用于不能耐受湿热蒸汽、不能用高压蒸汽灭菌的物品。2.湿热灭菌法（1）煮沸。一般煮沸5min可杀死细菌的繁殖体，煮沸1～2h可杀死细菌的芽孢。主要用于注射器、刀剪和食具等的消毒。（2）高压蒸汽灭菌法。在高压蒸汽灭菌器中进行，是一种灭菌效果最好、应用最广泛的方法，可杀灭包括芽孢在内的一切微生物。常用于普通培养基等实验室器材物品和医用器械的灭菌。湿热灭菌法是用饱和水蒸气、沸水等以高温高压水蒸气为介质使菌体蛋白质变性、核酸降解及损伤细菌的细胞膜而达到灭菌效果。（二）射线杀菌法射线杀菌法是利用射线的特性使微生物的蛋白质发生光解、变性，核酸和酶遭到破坏而致微生物死亡的方法，包括非电离辐射（日光、紫外线等）和电离辐射（a、β、γ和X射线等）。1.紫外线紫外线是一种电磁波，波长为200～300nm（包括日光中的紫外线）的波都具有杀菌作用，其中以与DNA吸收光谱范围相符的260nm波的杀菌力最强。紫外线可杀灭多种病原微生物，包括细菌繁殖体、芽孢和支原体等。但它的穿透力弱，仅能杀灭照射部位的微生物，因此应充分暴露需消毒部位。一般用于实验室内空气消毒，不耐热物品的表面消毒。照射时间一般为30min以上。紫外线灯与被照物体的距离以不超过1.2m为宜。此外紫外线对人体皮肤和眼角膜有一定损伤，因此使用时应离开或注意防护。2.辐射（1）电离辐射有较高的能量和较强的穿透力，作用于微生物的核酸、蛋白质及酶系统，对微生物产生致死效应。用于灭菌的电离辐射线有γ射线，X射线等，其中以60Coγ射线最常用。常用于大量一次性医用制品、生物制品、食物和药品等的灭菌。（2）微波辐射是波长在1～1000nm的超高频电磁波，可使物品中的极性分子发生高速运动并引起互相摩擦、碰撞，使温度迅速升高而达到消毒灭菌的目的，适合液体和固体物料的灭菌，且对固体有干燥作用。（三）过滤除菌法过滤除菌法是用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌除去，以达到无菌的目的。滤菌器含有微小孔径，主要用于血清、毒素、抗生素、药液等不耐热生物制剂及空气的除菌，但不能除去比孔径小的微生物，如病毒、支原体等。实验室常用滤菌器有薄膜滤菌器、陶瓷滤菌器、石棉滤菌器等。二、化学消毒灭菌方法凡是不适用于物理消毒灭菌的物品，都可以选用化学消毒灭菌法，如对患者的皮肤、黏膜、排泄物及周围环境、光学仪器、金属锐器以及某些塑料制品的消毒剂。化学消毒灭菌能使微生物蛋白质凝固变性、酶蛋白失去活性，或抑制微生物的代谢、生长和繁殖。能杀灭传播媒介上的微生物使其达到消毒或灭菌要求的化学制剂称为化学消毒剂。消毒剂按化学成分可分为：含氯消毒剂、烷化剂、过氧化物类消毒剂、醛类消毒剂、醇类消毒剂、含碘消毒剂、酚类消毒剂、双胍类和季铵盐类消毒剂。（一）含氯消毒剂含氯消毒剂能够溶于水，产生的次氯酸分子量很小，容易进入细菌体内，使细菌蛋白快速氧化，从而有效杀灭各种病原微生物。其作用迅速、杀菌广谱、低毒。含氯消毒剂可用于物品的浸泡消毒、污染物的表面擦拭消毒、室内空气的蒸熏消毒、饮用水和污水的消毒、餐具和环境等的消毒。在实验室中，主要用于墙面、地面、物体表面、玻璃器皿及污水等的消毒灭菌。但其有刺激性气味，对金属有腐蚀性，对织物有漂白作用，化学性质不稳定，一般现配现用。（二）烷化剂烷化剂是一类化学性质高度活泼的化合物，可与细胞中的生物大分子中丰富的电子基团发生共价结合，使其丧失活性，达到杀灭微生物的作用。由于它们对人体皮肤、黏膜有刺激和固化作用，并可使人致敏，因此不可用于空气、食具等消毒。一般仅用于医院中医疗器械的消毒或灭菌，且经消毒或灭菌的物品必须用灭菌水将残留的消毒液冲洗干净后才可使用。其中戊二醛属高效消毒剂，具有广谱、低毒、对金属腐蚀性小、受有机物影响小、稳定性好等特点，但对眼睛、皮肤和黏膜有刺激作用，使用时应做好防护，防止溅入眼内或吸入体内。其灭菌浓度为2%（20g/L）以上，适用于医疗器械和耐湿不耐热的精密仪器的消毒与灭菌。灭菌处理一般需要10h以上,经消毒或灭菌的物品必须用灭菌水将残留的消毒液冲洗干净才可使用。（三）醇类醇类消毒剂能够凝固蛋白质，导致微生物死亡，属于中效消毒剂，可杀灭细菌繁殖体，破坏多数亲脂性病毒，但不能杀灭细菌的芽孢。最常用的是乙醇和异丙醇，但醇类消毒剂易挥发，应采用浸泡消毒或反复擦拭以保证其作用时间。乙醇别名酒精，无色、易挥发液体，具有较强的穿透力和杀菌力，使细菌蛋白质变性，对细菌繁殖体、病毒与真菌孢子有杀灭作用，但对细菌的芽孢无效。乙醇使用浓度的最佳范围为70%～75%，浓度低于60%杀菌效果会受到抑制，高于90%会迅速凝固表层大蛋白质，影响穿透性。（四）过氧化物类消毒剂过氧化物类消毒剂具有较强氧化能力，各种微生物对其十分敏感，可将所有微生物杀灭。包括过氧化氢、二氧化氯和卤素等。它们消毒后在物品上不留残余毒性，但其氧化能力强，因此浓度高时可刺激、损害皮肤黏膜，腐蚀物品。且它们的化学性质不稳定，需现用现配，在避光阴凉的地方储存。过氧化氢是一种强氧化剂，水溶液俗称双氧水。具有广谱、高效、无毒、稳定性好的特点，但对金属及织物有腐蚀性，受有机物影响很大，稀释液不稳定。常用3%的溶液清除实验台和生物安全柜、工作台面的污染，冲洗伤口。（五）酚类化合物酚类消毒剂是最早使用的消毒剂之一，它们对细菌繁殖体和有包膜病毒具有活性，但对细菌的芽孢无效，常用于物体表面的消毒。这类消毒剂对水中的钙镁离子敏感，会降低消毒效果，因此建议用蒸馏水或去离子水配制。三氯生是一种高效、安全、广谱抗菌剂，主要对繁殖的细菌有活性，可溶于多种有机溶剂及表面活性剂。其与人体皮肤有很好的相容性，对皮肤无刺激性,因此常广泛应用于消毒洗手液、卫生香皂和卫生洗液等，另外，还广泛用于治疗牙龈炎、牙周炎及口腔溃疡等疾病的疗效牙膏及漱口水中。（六）季铵盐类化合物苯扎溴铵（新洁尔灭）是常用的季铵盐类消毒剂，对多数细菌繁殖体及某些病毒（如流感、疱疹等包膜病毒）有较好的杀灭能力,但对结核菌及真菌的作用效果差，对芽孢只有抑制作用，对肝炎病毒无灭活作用。对皮肤黏膜无刺激，毒性小，稳定性好，用于皮肤黏膜、环境物品的消毒。三、影响消毒灭菌效果的因素（一）消毒剂的性质、浓度与作用时间一般消毒剂的浓度越大，作用时间越长，消毒效果越好。（二）温度与酸碱度消毒剂对微生物的杀灭是个化学反应过程，升高温度，可提高消毒剂的效果。（三）微生物的种类与数量微生物的种类不同，对消毒剂的敏感性也不同。（四）有机物在消毒灭菌的环境中，会有一些有机物如血液、脓液或培养基成分等影响消毒剂的作用效果。消毒灭菌效力的确认03保证实验室生物安全的重要环节之一是消毒灭菌。其效力确认是用物理、化学和微生物学等指标评价消毒灭菌的设备是否运转正常、消毒剂是否有效、方法是否合理及效果是否达标的主要手段。因此工作人员应经过一定的专业培训，熟悉消毒专业设备、掌握消毒灭菌知识及消毒剂性能，选择合理的采样时间，在严格的无菌操作下对消毒与灭菌的效力进行跟踪检测，从而确定选用的消毒灭菌法能否达到预期目的。一、消毒灭菌效力确认时需要考虑的因素在工业生产中消毒剂要按照标准方法进行效力的确认，为了保证消毒灭菌效力确认结果的科学性及准确性应选择适当的试验方法和验证用菌株。在稀释状态下的消毒剂，如与其他物质接触时或暴露于空气中容易发生分解或挥发，从而降低其消毒效力，因此应对其稀释液进行效期确认。对于已知公认的消毒效果的消毒剂来说，所测含量在产品有效期内不得低于企业标准的下限值。并且消毒剂稀释液的有效期确认可测定有效成分含量或用杀菌效力测定方法。消毒剂的效力确认分为实验室实验、现场实验与模拟现场。常用的杀灭试验有：悬液定量杀灭试验、载体喷雾定量杀菌试验、载体浸泡定量杀灭试验等。1.消毒剂消毒效力评价所用指示微生物（1）细菌。（3）病毒。（2）真菌。对于液体消毒剂进行消毒效力评价时，应将消毒剂放置于20℃±2℃水浴中，以测定在使用浓度下能杀灭指示微生物而达到消毒或灭菌所需的最短时间。根据原卫生部颁布的《消毒技术规范》（2002年），在实验中使用的指示微生物包括以下几种。2.灭菌效力确认所用生物指示剂制备生物指示剂所选用的微生物应具备以下特性：（1）菌种的耐受性大于需灭菌物品中可能存在的微生物；（2）无致病性；（3）菌株应稳定，存活期长，易于保存；（4）易于培养。使用生物指示剂时，应按设计放于灭菌设备的不同部位。待灭菌作用时间完成后，在无菌室内将菌片接种于相应的细菌培养基中。与此同时，应设未经灭菌处理的菌片作为对照，将它们分别放置在37℃下培养24h。接种灭菌后菌片的培养基应清亮、无混浊，表示无菌生长；接种未经灭菌处理的对照菌片的培养基应呈混浊状态，表示生物指示剂具有活性。确认灭菌效力时常使用生物指示剂。生物指示剂是一类活的微生物制剂，包含一定数量的一种或多种孢子，可制成多种形式，通常是将一定数量的孢子吸附于惰性载体上，如滤纸片、玻片、不锈钢、塑料制品等，也可直接制备生物指示菌的悬浮液。实验室常用消毒灭菌

方法04对于不同的生物学实验室，尤其是微生物实验室，人员在操作中会涉及一些致病微生物及其感染性生物因子。为了预防感染现象的发生，保护实验室工作人员及保障实验的顺利进行，避免污染环境，进行有效的实验室消毒灭菌就显得尤为重要。下面就实验室消毒灭菌的一般原则和方法进行说明。（一）选择有效的消毒灭菌方法（1）根据物品污染后导致感染的风险高低选择相应的消毒灭菌方法。高危危险性物品，应采用灭菌方法处理；中度危险性物品，应达到中水平消毒以上效果的消毒方法；低度危险性物品，宜采用低水平消毒方法，或做清洁处理。（2）根据物品上污染微生物的种类、数量选择消毒灭菌方法。对受到致病菌芽孢、真菌孢子、分枝杆菌和经血液传播病原体污染的物品，应采用高水平消毒或灭菌；对受到真菌、亲水病毒、螺旋体支原体等病原微生物污染的物品，应采用中水平以上的消毒方法；杀灭被有机物保护的微生物时或消毒物品上微生物污染特别严重时，应加大消毒药剂的使用剂量和（或）延长消毒时间。（二）实验室材料的预清洁灰尘、污物和有机物对消毒效果有一定的影响。因此，在消毒灭菌前，应选用与随后使用的消毒剂相容的清洁剂进行预清洁。但对于被菌（毒）种、生物样本或其他感染性材料污染的器材和物品应先消毒后清洗，使用前再按物品危险性的种类，选择适当的消毒、灭菌方法进行消毒或灭菌处理。（三）事故时及时彻底的消毒措施若不慎发生微生物培养物摔碎或其他实验微生物泄漏事故时，不论是否具有致病性，均应立即对污染及可能波及的区域进行消毒处理。全部实验结束后，根据实验情况，对需要消毒灭菌的实验物品、实验器材和实验环境进行彻底的消毒处理。（四）定期监测消毒灭菌的效果应当使用经卫生行政部门批准的消毒灭菌设备和药品，并按照批准的使用范围和方法在消毒中使用。必须对消毒灭菌效果定期进行随机抽检，如对使用中的化学消毒剂应进行生物和化学监测；对高压蒸汽灭菌和环氧乙烷气体灭菌应进行工艺监测、化学监测和生物监测；紫外线消毒应进行灯管照射强度监测和生物监测。应定期对消毒灭菌物品进行随机抽检，消毒物品不得检出致病性微生物,灭菌物品不得检出任何微生物。（五）做好有效的个人防护在进行实验室及其物品消毒灭菌过程中，操作人员应根据选择的消毒灭菌方法进行有效的个人防护。对于污染诊疗器械、器具和物品的回收、清洗等过程中应预防医务人员职业暴露，处理锐利器械和用具时，应采取有效防护措施，避免或减少利器伤的发生。二、各类物品和环境的消毒灭菌方法二、各类物品和环境的消毒灭菌方法谢谢观看第四章

生物实验室废弃物的

处理第一节实验室生物废弃物的来源及危害A第二节生物危害废弃物的日常管理和处理B目录实验室生物废弃物的

来源及危害01实验室废弃物是指实验室产生和排放的液态、气态、固态废弃物。根据性质可分为化学性废弃物、生物性废弃物、放射性废弃物3类。本章节主要对生物性废弃物进行分析。生物性污染包括生物废弃物污染和生物细菌素污染。在高校中，生物废弃物指实验过程所使用或产生的废弃动物尸体。动物实验产生的动物尸体种类一般包括牛蛙、家兔、小鼠等的残体残渣。在生物性实验过程中，还会产生大量高浓度含有害微生物的培养液、培养基，若未经严格的灭菌处理而直接外排，会造成严重的后果。高传染性生物性污染物特别是含有病原微生物的环境会引起流行性疾病的大规模爆发。基因工程实验室中产生的废液、废气和废渣等“三废”必须经过处理才能排放，特别是含有生物危害的废弃物必须经过消毒后才可丢弃。生物危害废弃物的日常管理和处理02为防止实验室的污染扩散，废弃物要进行合理科学的处理。通常是先分类收集存放再集中处理。在日常实验操作过程中，实验人员应尽可能减少废物量的产生，避免带来多余污染，严格执行管理准则的规定。含有病原体的废液应与化学酸碱废液、溶剂分开；含污染致病菌的固体物料应与普通垃圾分开；玻璃器皿碎片和金属利器之类的废料，应采用消毒或高压灭菌的方法处理；对不能立即现场处理的危害废料必须用密闭容器包装保存。材料类别不同，包装方法不同，一般采用PVC塑料袋，可直接作为外包装，也可作为其他容器的内包装，但必须密闭不漏，不可盛放金属利器和溶液。PVC塑料袋虽可用于特定的废料包装，但不可用于如焚烧处理的部分场合。其他材料如纸板、玻璃、金属板等也可用作包装材料，虽然具有较好的强度，但有一定局限性。传染性废料必须使用专用车辆进行运输，并配有清洗消毒系统，可以有效避免废料滴漏，保障废料包装的完整性。同时，应建立完善的管理责任问责制度，保证废料处理工作的科学性和完整性。日常操作时，废料需及时处理，防止病原体迅速滋生，存放时间越久危害越大。在存放处应减少人员的走动，并配备冷冻系统，建立清洗消毒制度。在废弃物的处理方面，一次性使用的制品如手套、口罩、牙签等使用后应放入污物袋内集中烧毁。可重复利用的玻璃器材，如玻片、吸管、玻瓶等可选择使用1000～3000mg/L有效氯溶液浸泡2～6h，清洗后重新使用，或者丢弃。存放过标本的玻璃、塑料、搪瓷容器可煮沸15min，或者用1000mg/L有效氯漂白粉澄清液浸泡2～6h，消毒后用洗涤剂及流水刷洗、沥干。用于微生物培养的容器，应用高压蒸汽灭菌后再使用。微生物接种培养使用过的琼脂平板应121℃，20～30min高压灭菌，然后趁热将琼脂倒弃处理。（1）一般固体废弃物如无回收利用价值可直接丢弃在垃圾桶内。（3）操作任何有潜在生物危害的废弃物时，必须穿戴手套、口罩和防护服。（2）一般液体废弃物如无回收利用价值并无可燃性挥发物时可直接通过下水道排放。在实验室中，废弃物的管理和处理可归纳为以下几点。（4）所有收集有潜在生物危害的废弃物的容器都应有“生物危害”标志。（6）有潜在生物危害的液体性废弃物，应确保容器无泄漏。（5）所有废弃物塑料袋或容器中盛装的废弃物不应超过总容量的3/4。在实验室中，废弃物的管理和处理可归纳为以下几点。（7）对于有多种成分混合的废弃物，应按危害等级较高者的标准处理。（9）任何高压灭菌后重复使用的玻璃器皿不能事先清洗，任何必要的清洗、修复必须在高压灭菌或消毒后进行。（8）所有有潜在生物危害的废弃物、设备和玻璃器皿等在丢弃前均需消毒。在实验室中，废弃物的管理和处理可归纳为以下几点。谢谢观看第五章

生物安全应急体系与

预案第一节生物实验室突发事件概述A第二节生物实验室突发事件的应急预案B目录生物安全应急体系与预案是提高实验成功率，维护实验仪器设备安全，维护师生人身安全的重要保障，通过培训、训练可以使工作人员熟悉应对意外事故的方法和要求，最大限度地预防和减少突发事件及其造成的损害，保障实验室工作人员的生命与财产安全，维护社会稳定。生物实验室突发事件

概述01一、生物性突发事件的类型与起因病原微生物实验室多以细菌及病毒的鉴定与分类为主，生物性突发事件多发生在该类实验室，对人体和环境的危害较大。生物性突发事件主要有5类：潜在危害性气溶胶的释放；离心机引起的泄漏；意外注射、切割伤或擦伤；潜在危害性物质的意外食入以及感染性或潜在感染性物质的溢出。一、生物性突发事件的类型与起因（1）实验室本身在建筑结构、通风系统以及给排水等方面设计不合理，对实验室人员及周边环境造成污染。（2）生物实验应该分类分级进行。不同病原微生物具有不同危害性，实验操作应在不同级别的实验室完成，比如，通过气溶胶途径传播或者传播途径不明，目前尚无有效的疫苗或治疗方法的致病微生物及其毒素等实验，对人体有高度危险性，应使用四级生物安全防护实验室。（3）工作人员实验过程中未能严格遵守操作规范，或对实验废弃物处理不当等，均可造成微生物污染。二、生物性突发事件实例（一）新加坡的实验室SARS感染事件2003年3月初，新加坡曾流行严重急性呼吸综合征（SARS），至2003年5月31日世界卫生组织宣布取消对新加坡的旅游限制，该国共发生SARS238例，死亡33例。2003年7月全球SARS疫情被控制。2003年9月，新加坡国立大学一名研究生在环境卫生研究院实验室研究西尼罗病毒时，因冠状病毒处理程序不当，与研究的病毒交叉感染，该研究生因发热到新加坡中央医院就诊时被最终确诊为SARS。调查小组的调查结果显示，实验室不够安全，高致病性病原微生物泄漏、丢失或被盗，将发生高致病性病原微生物相关感染并可能造成病例扩散或死亡。（一）新加坡的实验室SARS感染事件1.原因新加坡环境部长林瑞生认为，有3个原因导致了感染事件的发生。第一，新加坡仅有中央医院、国防科技研究院和环境卫生研究院设有三级（BSL3）实验室，而环境卫生研究院实验室很多方面问题严重，不符合三级实验室安全标准，需改善病毒样本的储存系统、消毒措施、进出实验室的安保系统等，实际上只具有二级实验室的生物安全设备，却在进行危险性更高的病毒研究。第二，研究院同一时间处理多种不同的活性病毒研究，增加了生物安全方面的复杂程度。因处理程序不当，冠状病毒与这名研究生研究的西尼罗病毒交叉感染。第三，研究院的设备公开共享，其他研究机构的科研人员也可利用，而每一个科研人员的安全意识不同。2.补救措施感染SARS病毒后，新加坡已决定暂时关闭环境卫生研究院实验室，并销毁库存的所有病毒样本。国家领导人商议制定相关法规，确保实验室都符合国际生物安全标准。二、生物性突发事件实例（二）国内的实验室感染事件2004年4月安徽、北京先后发现新的SARS病例，经证实分别是来自于在中国疾病预防控制所实验室受到SARS感染的两名工作人员。（二）国内的实验室感染事件1.原因中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所腹泻病毒室跨专业从事非典病毒研究，采用未经论证和效果验证的非典病毒灭活方法，在不符合防护要求的普通实验室内操作非典感染材料，发现人员健康异常情况未及时上报。原卫生部、科技部组成联合调查组调查认定，这次非典疫情源于实验室内感染，是一起实验室污染和工作人员感染的重大责任事故，主要是实验室安全管理不善，规章制度执行不严，技术人员操作违规，安全措施防范不力等原因所致。2.补救措施证实感染非典后，原卫生部紧急封锁了该所，划出警戒线，避免其他人接近，并在邻近的社区服务中心设立临时指挥中心，将病毒病预防控制所内200名工作人员紧急撤离，前往小汤山医院进行全面隔离。原卫生部立即向国务院做了汇报，并召开全国卫生系统电视电话会议，向全国通报两地疫情情况，对全国SARS防治工作进行全面部署。要求各地立即恢复SARS零报告制度，加强发热病例的监测，全面上报近期不明原因肺炎病例，切实做好医务人员防护，严格实验室安全管理。原卫生部召开中国疾病预防控制中心干部职工大会，通报非典疫情发生原因和责任追究情况。党中央领导人强调，要认真吸取教训，提高对生物安全重要性的认识，采取有效措施，切实加强实验室生物安全管理和疾病预防控制工作。认真查找自身存在的安全隐患，举一反三，及时整改，加强监督管理，切实改进工作。广大卫生科研人员要认真学习、自觉遵守实验室生物安全管理规定，严格按照操作规程和技术规范开展工作，既要发扬勇于探索的奉献精神，又要有求真务实的科学态度，提高安全意识和自我防护能力。生物实验室突发事件的应急预案02根据《中华人民共和国安全生产法》《突发公共卫生事件应急条例》《病原微生物实验室生物安全管理条例》等法律法规，结合学校（或公司）实际情况，制定预案，能有效预防、及时发现、有效控制、最大限度地减轻突发事件对实验室人员造成的危害，指导和规范生物安全工作，保障实验室工作人员身体健康、安全，降低突发事件的危害程度。应针对本实验室的危险实验项目和涉及安全问题的注意事项等制定一套行之有效的实验室突发事件的应急预案，预案中对可能发生或未知的传染病、食物中毒、放射性、化学性等突发事件做出合理的安排，包括应急小组的成立、专业技术人才资源的配置、物资的准备、设施的配备、仪器设备的核查、样品采集的准备、实验室环境的检查与保持、生物安全防护、标准操作章程以及医学救援系统和网络的建立等。应急预案应明确、详细、可操作性强，必须使每位实验室人员理解、获取，并通过建立健全应急机制，提高处置突发事件的能力。一、生物实验室突发事件的预防及预警机制（一）应急组织体系的设立应对实验室突发事件应成立实验室突发事件应急工作小组。应急处置工作中各类人员各司其职，主要包括突发事件应急指挥机构、专家技术委员会和专业技术机构等，负责组织、协调实验室突发事件的日常管理工作和应急处理工作，确保实验室突发事件发生前的人员值班、应对处理过程和事后重建中的人员在岗与战斗力。（二）实验室人员培训1.加强实验室安全知识教育加强实验室工作人员安全知识的教育，强化责任意识，增强实验室安全意识和自救互救能力。每位实验室人员应明确实验室突发事件处理的重要性并与日常工作的常态区别对待，要有招之即来、来之能战的思想。同时应建立相应的奖惩措施，确保实验室安全责任到人。2.建设实验室专业队伍实验室专业队伍建设是一项长期、经常性的工作。应通过学习班、进修和学术交流等多种渠道，对实验室工作人员进行专业理论知识和实验操作技能等相关专业知识的培训，及时更新实验室人员的专业信息，提高业务素质。（二）实验室人员培训3.开展实验室安全知识的培训实验室生物安全知识的培训对于从事实验室工作的人员十分必要，应开展有针对性的实验室生物安全培训，落实好各项防范措施，不留安全隐患。4.拓展实验室突发事件应急演练应有针对性地开展实验室突发事件的应急处理演练，检验信息渠道是否通畅、应急准备是否充分等。应及时发现问题、修订预案，提高应急反应能力。突发事件发生后的应急、救助手段应确保能够做到及时、到位和有效。（三）仪器设备的更新配备与核查1.仪器设备的管理对实验室的重要实验仪器和设备应有严格的操作规程。同时，坚持巡回检查制度，尤其是对各类消防器材和设施的有效状态的检查。若发现问题和隐患，工作人员应及时向有关部门报告，并做及时处理。2.紧跟时代，加快仪器设备的更新升级科技不断进步，新的仪器设备不断出现，如PCR仪、全自动细菌分析仪、VIDAS全自动荧光酶标仪等。先进的仪器设备，既有助于确保优质的实验效能，又能提高突发事件的快速检验效率，有条件的单位应及时更新并配备相应的仪器设备。3.完善仪器设备核查制度对仪器设备进行定期、不定期的核查，确保其工作状态始终保持良好。当突发公共卫生事件发生时，有效地避免仪器设备不能正常运转的情况。（四）危险生物、化学和放射性材料的管理1.建立实验室物品的档案体系应将易引起感染、中毒、辐射等物品分类归档，类别包括此类物品的种类及其理化性质、中毒表现与临床救治方法、危险源方位、储存数量和状况，以及特殊状况下可能影响的范围等。2.加强实验室安全管理制度严格遵守危险生物、化学和放射性材料的管理制度，设置实验室的重点安全区域。加大对危险生物，剧毒、易燃、易爆化学试剂，放射源，高压气体钢瓶和放射性材料等的管理力度。设置专用保存场所，使用明显的警示标志，分配专人负责，并增加可靠的防盗设施等。（五）实验室环境的监测1.重视实验室环境监测，以提高实验结果准确性实验中的一些很小的改变就会对检测结果产生巨大影响，所以应加强实验室环境监测力度，以提高实验结果准确性。比如，夜间操作时若没有合适的灯光，结果很难准确观察。室温也不可忽视，如凝集试验，夏季温度过高，水分快速蒸发，杂菌会过度生长，而冬季过冷则会影响反应速度与结果。夏季无纱窗时，培养物会招来昆虫造成污染而引发实验室生物安全问题。（五）实验室环境的监测2.提高重视程度，加大实验室设施的资金投入应积极向各级主管部门汇报工作反映情况，引起相关部门领导重视。优质的生物学实验室应具备良好的防人源污染、防尘源污染、防实验动物和实验材料自身污染的设施，充足的光源以及适宜的室温环境等。（一）专家库和应急技术队伍的建立应成立突发事件应急处理小组，建立一支专门处理实验室突发事件的人员队伍，明确职责。在专业技术人才配置方面，要有计划、多途径地吸收不同层次、专业的技术人才。要制定疫情和突发事件人员值班制度，保持通信线路的畅通，确保应急小组成员在接到通知后，能及时赶回单位或调查地点，立即开展工作。二、生物实验室突发事件的应急准备（二）采样物品、消耗性材料和防护装备的准备1.准备突发事件采样箱一般包括采样工具、采样物资、采样培养基和防护装备等，采样物品应在灭菌有效期内使用，培养基应放置专用冰箱并且做好标记，要做到经常检查、及时更换。一般培养基每3个月更换1次，检查时一旦发现有混浊沉淀，则应及时更换，并且要记录好每次更换的时间。3.准备防护药品及装备应准备常用防护化学药品，如75%乙醇、碘伏（用于外伤的清理消毒）、0.1%硫酸铜溶液和1∶5000的高锰酸钾（用于中毒后的催吐和洗胃）、0.1%硼酸和2%小苏打等。及防护装备，如防护服、防护眼罩、防护手套等防护用品和紧急洗眼喷淋装置等。2.消耗性材料定期质控准备各种灭菌物品、培养基、试剂、诊断血清和标准菌株等消耗性材料，并做好这些材料的定期质控。（三）实验室检测方法的建立实验室检测方法的建立要求快速、准确。同一传染病在不同时期的检测方法往往不一致，如伤寒，一般早期采用血培养和LPSPHA（间接血凝法）检测较为理想，而后期肥达试验的检测结果更为可靠。在实践工作中，由于种种原因常使某些疫情报告延迟，造成同一疫点中新发病人与恢复期病人同时存在，应采用不同的方法进行检测。在突发事件中，过长的检验时间将会增加实验室压力。为尽快出具检验报告，实验室往往采用一些快速检验方法。但相对于经典的检验方法，快速检验方法的准确性较低，所以可采用不同的检验方法加以验证。初步筛选时采用高灵敏度的方法，当出现可疑结果时再用高特异性的方法进行确认，这样就可大大提高结果的准确性。（四）经费的保障为满足实验室突发事件应急储备所需物质的购置和维护、经常性支出（包括开展专项储备技术研究和技能培训等）的需求，每年应设立专项资金，同时，应储备适量的应急处理和医学救治等所需的应急经费，以确保应急行动能够及时、快速启动。生物学实验室是发生实验室工作人员职业性感染的主要场所，实验室突发事件应急处理的原则为“先救治、后处理；先制止、后教育；先处理、后报告”，并应根据相应实验室的特殊性要求进行应对处理。这样才能切实有效地降低和控制突发事件所造成的危害。三、病原微生物污染的应急处置措施（一）潜在危害性气溶胶的释放1.原因（一）潜在危害性气溶胶的释放2.处理措施目前国际上通用的处理实验室危害性气溶胶的方法是负压过滤隔离技术。其基本原理是通过实验室通风系统在室内产生梯度负压围场，使室内、生物安全柜、污水罐排气口等设备内的气体在排出前经高效空气过滤器过滤净化处理，可以有效防止实验室空气中感染性粒子向室外逃逸，不向外界泄漏任何一个生物因子，确保排出空气中的病原微生物达到“零排放”。高效空气过滤器过滤除菌也是处理实验室废气的行之有效的方法。此外，实验室人员普遍应用熏蒸、喷雾等化学消毒法作为室内空气消毒的补充手段。同时，实验室负责人应对处理过程进行指导和监督、检查处理效果、记录事件经过和处理过程。（二）离心机引起的泄漏1.原因离心机与实验室生物安全密切相关，操作不当、机械故障以及试管破碎等都可产生感染。为了防止离心机引起泄漏，在生物学实验室中的离心机必须实行安全操作，应做到以下几点：（1）使用前检查离心管是否破损。（2）使用配套并且平衡等重的离心管。（3）离心前要将离心管盖紧、密封，尽可能使用专门的安全离心机。（4）要确保转头在离心轴上锁好。（5）盖好离心机盖后再离心。（6）等离心机完全停下来后再开盖。（7）每次离心后无论有无破碎均要进行消毒。（二）离心机引起的泄漏2.处理措施当出现因离心机引起的实验室泄漏事件后，应立即关闭实验室，用消毒液喷雾和紫外线照射污染的区域，24h后再进行终末消毒。实验室负责人除需立即采取应对措施外，应及时向上级部门报告，并记录事件经过和处理过程。（三）意外注射、切割伤或擦伤1.原因不恰当的操作或意外发生时，可能发生意外注射、切割伤或擦伤。如抽血过程中，将血样标本注入试管或拔出针头等情况下，容易导致意外注射。直接接触时也可能发生意外注射、切割伤或擦伤，比如动物实验中，实验动物突然改变体位时，或其他实验室人员突然移动时。收拾手术污物和分离输液器时，也可能发生意外事故。2.处理措施当从事强毒毒株或细胞培养物相关实验的实验室人员在操作过程中，发生培养物或污染材料溅落在身体表面、意外接种等情况时，应让伤员立即停止工作，用消毒液清洗未破溃的皮肤表面、伤口，以碘酒、酒精消毒，眼睛则用无菌生理盐水冲洗。（四）潜在危害性物质的意外食入1.原因实验室人员错将潜在危害性物质当成食品，或是食入被潜在危害性物质污染的食品，或是在实验操作中潜在危害性物质溅入口中等。2.处理措施当实验