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第六节反映心脏和肌肉损伤的酶的检验反映心肌和肌肉损伤的酶包括:肌酸激

酶及其同工酶、乳酸脱氢酶及其同工酶、

α-羟丁酸脱氢酶、门冬氨酸氨基移换酶

等,心肌和骨骼肌中含有这些酶,当肌

肉组织损伤时,它们释放入血,使血液

中相应的酶活性升高。这里介绍血清肌

酸激酶和乳酸脱氢酶的测定。一、血清肌酸激酶测定肌酸激酶(creatinekinase,CK)是能量代谢过程中重要的酶类,又名肌酸磷酸激酶(CPK),主要功能是可逆的催化肌酸和ATP生成磷酸肌酸和ADP的反应。肌酸激酶在骨骼肌和心肌中含量最高,其次是脑和平滑肌。正常动物血清中CK含量甚微,当上述组织受损时,CK进入血液,血清中含量明显升高。一、血清肌酸激酶测定CK是一组具有三种同功酶的二聚体酶,CK1(CK-BB)存在于脑、外周神经、脑脊液及肠等内;CK2(CK-MB)主要存在于心肌,骨骼肌内也有少量;CK3(CK-MM)存在于骨骼肌和心肌中,肌肉损伤、各种类型肌萎缩时,血清CK活性均可增高,损伤后6~12小时,即可达到最高,病毒性心肌炎、急性心肌梗塞时CK也明显升高,且较AST、LDH特异性高。血浆CK半衰期较短,若不存在持续性损伤,通常2~4天就可恢复正常,而AST对肌肉损伤的反应较慢,但

升高后持续的时间稍长,因而对诊断及预后各具价值。动物血清肌酸激酶活性参考值(U/L)动物参考值动物参考值牛4.8~12.1山羊0.8~8.9马2.4~23.4犬1.15~28.4猪2.4~22.5猫7.2~28.2绵羊8.1~12.9一、血清肌酸激酶测定【临床意义】牛、羊和猪维生素E和硒缺乏所引起的肌肉营养性疾病、母牛卧地不起综合征(The

Down

Cow

Syndrome)、马麻痹性肌红蛋白尿症等疾病时血清CK均明显升高。此外,动物剧烈运动、手术,肌肉注射冬眠灵和抗菌素等也能引起CK活性升高。二、血清乳酸脱氢酶测定乳酸脱氢酶(lactate

dehydrogenase,

LDH)广泛存在于体内各组织中,其中以心肌、骨骼肌、肾脏、肝脏、红细胞等组织中含量较高,组织中酶活力比血清高约1000倍,所以即使少量组织坏死释放的酶也能使血清中LDH升高。LDH是糖酵解途径中的一种重要酶,它可逆地催化乳酸转变为丙酮酸的氧化反应。二、血清乳酸脱氢酶测定LDH有多种同工酶,目前已被证实血清有五种乳酸脱氢酶同工酶,每一种同工酶系由一种或两种不同的亚单体(亚基)构成的四聚体。富含于骨骼肌中的亚单体称为M(Muscle),富含于心肌中的亚单体称为“H”(Heart)。

正常人血清内含LDHl最多,其次是LDH2、LDH3;LDH4及LDH5含量很少。LDH1和LDH2主要来自心肌、红细胞、白细胞及肾脏

等;LDH4和LDH5主要来自肝脏及骨胳肌等;

LDH3主要存在于肝脏、脾脏、胰腺、白细胞、甲状腺、肾上腺及淋巴结等。动物血清乳酸脱氢酶活性参考值(U/L)动物参考值动物参考值牛692~1445(1061±222)山羊123~392(281±71)马162~412(252±63)犬45~233(93±50)猪380~635(499±75)猫63~273(137±59)绵羊238~440(352±59)二、LDH

【临床意义】血清LDH活性升高,常见于心肌损伤,骨骼肌变性、损伤及营养不良,维生素E及Se缺乏,肝脏疾病,恶性肿瘤,溶血性疾病,肾脏疾病等。LDH同工酶活性升高见于:(1)急性心肌梗塞时血清LDH1及LDH2均增加,且LDH2/LDH1比值低于1。

(2)急性肝炎早期LDH5升高,且常在黄疸出现之前已开始升高;慢性肝炎可持续升高;肝硬化、肝癌、骨胳肌损伤、手术后等LDH5亦可升高。(3)阻塞性黄疸时LDH4与LDH5均升高,但以LDH4升高较多见。(4)心肌炎、溶血性贫血等LDH1可升高。第七节有关其他酶的检测一、血清淀粉酶测定

淀粉酶(amylase,AMS)为水解酶,主要水解淀粉、糊精和糖原。来源于胰腺的为淀粉酶同工酶P(P型),来源于腮腺的为淀粉酶同工酶S(S型)。人几乎所有组织和体液中都含有

AMS。动物除猪以外,唾液中不含AMS。犬肝脏也不含AMS,胰腺和十二指肠的含量是其他组织的6倍。AMS由肾排泄,通过测定淀粉被水解后所产生还原糖的含量而推测淀粉酶的活性。血清淀粉酶参考值(u/L)犬猫马牛绵羊猪270~1462371~119347~18841~98140~27044~88AMS【临床意义】胰腺疾病时AMS呈现升高,急性胰腺炎一般于发病后6~12h血清AMS开始升高,可比正常增高3~4倍,持续3~5天后恢复正常;尿液AMS于发病后12~24h开始升高,持续3~10天恢复正常。慢性胰腺炎急性发作、胰腺癌、胰腺囊肿、胰

管阻塞等也见AMS升高。另外,肾脏疾病(如原发性肾衰竭)、肠扭转或肠阻塞、腹痛等均

可引起血清AMS活性升高。胰腺组织坏死、肝组织严重损伤、甲状腺功能亢进和妊娠毒血症等,血清AMS活性降低。二、血清胆碱酯酶测定胆碱酯酶(cholinesterase,ChE)是一类催化酰基胆碱水解的酶类,体内胆碱酯酶分两类,一类是乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AchE),又称真性胆碱酯酶,分布于红细胞、神经灰质、交感神经结和运动终板中;另一类是丁酰胆碱

酯酶(butyrylcholinesterase,BuChE),分布于肝

脏、腺体及血清中。与其它酶活力增高反映病

理异常的情况相反,ChE测定的临床意义在于

酶活力降低。动物血清胆碱脂酶活性参考值(U/L)动物参考值动物参考值牛1270~2430山羊270马450~790犬270猪930猫540绵羊640ChE【临床意义】肝脏合成BuChE,由于该酶在肝脏合成后立即释放到血浆中,血浆BuChE的浓度通常能反映其合成速率。肝实质细胞损害时此酶活力降低,特别重症肝炎病例血清ChE几乎均降低,且降低程度往往与病情的严重程度有关。肝硬化失代偿期该酶活力也下降,肝外阻塞性黄疸病例酶活力一般呈正常。有机磷杀虫剂是AChE和BuChE的强烈抑制剂,在急性中毒初期,全血胆碱酯酶极度降低,对中毒诊断和预后判断有重要意义。急性中毒的恢复期和慢性中毒时,临床表现和血液ChE活力不一定成平行关系,但仍有一定参考价值。有急性接触史,而无明显临床症状者,常降至正常均值的70%。急性轻度中毒的全血胆碱酯酶活性一般在50%~70%;急性中度中毒一般在30%~50%;急性重度中毒一般在30%以下。中毒者经解磷定、氯磷定等有效治疗后酶活性可上升。三、超氧化物歧化酶测定超氧化物歧化酶(superoxidedismutases.SOD),广泛分布于机体的组织细胞内,是机体内清除自由基的重要抗氧化酶之一。主要有铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)、锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)及铁超氧化物歧化酶(Fe—SOD)三种同功酶。它们的活力和含量,反映了机体清除氧自由基的能力,是催化超氧化物阴离子(O2-)发生歧化反应,从而清除O2-的毒性作用。【参考值】目前缺乏各种动物的参考值。【临床意义】兽医临床上测定SOD主要反映机体的抗氧化能力和作为判

断体内Cu、Zn、Mn营养状况的指标之一。资料表明,动物铜缺乏时SOD活性的降低比血浆和肝脏铜水平的降低更慢,且与出现缺铜症状更接近。SOD活性2~5IU/mgHb为铜临界缺乏,2IU/mgHb以下为功能性缺乏。四、全血谷胱甘肽过氧化物酶测定谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione

peroxidase,GSH-Px)是哺乳动物体内第一个被公认的含硒酶,硒含量为4mol

Se/mol酶,这种酶广泛存在于哺乳动物的红细胞、肝脏、肺脏、心脏、肾脏、脑及其他组织中,主要功能是催化还原型谷胱甘肽(GSH)还原体内有害的过氧化物(ROOH),包括过氧化氢

(H2O2),使之转变为无害的羟基化合物,从而保护生物膜免受过氧化物的氧化损伤。硒在GSH-Px催化作用中具有关键作用,可以说硒是该酶的活性中心。动物硒缺乏时,该酶的活性降低,机体的抗氧化能力下降。四、全血谷胱甘肽过氧化物酶测定【参考值】常用DTNB显色法测定,动物红细

胞GSH-Px活性参考值(μmol/g.Hb):牛19.0~36.0,羊60~180,猪100~200,马30~150。【临床意义】对大鼠、乳牛、绵羊和鸡的研究表明,红细胞GSH-Px活性与血液和组织硒浓度呈显著的正相关关系,可反映饲料中硒的营养水平,认为红细胞GSH-Px活性是检测牛、羊硒营养水平的良好指标,可作为诊断动物硒缺乏的依据之一。另外,GSH-Px活性也是机体硒吸收和各种途径补硒反应的一个敏感指标。因GSH-Px具有抗组织过氧化作用,应激状态下GSH-Px活性也会改变。五、血清铜氧化酶测定铜氧化酶又称铜蓝蛋白(ceruloplasmin,Cp),是人和动物血浆中的铜蛋白,具有运输铜的功能。每分子铜蓝蛋白含6个铜离子,具有氧化酶的活性。血浆铜主要以铜蓝蛋白的形式存在,铜可促进胃肠道铁的吸收,铁吸收后转变成Fe3+并形成铁蛋白而储存起来,还原为Fe2+后释放到血浆中,进入血流中的铁必须再氧化成Fe3+与铁传递蛋白相结合才能向骨髓等造血部位转移,这一反应受血浆铜蓝蛋白的调控。因此,缺铜后细胞可用的铁减少,网织细胞中血红蛋白的合成受到影响而发生贫血。五、血清铜氧化酶测定【参考值】常用比色法测定,牛和绵羊参考值分别为45~100mg/L和120~200mg/L。【临床意义】铜蓝蛋白含量的测定是动物机体铜营养状况的良好指标。铜蓝蛋白与血浆铜水平之间具有明显的相关性。一般认为,血浆铜蓝蛋白含量在铜缺乏症状出现之前已明显下降。第八节维生素检验维生素是维持动物生命和正常生长所必需的营养物质,在机体代谢过程中起重要作用。根据维生素的溶解性将其分为脂溶性维生素和水溶性维生素两大类。一般认为,植物饲料中含有所有的维生素,精饲料含有较多的B族维生素,日粮中维生素的含量受植物的部位(如根、茎、叶、籽实等)、收获期、饲料的加工调制方法以及贮藏等的影响,且大多数维生素容易被氧化、破坏。虽然动物对维生素营养的需要量很少,但日粮中长期缺乏或动物采食量降低及消化、吸收和代谢障碍,均可发生维生素缺乏症。第八节维生素检验脂溶性维生素除维生素K可由消化道的微生物合成外,其余均需由饲料供给。反刍动物:瘤胃微生物可合成足够的B族维生素。反刍动物出生后从8日龄开始,瘤胃微生物便逐渐发育,到2月龄时可合成相当数量的B族维生素,通过胃肠道的消化吸收可有效地被宿主利用,天然饲料中存在的维生素加上瘤胃微生物合成的维生素完全可满足其对B族维生素的需要量。然而,在特定条件下(如应激、高产),反刍动物日粮中也需要添加维生素,特别是硫胺素和烟酸。第八节维生素检验单胃动物:肠道也可合成大量的B族维生素,

但主要在后段肠道合成,吸收较少,对维生素

的依赖性较强。马属动物由于大肠体积大,虽

然吸收较差,也可满足绝大部分的需要。家兔、大鼠等动物有食粪的习惯,可更多利用肠道合

成的维生素。维生素的检测对了解动物维生素

营养状况和维生素缺乏症的诊断具有重要意义。猫对B族维生素的需要量是一般单胃动物7倍,很容易发生B族维生素缺乏症。为什么?第八节维生素检验维生素测定方法有生物法、微生物法、物理和化学法。生物法测定维生素,是一切维生素研究的基础,但须在合适的动物身上进行实验,

耗费较大。微生物法适用于B族维生素,是观察某种细菌、酵母或霉菌在特殊制备的培养基中

繁殖的情况。这类方法需要特定的菌种和设备,只适用于营养学的研究工作。物理和化学法测

定维生素,是利用维生素的物理和化学特性,

如受紫外线照射后呈现特殊的吸收光谱,或在

溶液系统中有特殊的分配系数,或有特殊氧化

还原电势,或带有特殊化学基团,能进行反应,产生颜色或荧光。所用方法有分光光度法、比色法、荧光法、极谱法、同位素法等。一般实验室中最常用的是比色法和荧光法。一、血清β-胡萝卜素和维生素A的测定胡萝卜素主要存在于植物中,动物不能合成,但能利用。

β-胡萝卜素能在肠壁和肝中氧化生成维生素A醛,然后

还原变成维生素A1。胡萝卜素又称为维生素A原。胡萝卜素有α、β、γ等异构体,生理上比较重要的是β-胡萝卜素。β-胡萝卜素被吸收后,只有一半可在体内转变成维生素Al,以供利用。故1个国际单位β-胡萝卜素等于

0.6μg,而其生物活性只相当于维生素Al醇0.3μg。维生素A只在动物体内出现,植物中仅有胡萝卜素,而

不含维生素A。维生素A有A1和A2两种,A2

的生理活

性只及A1的40%,一般所谓维生素A是指维生素A1而言。由于体内维生素A和胡萝卜素共同存在,测定时两者应同时测定。维生素A常用的测定方法有比色法、荧光法和高效液相色谱法,β-胡萝卜素常用比色法测定。一、血清β-胡萝卜素和维生素A的测定【临床意义】

1.胡萝卜素:血中胡萝卜素水平因饲料不同而有很大差异,一般认为含量在1.5μg/ml为最佳水平,0.09μg/ml或以下时即可出现维生素

A缺乏症状。若日粮中缺乏胡萝卜素,血中胡萝卜素几周后即消失;反之,若大量摄入胡萝卜素,血清胡萝卜素可达5μg/ml,称为胡萝卜素血症,诊断黄疸时要注意鉴别。肝脏胡萝卜素正常含量为4μg/g以上,0.5μg/g为临界水平。一、血清β-胡萝卜素和维生素A的测定

2.维生素A:血清中维生素A浓度是动物维生素A营养状况的良好指标,正常值为0.30~0.65μg/ml,低于0.10μg/ml表示缺乏,0.10~0.19μg/ml

为临界值。胰腺功能减退时,脂类的吸收不良,维生素A浓度常低于正常。血清中维生素A浓度不能反映肝内储备量,仅可作为近期维生素摄入情况的参考。二、维生素B1(硫胺素)的测定维生素B1又称硫胺素,广泛存在于植物性饲料中,谷物、米糠、麦麸、青绿饲料及酵母中含量丰富。反刍动物的瘤胃和其他动物的大肠微生物能合成硫胺素,但除猪以外,动物体内不能贮存,必须经常由日粮供给。维生素B1是体内多种酶系统的辅酶,能促进氧化过程,调节糖代谢。对促进生长发育,维持正常代谢,保持神经和消化机能的正常具有重要意义。血清中硫胺素含量很少,血液中主要集中在红细胞中,临床上一般测定尿液中的含量。硫胺素的测定方法有重氮芳香胺比色法和噻嘧色素荧光法。比色法灵敏度差,故多用荧光法。【临床意义】尿中硫胺素排出量受饮食中硫胺素摄入量而定,亦受测定方法的影响。每天尿中硫胺素排出量为50~500μg。有人认为每天排出低于90μg即为摄入不足的表现。诊断硫胺素缺乏的较好方法是进行饱和试验。基本原理是口服或注射一定量的硫胺素,如受试对象缺乏硫胺素,组织中硫胺素储备很少,则摄入的硫胺素大部分将被组织吸收贮存,只有极少量通过尿液排出体外。反之,组织中硫胺素储备充足,则输入的硫胺素大部分将排出体外。一般在口服一定量硫胺素后,收集4h或24h尿液,并测定其中硫胺素含量。尿液中硫胺素的多少可以表示组织中的饱和程度,以及机体的营养状况。此种饱和试验也适用于核黄素、菸酸(或菸酰胺)以及抗坏血酸等水溶性维生素,是诊断营养缺乏的较好方法。进行水溶性维生素饱和试验时,往往要收集4h或24h尿液,可用棕色瓶,内加1.75mol/L硫酸20ml或相当于尿量2%的冰醋酸为保藏剂,亦可按每100ml尿液加草酸400

mg。硫胺饱和试验的具体做法有很多种。一般多用口服5mg硫胺素,24

h尿液中排泄20%即为硫胺素营养正常。三、维生素B2(核黄素)的测定维生素B2又称核黄素,广泛存在于酵母、干草、麦类、大豆及青绿饲料中,胃肠道微生物能大量合成,特别是反刍动物不需在饲料中添加。食物中的核黄素主要以非共价键形式与黄素酶蛋白结合,在胃酸的作用下即可游离出来,而少部分以共价键形式存在,形成黄素酶,后者在蛋白水解酶的作用下游离出黄素单核苷酸(FMN)和黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)。FAD在FAD焦磷酸酶的作用下生成FMN,FMN又在碱性磷酸酶(这两种酶均存在于肠道黏膜刷状缘上皮细胞中)作用下生成核黄素而被吸收。核黄素主要以辅酶(特别是FAD)形式存在于动物体内,参与一系列重要的生化反应,催化蛋白质、脂肪、糖的代谢,促进氧化还原过程,并对中枢神经系统营养、毛细血管的机能活动具有重要影响。此外,核黄素在体内还具有促进维生素C的生物合成、维持红细胞的正常功能和寿命、参与生物膜的抗氧化作用、影响体内贮存铁的利用等生物学功能。因此,维生素B2缺乏时引起一系列的病理变化。尿中排出的核黄素大部分是游离形式,但有时核苷酸形式可达50%,随摄入情况而定。生物样品中一般都含有三种黄素,即核黄素、FMN和FAD,含量都低;除因特别需要而详细分离外,一般只测定黄素总量。因此,临床上主要以荧光法测定尿液中核黄素的含量。【临床意义】尿中核黄素排出量受膳食因素影响很大,一般膳食每天摄入核黄素1~2 mg时,尿中排出

0.1

0.4 mg

占摄入的

10

~20%)。最好进行核黄素“饱和”试验,其诊断意义较大。对健康人而言,口服核黄素3~5 mg,24h内至少排出20%,若低于20%,可能有核黄素缺乏症。维生素B12测定(DeterminationVitamin

B12【同义词】氰钴胺素(cyanocobalamin)测定。【标本】空腹血清,避免溶血。【简介】血液维生素Bl2测定用血清标本较抗凝血标本为好。维生素B12为DNA合成所需辅酶,与细胞核发育成熟有关。缺乏时可致恶性贫血和营养性巨幼红细胞性贫血,但其缺乏罕见因营养不良而引起。一般饮食

中含量远远超过此量,且肝中储存量亦可供2-8年之需。维生素B12缺乏主要因胃肠道长期吸收障碍所致,在叶

酸缺乏时亦可使维生素B12减少。【方法】放免法,微生物测定法,化学发光法。【参考值】大鼠血清12.06±1.94µg/L,兔血清13.04±1.44µg/L。【临床意义】1.维生素B12减少:见于恶性贫血、萎缩性胃炎、肠内吸收不良、阔节裂头绦虫病、素食者和妊娠后期等。

2.维生素B12增高:见于肝实质损害、急性和慢性粒细胞白血病、部分淋巴细胞白血病、白细胞增多症、真性红细胞增多症、慢性肾功能衰竭、重症心力衰竭、糖尿病、癌肿肝转移等。第九节

微量元素检测微量元素检测分析技术是动物微量元素营养及

代谢紊乱性疾病研究的一个重要组成部分。特

别是近年来在原来的检测手段和常规研究方法

的基础上,又发展了许多新的高灵敏、超微量

和分子水平的研究方法,有力促进了微量元素

研究跨入生命科学的前沿。动物体内微量元素

含量的检测涉及到生物无机化学、营养学、环

境科学、卫生学、毒理学、动物医学等不同的

学科领域。同时,由于机体内微量元素含量低,采样困难,样品量少等特点,要求分析方法必须快速、准确和灵敏。一、生物样品的采集用于微量元素检测的生物样品主要有土壤、

水、饲草料和动物体液、被毛及组织器官等。在自然条件下,多数采集的样品或多或少的受到不同程度的污染。因此,在进行样品的定量分析前,首先要保证所取样品的均匀性和代表性,根据研究的目的、要求和复杂的生物材料对象,选择不同的预处理和常规分析方法。一、生物样品的采集如牧草应不同品种分别多点采样,混合均匀,采样时离开地表2~3cm,尽量避免土壤污染。自然干燥或烘干,粉碎备用。土壤样品一般多点采集植物根部能延伸到的部位(0~30cm),并混合均匀,自然干燥或烘干,研细,过筛备用。动物组织样品均采集新鲜组织,用无离子水冲洗表面的血液,烘干,研细备用。被毛应在固定部位用不锈钢的剪刀采样,洗净备用(洗洁精—无离子水,正己烷—洗涤剂—无离子水等)。全血或血清样品应采集在干净的容器内,封装时避免用橡胶盖,避免使用防腐剂。在样品的收集、运输、保存和消化处理等过程中,根据分析生物材料的不同目的和操作步骤,充分注意待测成分的挥发性和活性保存。因此,每一步骤都要十分仔细.二、样品的制备和前处理样品的制备和前处理是为了将试样转化成适宜分离和测定的物理状况和化学状况。它关系到分析测定的灵敏度、精密度和准确度,是影响分析结果的重要环节。分解试样的原则是试样在分解过程中不能加入待测成分,不能使待测成分有所损失,所用的试剂及反应产物对测定应无干扰。常见的生物样品前处理方法有以下几种。1.稀释法一般适用于体液、分泌物的测定。将这些样品经过适当的稀释剂稀释后,可使待测元素含量适合于测定,同时也使基础含量降低,减少测定的干扰,有利于提高灵敏度和测定的精度。血清和血浆常用稀释法,如所测元素含量较低,可在稀释后通过溶剂萃取以富集及消除基底干扰。如果因黏度影响喷雾速率,可用Triton

X-

100、正丁烷、丙醇稀释血清及血浆9~10倍进行测定,或用混合酸如HNO3-HClO4进行加温消化后定容待测。具体方法应根据不同仪器来

选择。2.高温干灰化法高温干灰化是为了破坏样品中的有机物,一般在马福炉中进行,温度为450~550℃。这种高温干灰化法的优点是能灰化大量样品,方法简单,无试剂污染,空白低,且能够自动调节溶解灰化后的酸需要量。但对于低沸点的元素常有损失,其损失程度取决于灰化温度和时间,还与元素在样品中的存在形式有关。3.低温干灰化法低温干灰化法又称氧等离子体灰化法,该法利用高频或超高频激发产生氧等离子体,在低温(70~100℃)下氧化生物组织。低温灰化的速度与等离子体的流速、时间功率和样品体积有关。低温灰化能克服高温灰化时挥发、滞留、吸附而损失易挥发元素的缺点。4.常压湿消化法常压湿消化法是将样品和混合氧化液置敞口容

器中,在一定条件下加热分解或回流消化的常

用有效破坏有机物的方法。该法不需要特殊设

备,使用的氧化液为混合酸,常用的有:硝酸-高氯酸,硝酸-硫酸,硫酸-过氧化氢,硝酸-硫酸-高氯酸,硝酸-硫酸-过氧化氢等。该法应用

广,适用性强,操作简便,元素挥发或附着损

失小,可根据元素特性和氧化性酸的特性选用

不同的混合液组合。该法的缺点是试剂用量大,空白值高。5.高压湿消化法该法是在上述常压湿消化法的基础上,密封加压,以加速样品分解。其特点是减少酸用量,防止外界污染物进入,因而可降低空白值。由于消化温度可以相对降低,且密闭的消化系统可以防止挥发,从而适宜于易挥发元素的分析测定。6.燃烧法燃烧法的原理是将样品置于充满常压氧或高压氧的容器中,使生物试样在纯氧中燃烧,有机物被氧化分解,分解出的待测组分被吸收液吸收,定容后即可用于测定。该法常用于测定样品中硫、卤素及微量元素的前处理,待测元素无挥发、无外环境污染和损失。缺点是样品用量少。常用的燃烧容器有氧瓶和氧弹,氧瓶通常用硼硅玻璃制成,其容积取决于试样的量,一般数毫克的试样可在300ml的氧瓶中进行,如取样量在1g左右则需要5000ml的氧瓶。氧弹主体器由不锈钢制成,为防不锈钢被腐蚀,弹顶和内壁放铂或石英杯作接受器。氧弹燃烧器的优点是耐高压,相对安全。7.水解法水解法是样品中有机物在酸、碱、酶的存在下同水作用而分解成简单化合物的分解方法。该法具有安全、快速、不易引入干扰等优点。常见的水解法有:酸水解法,碱水解法和酶水解法。8.微波消解法微波消解是利用微波能量快速分解样品的方法。它结合高压消解和微波快速加热两方面的性能,具有样品消解快,试剂消耗少,空白低,避免挥发损失,回收完全等优点,是近年来广泛应用的样品消解方法。测定微量元素的生物样品前处理方法很多,除上述外,还有萃取、沉淀、过滤、蒸馏、离子交换等不同的分离采集方法,在实际应用中根据具体样品和待测元素选择最佳方法。四、元素分析的质量控制元素分析的质量控制是消除分析中的系统误差,提高分析准确度的主要途径。一般认为,分析过程中加标准品测定方法的回收率和直接用标准品绘制标准曲线,从而检验测定方法和结果的准确度。但由于生物样品组分和价态非常复杂,而且容易受其它组分的影响,而加入的标准只是一种简单的离子或化合物,这样测得的回收率不能反映样品的实际回收率。近年来采用标准参考物质(StandardReferenceMaterial,SRM)检验样本的回收率。四、元素分析的质量控制标准参考物质是一种组成均匀又稳定的物质,它的组成与被测物质组成非常相似。标准参考物质由公认的标准机构发行,附有某些组成成分的参考值和可信限范围。SRM可用于分析质量控制的全过程,如校准测量仪器、评价测量方法,也可直接作为参照物用于检验测定结果的质量。在生物样品微量元素的测定过程中要选择适当的SRM,要求选择的SRM组成与被测样品基本相同或相似,所含元素水平也应与被测样品相近。目前许多国家的研究机构和国际组织从事生物标准物

质的制备、分析和定值,国际上有商品供应的生物标

准参考物已有许多种,包括血、尿、奶、肝脏、骨骼、毛发、草粉等,比较常用的有美国国

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