基于静电吸附辣根过氧化物酶的h

基于静电吸附辣根过氧化物酶的h

在生物传感器的开发中，酶固定是一项重要的措施，决定了生物传感器的响应性能。常用的固定方法有吸附法、包埋法、共价交联、溶胶凝胶等方法。近年来,层层(LBL)静电自组装技术作为一种新型的生物分子固定化方法已逐渐用于各种生物传感器的制备。它是利用超分子静电自组装原理,将带有正、负电荷的物质(包括纳米粒子、染料、聚离子、DNA、蛋白质等)通过静电引力层层交替吸附的自组装技术,比传统固定方法所制作的生物膜具有保持生物活性好、性能稳定、制备简单、厚度可控,且制备条件温和等优点近来,将LBL技术用在第三代生物传感器中,引起了许多研究者的兴趣。但是,大多数酶的活性中心是深埋在蛋白质的壳内,在酶活性中心和电极表面之间不易进行直接电子传递。一种有效的方法是在电极制备过程中引入电子媒介体,如二茂铁的衍生物本文首先在玻碳电极表面电聚合对氨基苯磺酸,利用其表面的-SO11.1cd00超清洗仪CHI660A电化学工作站(上海辰华仪器公司);BRANSONIC200超生清洗仪(德国);AB203-S电子天平(瑞士Mettler&Toledo公司)。辣根过氧化物酶(HRP,EC1.11.1.7,RZ>3.0,A>250U/mg,Sigma公司);H1.2金相砂纸上表面活性剂的制备将玻碳电极(ϕ=4mm)在金相砂纸上打磨,并分别用粒径为0.3和0.05μm的Al1.3循环伏安法检测比电极的电化学电化学实验采用三电极系统:修饰好的电极为工作电极,饱和甘汞电极为参比电极,铂丝为对电极。以5mLpH6.0的乙酸缓冲溶液(ABS,0.1mol/L)为底液,在-0.6～0.25V电位范围内进行扫描,记录循环伏安图。每次扫描结束后均用二次蒸馏水冲洗。22.1对氨基苯磺酸溶液在玻碳电极上的聚合特征利用循环伏安法探讨了对氨基苯磺酸在玻碳电极上的聚合特征。图1为在2.0×102.2合成nano-au/ai采用层层静电自组装技术获得多层nano-Au/AI的复合薄膜,吸附nano-Au/AI的层数对电极响应有较大的影响。图2为在ABS中测得的不同层数nano-Au/AI复合薄膜修饰的酶电极对0.35mmol/LH2.3天青的可逆性图3是酶修饰电极在pH6.0ABS中不同扫速时的循环伏安图。从图可见,在-0.6～0.25V电位范围内出现一对氧化还原峰。随着扫描速度的不断增加,峰电流值也不断的增加,当扫描速度达到700mV/s时,仍能得到对称性良好的循环伏安图,表明固定在电极表面的天青Ⅰ呈现出很好的可逆性。且在10～700mV/s范围内,峰电流与扫速成线性关系,这表明修饰电极在ABS中的电化学过程是受表面控制的。2.4循环伏安图的生成图4是酶电极在0.1mol/LABS中的循环伏安图。在未加H2.52.5.1ph和温度对装饰电极的影响有机化合物的电极反应通常伴随质子的得失,因此溶液中H2.5.2-0.6v的电位范围图5为电位对电极响应的影响。恒电位测电流响应时,工作电位是一个重要的影响因素。在0～-0.6V的电位范围内,催化电流随着电位的负向增大而逐渐增大。由图可看出,当电位达到-0.4V时,电流变化趋势开始趋向平缓,考虑到高电位下基线电流高,并且将使溶液中的电活性物质发生氧化还原反应,给测定带来干扰,故本实验选取-0.4V为工作电位。2.5.3反应性能图6为修饰电极在最佳的实验条件下,连续加入H2.5.4干扰实验在最佳实验条件下,当溶液中H2.5.5循环扫描系统abs在最佳实验条件下,将修饰好的电极在pH6.0的ABS中进行循环扫描50圈,峰电位不变,峰电流仅