专题课题微生物的实验室培养专家讲座

㈠.微生物类群微生物原核类:真核类非细胞类：细菌、支原体、衣原体、放线菌、蓝藻个体微小、结构简单酵母菌、霉菌、食用菌真菌：原生生物：显微藻类、原生生物（如：草履虫、变形虫等）病毒、类病毒、朊病毒◆微生物共同特点：一.微生物基础知识专题课题微生物的实验室培养专家讲座第1页1.细菌形态专题课题微生物的实验室培养专家讲座第2页拟核，大型环状DNA质粒(小型环状DNA，含抗生素，抗药性，固氮基因)其成份为肽聚糖2.细菌结构特殊结构（有时包含芽孢）专题课题微生物的实验室培养专家讲座第3页芽孢

有些细菌在一定条件下，细胞里面形成一个椭圆形休眠体，叫做芽孢。芽孢壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣环境有很强抵抗力。（抗逆性极强）注：不是繁殖体专题课题微生物的实验室培养专家讲座第4页比如，有细菌芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，能够随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）时候，芽孢又能够萌发，形成一个细菌.专题课题微生物的实验室培养专家讲座第5页细菌主要是以二分裂方式进行增殖（如右图）3.细菌繁殖4.细菌菌落⑴.定义：单个或者少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，会形成一个肉眼可见、含有一定形态结构子细胞群体，叫做菌落。⑵.特征：大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。⑶.功效：每种细菌在一定条件下所形成菌落，能够作为菌种判定主要依据。专题课题微生物的实验室培养专家讲座第6页几个菌落及其形态专题课题微生物的实验室培养专家讲座第7页几个菌落及其形态专题课题微生物的实验室培养专家讲座第8页5.病毒结构:由核酸和蛋白质组成。专题课题微生物的实验室培养专家讲座第9页病毒结构专题课题微生物的实验室培养专家讲座第10页吸附注入合成释放组装6.病毒繁殖病毒增殖普通可分五个阶段，即：吸附→注入核酸→合成核酸和蛋白质→组装→释放6.病毒营养方式：寄生专题课题微生物的实验室培养专家讲座第11页培养微生物需要处理两个问题是什么？1、为微生物提供适当营养条件和环境条件2、预防杂菌入侵培养基、培养条件无菌技术(取得纯净培养物关键）思索:专题课题微生物的实验室培养专家讲座第12页微生物需要五大类营养要素物质是：㈡.微生物需要营养物质及功效1.碳源2.氮源3.生长因子4.无机盐5.水专题课题微生物的实验室培养专家讲座第13页1.碳源：为微生物提供碳元素。无机碳化合物——CO2、NaHCO3等有机碳化合物糖类（最惯用碳源，尤其是葡萄糖）烃类、醇类、脂肪酸蛋白质、脂质、核酸等（有机大分子）牛肉膏、蛋白胨、花生粉饼、石油（天然）专题课题微生物的实验室培养专家讲座第14页2.氮源:N2NH3等有机物中氮（还有尿素）无机氮牛肉膏、蛋白胨为微生物提供氮元素。圆褐固氮菌、硝化细菌和大肠杆菌氨盐、硝酸盐等是惯用氮源氮源主要用于合成蛋白质、核酸以及含氮代谢产物专题课题微生物的实验室培养专家讲座第15页自养型微生物与异养型微生物培养基主要差异是()A．碳源B．氮源C．无机盐D．特殊营养物质A专题课题微生物的实验室培养专家讲座第16页3.生长因子⑶.常见生长因子：⑴.概念：⑵.作用：微生物生长不可缺乏微量有机物。酶和核酸组成成份。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。一些天然物质如酵母膏、蛋白胨、动植物组织提取液等可为微生物提供生长因子（4）起源：专题课题微生物的实验室培养专家讲座第17页注意：最惯用碳源是糖类，尤其是葡萄糖最惯用氮源是铵盐、硝酸盐对异养生物而言，含C、H、O、N化合物既是碳源，有时氮源，如蛋白质之所以补充生长因子，是因为缺乏合成这些物质酶或合成能力有限专题课题微生物的实验室培养专家讲座第18页思索：C专题课题微生物的实验室培养专家讲座第19页（三）培养基

培养基（培养液）是由人工方法配制而成，专供微生物生长繁殖使用混合营养液。1.培养基类型及用途专题课题微生物的实验室培养专家讲座第20页种类是否含凝固剂用途固体培养基半固体培养基液体培养基按物理性质分是是否分离、计数等观察微生物运动、判定菌种等工业生产专题课题微生物的实验室培养专家讲座第21页固体培养基：菌落专题课题微生物的实验室培养专家讲座第22页半固体培养基：无动力有动力(弥散)专题课题微生物的实验室培养专家讲座第23页液体培养基：表面生长均匀混浊生长沉淀生长专题课题微生物的实验室培养专家讲座第24页按化学成份分种类化学成份是否明确用途天然培养基合成培养基否是主要用于工业生产分类、判定专题课题微生物的实验室培养专家讲座第25页按培养基功效（用途）分种类制备方法原理用途举例选择培养基判别培养基加入某种化学物质加入某种试剂或化学药品依据一些微生物对一些物质抗性依据微生物代谢产物与特定试剂或化学药品反应，产生显著特征改变从众多微生物中分离所需微生物判别不一样种类微生物加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌伊红和美蓝培养基可鉴别大肠杆菌专题课题微生物的实验室培养专家讲座第26页选择培养基加入青霉素培养基加入高浓度食盐培养基不加氮源无氮培养基不加含碳有机物无碳培养基分离酵母菌、霉菌等真菌分离金黄色葡萄球菌分离固氮菌分离自养型微生物专题课题微生物的实验室培养专家讲座第27页（三）培养基

（1）按物理状态分：（2）按功效分：（3）按成份分：总结：1.培养基类型固体培养基液体培养基半固体培养基选择培养基判别培养基天然培养基合成培养基专题课题微生物的实验室培养专家讲座第28页2.不一样微生物往往需要采取不一样培养基配方不论哪种培养基，普通都含有水、无机盐、碳源和氮源等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气要求．3.培养基成份专题课题微生物的实验室培养专家讲座第29页血清中含有：①各种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）②各种金属离子；③激素；④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。⑤各种生长因子⑥转移蛋白⑦不明成份人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量天然培养基（如血清）。专题课题微生物的实验室培养专家讲座第30页（四）无菌技术1.无菌技术概念

无菌操作泛指在培养微生物操作中，全部预防杂菌污染方法。成功地培养微生物关键。

专题课题微生物的实验室培养专家讲座第31页2.消毒与灭菌概念及二者区分

3.惯用消毒与灭菌方法比较项目理化原因作用强度毁灭微生物程度芽孢和孢子能否被毁灭消毒较为温和部分生活状态微生物不能灭菌强烈全部微生物能专题课题微生物的实验室培养专家讲座第32页①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。②巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min。③化学药剂消毒法：用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒；氯气消毒水源。④紫外线消毒。消毒方法：3.惯用消毒与灭菌方法专题课题微生物的实验室培养专家讲座第33页（1）日常生活经惯用到是

煮沸

消毒法

；（2）对一些不耐高温液体，则使用

巴氏

消毒法（比如牛奶）；（3）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使用

紫外线

进行物理消毒。（4）试验操作者双手使用酒精进行消毒；（5）饮水水源用氯气进行消毒。消毒方法专题课题微生物的实验室培养专家讲座第34页专题课题微生物的实验室培养专家讲座第35页1、灼烧灭菌灭菌方法：接种环、接种针、试管口等灭菌专题课题微生物的实验室培养专家讲座第36页2、干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。3、高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min.如玻璃器皿、金属用具等灭菌如培养基、无菌水等灭菌专题课题微生物的实验室培养专家讲座第37页高压蒸气灭菌原理是（）A．高压使细菌DNA变性B．高压使细菌蛋白质凝固变性C．高温烫死细菌D．高温使细菌DNA变性B专题课题微生物的实验室培养专家讲座第38页灭菌方法：

1、灼烧灭菌2、干热灭菌3、高压蒸气灭菌4、紫外线灭菌如表面灭菌和空气灭菌等，所用器械是紫外灯

。专题课题微生物的实验室培养专家讲座第39页关于灭菌和消毒不正确了解是A．消毒和灭菌实质上是相同B．灭菌是指杀死环境中一切微生物细胞、芽孢和孢子C．接种环用烧灼方法灭菌D．惯用灭菌方法有加热法、过滤法、红外线法、化学药品法A专题课题微生物的实验室培养专家讲座第40页1.无菌技术除了用来预防试验室培养物被其它外来微生物污染外，还有什么目标？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。假如需要，请选择适当方法。（1）培养细菌用培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）试验操作者双手答：无菌技术还能有效防止操作者本身被微生物感染。答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。旁栏思考专题课题微生物的实验室培养专家讲座第41页二、微生物试验室培养基本操作程序1、器具灭菌2、培养基配制3、培养基灭菌4、倒平板5、微生物接种6、恒温箱中培养7、菌种保留专题课题微生物的实验室培养专家讲座第42页专题课题微生物的实验室培养专家讲座第43页涂布器接种环接种针专题课题微生物的实验室培养专家讲座第44页专题课题微生物的实验室培养专家讲座第45页a.制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）配方：专题课题微生物的实验室培养专家讲座第46页1．计算、称量2．溶化3．调pH：pH7．6

4．过滤：这一步能够省去。5．分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引发污染。分装三角烧瓶量以不超出三角烧瓶容积二分之一为宜。6．加塞7．包扎操作步骤专题课题微生物的实验室培养专家讲座第47页8．灭菌:

将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。将培养基用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170℃下灭菌2h。

9．倒平板:

待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见书本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种.

10．无菌检验：将灭菌培养基放入37℃温室中培养24—48小时，以检验灭菌是否彻底。专题课题微生物的实验室培养专家讲座第48页倒平板操作专题课题微生物的实验室培养专家讲座第49页1.无菌技术除了用来预防试验室培养物被其它外来微生物污染外，还有什么目标？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。假如需要，请选择适当方法。⑴培养细菌用培养基与培养皿⑵玻棒、试管、烧瓶和吸管⑶试验操作者双手答：无菌技术还能有效防止操作者本身被微生物感染。答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。专题课题微生物的实验室培养专家讲座第50页答：能够用手触摸盛有培养基锥形瓶，感觉锥形瓶温度下降到刚才不烫手时，就能够进行倒平板了。2.为何需要使锥形瓶瓶口经过火焰？答：经过灼烧灭菌，预防瓶口微生物污染培养基。问题讨论1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么方法来预计培养基温度？专题课题微生物的实验室培养专家讲座第51页3.平板冷凝后，为何要将平板倒置？4.在倒平板过程中，假如不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为何？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后培养基表面湿度也比较高，将平板倒置，既能够使培养基表面水分更加好地挥发，又能够预防皿盖上水珠落入培养基，造成污染。答：空气中微生物可能在皿盖与皿底之间培养基上滋生，所以最好不要用这个平板培养微生物。专题课题微生物的实验室培养专家讲座第52页b.纯化大肠杆菌接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法微生物接种技术：专题课题微生物的实验室培养专家讲座第53页接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法

平板划线法:经过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线操作,将聚集菌钟逐步稀释分散到培养基表面.

在数次画线后,能够分离到由一个细胞繁殖而来肉眼可见子细胞群体,这就是菌落.专题课题微生物的实验室培养专家讲座第54页平板划线操作专题课题微生物的实验室培养专家讲座第55页专题课题微生物的实验室培养专家讲座第56页一旦划破，会造成划线不均匀，难以到达分离单菌落目标；二是存留在划破处单个细胞无法形成规矩菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状菌落。专题课题微生物的实验室培养专家讲座第57页专题课题微生物的实验室培养专家讲座第58页1.接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不一样位置连续划线屡次.2.划线首尾不能相接3.划线后,培养皿倒置培养划线分离法注意事项:其它画线分离图：专题课题微生物的实验室培养专家讲座第59页专题课题微生物的实验室培养专家讲座第60页答：操作第一步灼烧接种环是为了防止接种环上可能存在微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留菌种，使下一次划线时，接种环上菌种直接起源于上次划线末端，从而经过划线次数增加，使每次划线时菌种数目逐步降低，方便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留菌种，防止细菌污染环境和感染操作者。问题讨论1.为何在操作第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，依然需要灼烧接种环吗？为何？专题课题微生物的实验室培养专家讲座第61页2.在灼烧接种环之后，为何要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后划线操作时，为何总是从上一次划线末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌数目比线条起始处要少，每次从上一次划线末端开始，能使细菌数目伴随划线次数增加而逐步降低，最终能得到由单个细菌繁殖而来菌落。专题课题微生物的实验室培养专家讲座第62页稀释涂布平板操作方法专题课题微生物的实验室培养专家讲座第63页专题课题微生物的实验室培养专家讲座第64页专题课题微生物的实验室培养专家讲座第65页专题课题微生物的实验室培养专家讲座第66页答：应从操作各个细节确保“无菌”。比如，酒精灯与培养皿距离要适当、吸管头不要接触任何其它物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。问题讨论涂布平板全部操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释无菌操作要求，想一想，第2步应怎样进行无菌操作？专题课题微生物的实验室培养专家讲座第67页微生物恒温培养微生物恒温培养专题课题微生物的实验室培养专家讲座第68页微生物恒温培养专题课题微生物的实验室培养专家讲座第69页

伊红—美蓝培养基是判别培养基，能够用来检测自来水中大肠杆菌是否超标，因为代谢产物与伊红—美蓝结合，使菌落呈黑色并带有金属光泽，使大肠杆菌菌落显示出来，并没有促进大肠杆菌生长和抑制其它微生物生长。比如：判别大肠杆菌培养基大肠杆菌呈黑色中心,有或无金属光泽专题课题微生物的实验室培养专家讲座第70页菌种保留1、暂时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保留。2、长久保留：甘油冷冻管藏法专题课题微生物的实验室培养专家讲座第71页结果分析与评价㈠.培养基制作是否合格假如未接种培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长，说明培养基制备是成功，不然需要重新制备。㈡.接种操作是否符合无菌要求假如培养基上生长菌落颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落特点，则说明接种操作是符合要求；假如培养基上出现了其它菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未到达要求，需要分析原因，再次练习。㈢.是否进行了及时细致观察与统计培养12h与24h后大肠杆菌菌落大小会有显著不一样，及时观察统计同学会发觉这一点，并能观察到其它一些细微改变。专题课题微生物的实验室培养专家讲座第72页本课题知识小结:专题课题微生物的实验室培养专家讲座第73页【典例解析】例:关于微生物营养物质叙述中，正确是()A.是碳源物质不可能同时是氮源B.凡碳源都提供能量C.除水以外无机物只提供无机盐D.无机氮源也能提供能量解析：不一样微生物，所需营养物质有较大差异，要针对微生物详细情况分析。对于A、B选项，它表示是不完整。有碳源只能是碳源，如二氧化碳；有碳源可同时是氮源，如NH4HCO3；有碳源同时是能源，如葡萄糖；有碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于C选项，除水以外无机物种类繁多，功效也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物碳源；NaHCO3，可作为自养型微生物碳源和无机盐；而NaCl则只能提供无机盐。对于D选项，无机氮源提供能量情况还是存在，如NH3可为硝化细菌提供能量和氮源。D专题课题微生物的实验室培养专家讲座第74页例2：下面对发酵工程中灭菌了解不正确是()A.预防杂菌污染B.毁灭杂菌C.培养基和发酵设备都必须灭菌D.灭菌必须在接种前解析：灭菌是微生物发酵过程一个主要步骤。A说是灭菌目标，因为发酵所用菌种大多是单一纯种，整个发酵过程不能混入其它微生物（杂菌），所以是正确；B是错误，因为灭菌目标是预防杂菌污染，但实际操作中不可能只毁灭杂菌，而是毁灭全部微生物。C是正确，因为与发酵相关全部设备和物质都要灭菌；发酵