高效液相色谱法在中药标准提高中的应用

高效液相色谱法在中药标准提高中的应用高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第1页序言中药是中国医药学瑰宝，对中华民族繁衍兴盛做出了伟大贡献。为了确保中药安全性和有效性，数千年来中医药一直处于不停标准化、规范化进程中，《神农本草经》则是最早中药材标准。李时珍《本草纲目》是中药材标准规范深化。历史发展到今天，总结前人经验，补充完善、制订中药系列标准是中药当代化需要，也是中药国际化，造福全人类需要。高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第2页一、本省中药材质量标准情况1、个别中药材无质量标准。

广东是一个中药材生产、销售、使用大省，本省用于生产中药成方制剂及临床配方中药材有上千种，《中国药典》年版收载中药材有551种；现有质量标准中药材远不能满足本省中药材需求和使用，还有数百种经常使用、疗效很好广东地产中药材，既无国家药品质量标准也无省级药品质量标准。高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第3页2、与药典同名异物

广东是“川、广、云、贵地道药材”主产地之一，“南药”是广东特产。有些特产药材已收入《中国药典》如陈皮、广藿香、广金钱草、广防己、广枣、砂仁、巴戟天、沉香、地龙、化橘红、何首乌、佛手、丁公藤……等。但还有大个别广东常见中药材未被《中国药典》收载，有其习用名称却与《药典》收载名称相同，为同名异物中药材.高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第4页3、已经有质量标准偏低。

《广东省中药材标准》收载119个品种，建立了定量测定方法有13个，其中高效液相色谱法5个。高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第5页二、高效液相色谱法在国家药品

标准中利用

高效液相色谱法因为仪器化程度高、分离效能高、准确性和重现性好，更适合中药复杂成份分离分析和标准色谱图库建立，成为中药含量测定主导方法。

高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第6页（一）、HPLC在部标中药成方制剂应用

《中华人民共和国卫生部药品标准》“中药成方制剂”分20册，共4052种，建立量化指标项目标占11%，其中采取高效液相色谱分析方法有４２项，占１.１２％，见表1。高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第7页表1部颁品种量化指标方法分析含测方法挥发油测定容量法、重量法分光光度法液相色谱法气相色谱法薄层扫描法其它浸出物累计项目18981254218302956416高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第8页（二）、HPLC在《中国药典》应用

HPLC在《中国药典》应用，在我国药学工作者努力下，经历了一个从无到有、从少到多过程。高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第9页表２近3版版药典品含量测定方法分析年份总收载数薄层扫描法气相色谱法高效液相色谱法百分比（%）1995920173111.2992601110510.61146454751845.2高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第10页三、利用高效液相色谱法进行药品标准定量个别提升工作中药是各种成份混合物，其化学成份可有几十种甚至上百种，即使中药药效是多成份综合作用结果已渐成共识，但由此认为中药全成份均为有效成份观点则是片面，以咱们当前技术及试验条件要想对全部成份进行测定也是不可能，选择1~

2个有效成份作为中药质量评价标准，即使这种方法不够充分、客观，但却是当前咱们技术及试验条件所能做到。高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第11页（一）、指导思想１、在制订中药标准中突出中医理论指导作用，反应中医用药与质量标准内在关系。２、在检测成份上也要注意以中医临床功效主治与当代药理学相结合进行研究。３、如所测成份含量低，应制订浸出物或增加一味药含量测定。高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第12页表3多指标测定品种与项目序号品名检测成份1西红花羟基红花黄色素、山奈素2山楂叶总黄酮、金丝桃苷3马钱子马钱子碱、士宁4丹参丹参酮IIA、丹酚酸B5甘草甘草酸、甘草苷6半枝莲总黄酮、野黄芩苷7肉桂挥发油、桂皮醛8红花羟基红花黄色素、山奈素9芦荟库拉素芦荟、好望角芦荟10沙棘总黄酮、异鼠李素11虎杖大黄素、虎杖苷高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第13页12金银花绿原酸、木犀草素13银杏总黄酮醇苷、萜类内酯14淫羊藿总黄酮、淫羊藿苷15紫草羟基萘醌总色素、ß-ß’-二甲基丙酰阿卡宁16槐花总黄酮、无水芦丁17蜂胶白扬素、高良姜素18六味地黄丸牡丹皮中丹皮酚、山茱萸中马钱苷19六味地黄颗粒牡丹皮中丹皮酚、山茱萸中马钱苷20注射用双黄连金银花中绿原酸、黄芩中黄芩苷、连翘中连翘苷21独一味胶囊总黄酮、正丁醇提取物、木犀草素22清开灵口服液黄芩中黄芩苷、总氮量23清开灵注射液含氮量、胆酸、栀子中栀子苷、黄芩中黄芩苷24鼻窦炎口服液正丁醇提取物、黄芩中黄芩苷高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第14页表4要求含量程度为多成份之和序号品名检测成份测定方法含量程度（%）1人参人参皂苷Rg1和Re、总量；Rb1HPLC≥0.30；0.22人参叶人参皂苷Rg1、Re总量HPLC≥2.253儿茶儿茶素和表儿茶素总量HPLC≥21.04三七人参皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1总量HPLC≥5.05木香木香烃内酯、去氢木香烃内酯HPLC≥1.86木通齐墩果酸、常春藤皂苷元HPLC≥0.157瓦松槲皮素、山奈素HPLC≥0.028西红花西红花苷-I、西红花苷-II≥10.09西洋参人参皂苷Rg1、Re、Rb1总量HPLC≥2.010大黄芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚总量HPLC≥1.511防己粉防己碱、防己诺林HPLC≥1.612防风升麻甙和5-O-甲基维斯阿米醇苷总量HPLC≥0.24高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第15页13红参人参皂苷Rg1和Re、总量；Rb1HPLC≥0.25；0.2014吴茱萸吴茱萸碱和吴茱萸次碱总量HPLC≥0.1515补骨酯补骨酯素、异补骨酯素HPLC≥0.716苦参苦参碱、氧化苦参碱HPLC≥1.217金钱草槲皮素、山奈素HPLC≥0.1018胡黄连胡黄连苷-I、胡黄连苷-IIHPLC≥9.019厚朴厚朴酚与和厚朴酚总量HPLC≥2.020厚朴花厚朴酚与和厚朴酚总量HPLC≥0.2021牵牛子咖啡酸、咖啡酸乙酯HPLC≥0.2022香薷麝香草酚、香荆芥酚HPLC≥0.1623重楼重楼皂苷I、重楼皂苷IIHPLC≥0.8024穿心莲穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯总量HPLC≥0.8025蟾酥华蟾蜍次素和脂蟾毒配基总量HPLC≥6.0高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第16页（二）、提升程度１、以中国药典２００５年版一部为基准。２、中国药典２００５年版一部，成方制剂和单味制剂共收载５６4个品种，其中有３２５个项目采取了高效液相色谱法进行定量分析，占５７.6％。高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第17页３、在３２５个分析项目中测定芍药苷有４５项，占１３.８％，测定黄芩苷４３项，占１３.２％，测定盐酸小檗碱１８项，占５.５％，测定大黄素２０项，占６.２％。高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第18页类别被测成份所属药材测定条件芍药苷白芍、赤勺乙腈-0.1%磷酸溶液（13：87）乙腈-水（17：83）；230nm生物碱盐酸小檗碱黄连、黄柏乙腈-0.033mol/L磷酸二氢钾溶液（35：65）；424nm盐酸麻黄碱麻黄乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液（含0.2%三乙胺）磷酸调pH至2.7（4：10）；210nm苦参碱苦参乙腈-0.1%磷酸溶液（三乙胺调pH8.0）；220氢溴酸东莨菪碱洋金花乙腈-0.07mol/L磷酸钠溶液（含0.0175mol/L十二烷基硫酸钠，用磷酸调整pH至6.0）（50：100）；216nm荷叶碱荷叶乙腈-三乙胺-冰醋酸-水（27：1.8：0.78：70.6）；270马钱子碱士宁马钱子乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸钠溶液与0.02mol/磷酸二氢钾等量混合,用磷酸调整pH至2.8）（21：79）；260nm原阿片碱夏天无乙腈-三乙胺醋酸溶液（1000ml水中加冰醋酸30ml，三三乙胺8ml）（18：82）；289nm高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第19页黄酮类黄芩苷黄芩甲醇-水-磷酸（47：53：0.2）；280nm葛根素葛根乙腈-0.1%磷酸溶液（11：89）；250nm柚皮苷化橘红甲醇-冰醋酸-水（30：4：60）；283nm橙皮苷陈皮、青皮甲醇-醋酸-水（42：4：54）；283淫洋藿苷淫洋藿乙腈-0.05%磷酸（26：74）；270nm芦丁槐花甲醇-水-冰醋酸（45：54：1）；257nm金丝桃苷山楂叶甲醇-乙腈-四氢呋喃-0.5%冰醋酸（1：1：19.4：78.6）；363nm槲皮素山奈素异鼠李素银杏甲醇-0.4%磷酸（50：50）；360nm木犀草素独一味甲醇－0.4%磷酸溶液（50：50）；350nm高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第20页皂苷类甘草酸（单铵盐）甘草甲醇-0.2mol/L醋酸铵溶液-冰醋酸（67：33：1）；250nm人参皂苷类人参、三七乙腈A；水B，梯度洗脱；203nm黄芪甲苷黄芪乙腈-水（32：68）；蒸发光散射检测器蒽醌类大黄素、大黄酚大黄甲醇-0.1%磷酸溶液（85：15）；254nm丹参酮IIA丹参甲醇-水（75：25）；270nm丹酚酸B丹参甲醇-乙腈-甲酸-水（30：10：1：59）；286nm马钱苷山茱萸乙腈-水（15：85）；240nm绿原酸金银花乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87）；327nm高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第21页高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第22页（三）、高效液相色谱分析方法建立普通步骤：

一个高效液相色谱分析方法建立，是由各种原因来决定，除了了解样品性质及试验室具备条件外，对液相色谱分离理论了解，对前人从事过相近工作借鉴以及分析工作者本身实践经验，都对分析方法建立起着主要影响。通常在确定被分析样品以后，要建立一个高效液相分析方法必须处理以下问题：高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第23页（1）依据所测成份性质，制订其分析纯化方法。（2）依据被分析样品特征，选择适合用于样品分析高效液相色谱分析方法。（3）由取得色谱图进行定性或定量分析。

高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第24页（四）、高效液相色谱图存在问题、原因及处理方法

液相色谱系统许多问题都能在谱图上反应出来。其中有一些问题能够经过改变设备参数得到处理；而其它问题必须经过修改操作程序来处理。对于色谱柱和流动相正确选择是得到好色谱图关键。高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第25页峰拖尾高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第26页原因1、流动相PH选择不妥2、干扰峰3、样品与填料表面残留硅羟基发生反应处理方法调整PH值。a、使用更长色谱柱。b、改变流动相或更换色谱柱。a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂b、更换色谱柱高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第27页峰前延高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第28页原因1、样品过载2、样品溶剂选择不恰当3、柱温低处理方法降低样品含量。a、使用流动相作为样品溶剂。升高柱温高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第29页高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第30页

峰分叉高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第31页原因1、保护柱或分析柱污染2、样品溶剂不溶于流动相处理方法1、取下保护柱再进行分析。改变样品溶剂。高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第32页保留时间波动高效液相色谱法在中药标准提高中的应用第33页原