石榴鞣花酸-羟丙基-环糊精包合物的制备及表征

石榴鞣花酸-羟丙基--环糊精包合物的制备及表征

石榴提取物是一种天然存在的多酚类化合物，具有抗炎、肿胀、抗炎、抗菌、皮肤白皙等功效。包合技术是利用包合材料主分子较大空穴将客分子难溶性药物包嵌,从而形成分子胶囊包合物的技术,可提高难溶性药物的溶解度和稳定性1材料表面1.1通明经典石榴鞣花酸(自制,批号20151230,含有量≥90%)。石榴购自安徽省蚌埠市药材公司,经安徽中医药大学药学院彭华胜教授鉴定为正品。石榴鞣花酸对照品(批号2075083,含有量≥95%,美国Sigma公司);羟丙基-β-环糊精对照品(上海伯奥生物科技有限公司)。甲醇、乙腈为色谱纯;其他试剂均为分析纯。1.2纯水一体化系统Thermo-U3000UHPLC色谱仪(配置TCC-3000RS紫外检测器、DAD-3000二极管阵列检测器)、Nicolet6700傅里叶变换红外光谱仪(赛默飞世尔科技公司);明澈-D24UV纯水/超纯水一体化系统[默克化工技术(上海)有限公司];SU8020场发射扫描电子显微镜(日本日立公司);X'PertPROMPD射线衍射仪(荷兰帕纳科公司);KQ2200E超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);V-1700紫外可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司);RE-52AA旋转蒸发仪(上海楚柏实验室设备有限公司);HH-2电热恒温水浴锅(浙江力辰仪器科技有限公司);SHB-III循环水式多用真空泵(郑州长城科教仪器有限公司);FD-1冷冻干燥机(北京得天佑科技发展有限公司);ZYW-100H恒温培养振荡器(上海智诚分析仪器制造有限公司);FA1004电子天平(天津天马衡基仪器有限公司)。2方法2.1对照溶液的制备2.2超声过滤法取石榴鞣花酸-羟丙基-β-环糊精适量,置于10mL量瓶中,甲醇超声30min后定容,摇匀,0.45μm微孔滤膜过滤,即得。2.3仪器性能及稳定性试验精密吸取对照品溶液适量,稀释成0.1512、0.756、1.512、3.024、6.048、12.09、24.18μg/mL,在文献[8]色谱条件下进样测定,以峰面积为横坐标(X)、溶液质量浓度为纵坐标(Y)进行线性回归,得回归方程为Y=0.7513X+0.2878(r=0.9997),线性范围0.1512~24.18μg/mL。精密度试验测得石榴鞣花酸峰面积RSD为0.32%,表明仪器精密度良好。稳定性试验测得在0~24h内石榴鞣花酸-羟丙基-β-环糊精峰面积RSD为0.41%,表明溶液在24h内稳定性良好。重复性试验测得石榴鞣花酸峰面积RSD为1.01%,表明该方法重复性良好。加样回收率试验测得,石榴鞣花酸-羟丙基-β-环糊精平均加样回收率为99.51%,RSD为1.28%。色谱图见图1。2.4包组分制备2.4.1研成糊状物取适量羟丙基-β-环糊精置于乳钵中,加少量水溶解,研成糊状物。另取适量石榴鞣花酸用乙醇溶解,加入上述糊状物中,充分研磨1h后减压抽滤,滤饼在60℃烘箱中干燥至恒重,即得。2.4.2花酸溶液的制备取适量羟丙基-β-环糊精溶于水中,300W、40kHz条件下超声。同时,精密称取石榴鞣花酸适量,用少量乙醇溶解后逐滴缓慢加入上述溶液中,室温下继续超声30min,将反应母液经0.45μm微孔滤膜过滤,续滤液浓缩至约10mL,冷冻干燥,即得。2.4.3超声法制备法精密称取石榴鞣花酸适量,少量乙醇溶解,搅拌下缓慢滴入羟丙基-β-环糊精水溶液中,300W、40kHz条件下超声20min后,室温振荡搅拌(149r/min)18h,0.45μm微孔滤膜过滤,浓缩至10mL左右,浓缩液真空干燥,即得。2.4.4石榴鞣花酸包合率的测定精密称取石榴鞣花酸、羟丙基-β-环糊精各3份,两者比例1∶2,取研磨法、超声法、搅拌-超声法制备的石榴鞣花酸-羟丙基-β-环糊精适量,置于10mL量瓶中,甲醇超声20min后稀释至刻度,摇匀,在文献[8]色谱条件下进样测定,外标法计算石榴鞣花酸含有量,计算包合率,公式为包合率=(包合物中石榴鞣花酸含有量/石榴鞣花酸加入量)×100%。结果,上述3种方法所得包合物中石榴鞣花酸包合率分别为(55.14±0.85)%、(40.08±1.22)%、(83.64±0.21)%,即搅拌-超声法包合率最高,故选择该方法制备包合物。2.5正交试验2.6统计分析3结果3.1正交试验结果见表1,方差分析见表2。由表1可知,各因素影响程度依次为A>B>C>D,最优工艺为A3.2包组分验证3.2.1加样研磨nd-mbr法取石榴鞣花酸、羟丙基-β-环糊精、物理混合物、包合物干粉各1.0mg,置于研钵中,加入适量KBr研磨均匀,压片后扫描,扫描范围为4000~500cm3.2.2x-辐射衍射3.2.3羟丙基--环糊精的物理混合物采用支持膜分散粉末法,加速电压5.0kV,结果见图4。由图可知,石榴鞣花酸形态呈不规则的絮状球形晶体微粒;羟丙基-β-环糊精呈带孔洞的球状;物理混合物呈石榴鞣花酸简单填充于羟丙基-β-环糊精空洞的实心球状,也有少部分黏附于后者表面上的晶形微粒;包合物已无石榴鞣花酸与羟丙基-β-环糊精的典型结构,表明包合物已形成。3.3表观溶解度测定取过量石榴鞣花酸及包合物,置于10mL量瓶中,加水至刻度,室温下充分振摇溶解,离心后取上清液,经0.45μm微孔滤膜过滤,续滤液加水稀释适当倍数后于254nm波长处测定吸光度,计算表观溶解度。结果,石榴鞣花酸在水中的表观溶解度为(0.015±0.04)mg/mL,而包合物为(0.149±0.03)mg/mL。4石榴鞣花酸包合物的筛选本实验通过搅拌-超声法制备石榴鞣花酸-羟丙基-β-环糊精包合物,其中超声波频率、时间、温度对包合物形成有较大影响。超声过程中会产生空化效应研究表明,利用磷脂复合体技术将鞣花酸制成鞣花酸-磷脂复合体纳米乳时,可有效提高其溶解度和渗透性,但在水中溶解度的增加量仅2倍左右精密称取石榴鞣花酸对照品15.12mg,甲醇溶解并定容至10mL,即得(0.1512mg/mL)。根据文献[8-12]及预试验考察,发现石榴鞣花酸与羟丙基-β-环糊精比例(A