葛根素普通粉及其微粉在beagle犬体内生物利用度比较

葛根素普通粉及其微粉在beagle犬体内生物利用度比较

葛根是中医中常用的一种，其主要有效成分是葛根素（pur）和大豆苷（daidzn）。其中，葛根素是葛根心脑血管活性的主要物质基础[1.2]。临床上常用于治疗冠心病、心绞痛及脑血栓等疾病[3～5]。实验证明,犬口服葛根素的生物利用度低,其绝对生物利用度约为3%,大部分以原形从粪便中排出。为了提高葛根素的生物利用度,笔者制备了葛根素微粉。本文旨在采用高效液相色谱法,测定葛根素普通粉及其微粉在Beagle犬体内的生物利用度。葛根素:北京协和制药厂(批号:030404)经本室HPLC法测定含量为98%以上。葛根素微粉由济南倍力粉体工程中心加工,中心粒径为2μm左右。乙腈、甲醇,均为HPLC级,水为重蒸馏水。Agillent1100高效液相色谱仪,DAD二极管阵列检测器,HP1100色谱工作站;AgillentXDB-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);预柱为AgillentXDB-C18柱(4.6mm×12.5mm,5μm);梯度洗脱;0min乙腈∶水(10∶90)0.7mL/min;15min乙腈∶水(60∶40)0.7mL/min;20min乙腈∶水(70∶30)0.7mL/min;30min乙腈∶水(100∶0)0.7mL/min;柱温为室温;检测波长为250nm。Rotofix-32型台式离心机(德国),MS2型旋涡振荡器(广州科仪实验室技术有限公司),5415D型eppendorf离心机(德国)。Beagle犬,体重(10±0.1)kg;雌雄兼用,由广州医药工业研究院Beagle犬培育中心供应。精密吸取0.5mL血清,加入甲醇2.0mL,旋涡振荡1min,离心15min(3000r/min),上清液用氮气流吹干,残渣加0.2mL甲醇溶解,离心10min(10000r/min),取上清液进样。(1)色谱条件:葛根素对照品液、空白血清、含药血清经处理后的溶液的HPLC色谱图,见图1、图2、图3。由图可见血清中内源性杂质对葛根素的测定无干扰,葛根素的保留时间为8.2min。(2)标准曲线制备:称取葛根素对照品适量,用甲醇溶解,制成每mL约含0.1mg的溶液,作为贮备液。精密吸取此贮备液用甲醇稀释为含葛根素为0.01875、0.0125、0.009375、0.00625、0.003125mg/mL的系列标准液。分别吸取以上标准溶液0.5mL,加入空白血清0.5mL,按样品处理方法进行处理,得一系列对照品溶液。分别吸取以上系列对照品溶液20μL,进样测定峰面积。以葛根素浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,得葛根素对照品在血液中的标准曲线,其回归方程分别为Y=149750X-55.665(r=0.9963),在0.15625μg～0.9375μg范围内线性关系良好。由于回归方程中b/a>100,因此采用外标一点法定量。(3)回收率试验:取0.5mL空白血清6份,分别加入不同量的葛根素对照品溶液,旋涡混合均匀,分别加入甲醇2.0mL,旋涡振荡1min,离心15min(3000r/min),上清液用氮气流吹干,残渣加0.2mL甲醇溶解,离心10min(10000r/min),取上清液进样。记录峰面积,求回收率。结果见表1,高、中、低浓度的平均回收率为96.58%。结果表明:回收率在要求范围内,该方法合理、可行。(4)方法精密度试验:取含葛根素的血清样品0.5mL,加入甲醇2.0mL,旋涡振荡1min,离心15min(3000r/min),上清液用氮气流吹干,残渣加0.2mL甲醇溶解,离心10min(10000r/min),取上清液进样。采用外标一点法计算,求RSD(%)。结果,见表2、表3。结果表明:日内及日间精密度均<10%,该方法的精密度良好。(5)数据分析:按2.2样品处理方法项下对各样品进行处理,进样,采用外标一点法计算出各样品的血药浓度,将测得的血药数据输入计算机,用3P97药动学统计程序处理,结果表明葛根素普通粉及其微粉的体内过程均符合二室开放模型。其主要药动学参数,见表4。从表中数据直观来看,葛根素微粉在体内血药浓度与时间曲线下的面积远远高于普通粉,经t检验,普通粉与微粉组比较有极显著性差异(t<0.01)。3葛根素口服微粉的制备葛根素具有毒性小、代谢快的优点。犬口服葛根素的生物利用度低,其绝对生物利用度约3%,大部分以原形从粪便中排出。因此,我们将其粉碎成微粉,旨在通过改变其粒径,来提高葛根素口服给药在体内的吸收。实验证明,制成微粉后,其达峰时间缩短,峰浓度提高,在Beagle犬体内血药浓度与时间曲线下的面积也大大提高,表明其生物利用度明显提高,从而为将葛根素微粉进一步开发成胶囊剂、片剂及其它剂型提供了实验依据。1实验材料2方法和结果1.1药物和试剂1.2仪器和铬条件1.3普通粉、葛根素微粉的制备取Beagle犬6只,随机分为2组,每组3只,试验前禁食12h,葛根素普通粉、葛根素微粉分别按