银杏叶中银杏内酯的含量测定

银杏叶中银杏内酯的含量测定

银杏叶是银杏科植物的一种干燥的叶子。具有理气、哮喘、活血、止血、止痛等功效。银杏叶的主要有效成分为银杏黄酮和银杏内酯类化合物。目前国内外生产银杏叶制剂的厂家多,银杏叶的需求量大,造成银杏叶的采收混乱。我们收集了银杏叶生产基地1~10年生幼苗及成年大树从春季到秋季的树叶。HPLC法测定银杏叶总内酯虽有报道,但对银杏叶生产田的各种类型银杏叶未见含量测定报道,为了保证药品质量,本文测定了各种类型的银杏叶中银杏内酯的含量。为指导银杏叶的生产提供了依据。1色谱、色谱一SP-8800高效液相色谱仪,SP-RI-150示差检测器,Chromfet积分仪。试剂为分析纯或色谱纯。银杏内酯A(ginkgolideA,GA)、银杏内酯C(ginkgolideC,GC)、白果内酯(bilobalide,BB)对照品由中国药品生物制品检定所提供,银杏内酯B(ginkgolideB,GB)对照品购自SIGMA公司。在本色谱条件下都呈现单一色谱峰。样品:(1)1997年4~11月采自济南成年树(JN9707-11);(2)1998年采自郯城(T),1年生(A)、3年生(B)、5年生(C)、10年生(D)、成年树(E)(由郯城药检所张现玉主任药师帮助采集)。甲醇为色谱纯,石油醚(30℃~60℃)及醋酸乙酯为分析纯。2方法和结果2.1u3000mlmin-1,标准曲线2,3,5,10.3.3.3.3.3.3.3.3.3.3.4细胞paras色谱柱:SUNIERKromasilC18(5μm,4.6mm×250mm),流动相:33%的甲醇,流速:1mL·min-1,检测示差(RIdifferentialrefractometer),灵敏度:2RIU,柱温:30℃,衰减(ATTEN):32,进样量:10μL。在上述条件下,BB、GC、GA、GB色谱峰保留时间分别约为11min,14.5min,29.6min,34min,与其他峰分离完全,理论板数按GA峰计大于5000,见图1。2.2线性关系的考察精密称取GA、GB、GC、BB对照品加甲醇制成每1mL分别含1.35,1.35,1.08,2.22mg的混合溶液作为对照品储备液,分别吸取上述溶液1,2,3,4,5mL稀释定容至10mL,摇匀,分别精密吸取上述溶液10μL,注入高效液相色谱仪,按上述条件测定,求出GA、GB、GC、BB进样量与峰面积的直线回归方程分别为:Y=1.049×10-6X+0.091r=0.9997Y=1.105×10-6X-0.166r=0.9997Y=1.146×10-6X-0.074r=0.9993Y=1.070×10-6X-0.505r=0.9994进样量分别在1.35~6.75,1.35~6.75,1.08~5.40,2.22~11.1μg范围内与积分面积呈良好的线性关系。2.3加标回收率的测定精密称取TC9809号(含量见表1)样品粉末(过4号筛)约1g,置索氏提取器中,加石油醚(30℃~60℃)100mL回流提取2h,弃去石油醚,挥干,分别精密加入对照品GA0.675mg、GB0.675mg、GC0.54mg、BB1.11mg。再加入甲醇适量,同样品测定项测定,计算出回收率(n=5)分别为100.8%,99.3%,97.1%,102.4%;RSD分别为3.5%,1.4%,2.5%,2.8%。2.4进样稳定性试验精密吸取对照品储备液3mL加甲醇稀释定容至10mL,按上述色谱条件连续进样5次,测得GA、GB、GC、BB峰面积RSD分别为3.1%,3.5%,1.5%,1.8%。表明仪器精密度良好。2.5稳定性试验对供试品溶液在0,1,2,4,8,12,24h进样测定,峰面积无显著性变化,表明供试品溶液在24h内稳定。2.6供试品溶液的制备精密称取本品粉末(过4号筛)2~5g,置索氏提取器中,加石油醚(30℃~60℃)100mL回流提取2h,弃去石油醚,挥干,加甲醇适量回流提取4h,提取液浓缩至少量,加聚酰胺(80~100目)1g,拌匀,挥干,转移至聚酰胺小柱上(自装,80~100目,4gϕ1.0cm),用30%乙醇200mL洗脱,洗脱液浓缩至约30mL,放冷,转移至分液漏斗中,用醋酸乙酯提取4次,每次30mL,合并提取液,用5%醋酸钠和水各40mL洗涤,合并醋酸钠及水液,用醋酸乙酯30mL提取1次,分取醋酸乙酯层,用水20mL洗涤1次,弃去水液,合并醋酸乙酯提取液,蒸干,残渣用甲醇溶解定容至5mL,滤过,滤液作为供试品溶液。精密吸取对照品储备液3mL,加甲醇定容至10mL,即得对照品溶液。分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,按上述条件测定,测得34批样品含量(n=2)见表1。3银杏叶的生长过程从实验结果可以看出,各种类型银杏叶内酯含量变化较大,4种银杏内酯中,BB含量最高,GA次之,GB、GC含量较低,其相对比例变化较大;银杏叶中银杏内酯一般为春天低