临床生化检验基础

临床生物化学检验基础用户服务部华北区检验临床1精选课件主要内容生化检验的概述生化检验的对象生化检验的作用生化检验的手段2精选课件

临床生化检验：主要是运用物理学、化学、生物学等实验室技术和方法，通过感官、试剂反应、仪器分析和动物实验等手段，对病人的血液、体液、分泌液、排泄物等标本进行检验，以获得反映机体功能状态、病理变化或病因等的客观资料。

概述3精选课件标本种类：血液尿液脑脊液胸腹水精液

对象胃液十二指肠液羊水唾液汗液组织液4精选课件血液的组成血液标本的采集标本的处理标本的运输和保存5精选课件血液的组成血液由血细胞和血浆组成的红色粘稠混悬液。血细胞：45％～50％血浆：50％～55％水分：91％～92％蛋白质有机物无机盐代谢产物6精选课件血液的组成血液标本类型：全血：离体血液立即与适量抗凝剂混合，轻轻混匀，则可避免凝固，从而得到抗凝全血。血浆：将抗凝全血在一定条件下将其离心沉淀后的上层浅黄色的液体。

血清：离体血液自行凝固收缩析出淡黄色透明的液体。7精选课件血清和血浆的区别：血清中缺少了凝血系统中的某些凝血因子（凝血过程中被消耗）如凝血因子Ⅰ（纤维蛋白原）、凝血因子Ⅱ（凝血酶原）、凝血因子Ⅴ（易变因子）、凝血因子Ⅷ（抗血友病球蛋白AHG）等。血液的组成8精选课件分析物与血浆均值比较的差异血清与血浆差异的原因钾+6.2％细胞的溶解、特别是血小板无机磷+10.7％来自细胞的释放总蛋白-5.2％纤维蛋白原的作用氨+38％血小板溶解、谷胺酰胺水解乳酸+22％细胞释放除了血小板溶解外，有时候血清高钾因溶血与极度的白细胞溶解有关（白细胞计数＞50G/L）。考虑到血小板对全血的影响，可以推算：血小板计数达100G/L，即平均使血清与血浆的钾含量差0.11mmol/L。血清与肝素血浆的差异（一）9精选课件总蛋白白蛋白TSH转铁蛋白AST肌酸激酶总胆红素钠铁胆碱酯酶碱性磷酸酶直接胆红素甘油三酯LDH无机磷钾GGT三碘甲状腺素乳酸血清与肝素血浆的差异（二）10精选课件标本的采集采血方法：毛细血管法：血球计数仪、微量分析等。静脉采血法：生化检验常用，真实反应。动脉采血法：个别特殊检验，血气分析

注意:生化分析仪测量CO2问题11精选课件标本的采集静脉采血法注意事项：

抽血姿势抽血时间饮食运动溶血脂血药物12精选课件标本的采集溶血：必须避免（1）注射器和容器不干燥、不清洁；（2）压脉带捆扎时间太长，淤血过久；（3）穿刺不顺损伤组织过多；（4）抽血速度太快；（5）血液注入容器时未取下针头或用力推出产生大量气泡；（6）抗凝血用力振荡；（7）全血放置时间过久；（8）离心机速度过快。13精选课件标本的处理抗凝剂：枸橼酸钠：出凝血疾病检验和ESR；草酸钠：出凝血疾病检验；乙二酸四乙酸盐：EDTA-K2/Na2，血RT；双草酸盐：草酸钾（钠）/草酸铵，Ht等；氟化钠：适于血糖，抑制糖酵解、血清酶；肝素：多种生化分析，临床常用抗血栓药对部分生化项目有影响；14精选课件标本的处理分离：用离心机在符合要求的转速下离心10min得到生化标本；转速选择：RCF＝1.118×L×（r/1000）2

RCF：相对离心力，在生化检验分析中的标本相对离心力在1500～1800；L：离心半径，以mm计算，即离心管至旋转轴中心距离；r：转子每分钟转速。15精选课件分离注意事项：转速不够，离心不彻底，不能很好的将血清分离，在血清中容易夹杂纤维蛋白，在测试过程中容易堵针，影响测试。转速过高，容易造成溶血。例：10cm离心半径的离心机，我们要得到生化分析的合格标本，应选择3662～4012之间转速，离心10min即可。标本的处理16精选课件标本的运输和保存运输：分离出的血清或血浆，运送过程中注意容器的密闭性、注意避光、避免剧烈震荡。保存：不能及时检测或需保留以备复查时，一般密闭存放于4～10℃冰箱中，以免水分蒸发造成标本浓缩或细胞内外交换影响结果。

17精选课件手段检测仪器检测试剂检测方法操作人员校准品18精选课件检测仪器生化分析仪：进行设置参数、试剂位置、定标测试、质控测试后就可以上机测试标本。。保证生化结果准确性的因素除包括样本质量外还包括整个检测系统的工作状态，检测系统的工作状态保持最佳，除了保证仪器所在实验室的环境，仪器参数的正确编制，配套校准品试剂的使用、定期校正、定期保养等都是保证检测质量的重要方面。19精选课件检测试剂试剂的分类：干粉试剂：易保存、便宜，复溶瓶间差大，效期短，浪费；液体试剂：稳定性好，效期长，浪费少；双试剂：消除干扰物影响；20精选课件试剂指示系统和化学原理NAD+－NADH(NADP+－NADPH)p-NP和p-NAH2O2偶联其它显色系统抗原抗体反应21精选课件检测试剂NAD+－NADH(NADP+－NADPH)指示系统：NADH和NADPH在340nm有最大吸收峰，而NAD+和NADP+在340nm无吸收峰，利用其偶联的脱氢酶(工具酶)反应，根据340nm吸光度的变化，可以测定物质的浓度或活性。目前利用此指示系统进行测定的临床项目有：ALT、AST、CK、LDH、CK-MB、α-HBDH、Glu（己糖激酶法）、UREA、NH4+、CO2等。22精选课件NAD+－NADH(NADP+－NADPH)指示系统：ALT为例：R1：NADH、乳酸脱氢酶（LDH）R2：L-丙氨酸、α-酮戊二酸

ALTL-丙氨酸+α-酮戊二酸→丙酮酸+L-谷氨酸

LDH丙酮酸+NADH+H+→L-乳酸+NAD++H2O检测试剂23精选课件p-NP和p-NA指示系统：p-NP和p-NA在405nm有特征性吸收峰，根据405nm吸光度的变化，可以测定物质的浓度或活性。目前利用此指示系统进行测定的临床项目有ALP、r-GT、AMY等。检测试剂24精选课件p-NP和p-NA指示系统：ALP为例：R1：AMP缓冲液、MgCl2

R2：对硝基苯磷酸盐

ALP对硝基苯磷酸盐+H2O→磷酸盐+对硝基苯酚检测试剂25精选课件检测试剂H2O2偶联的指示系统：H2O2在过氧化物酶的作用下，可使单一个或成对的无色的色素原氧化成有色的色素，导致某一波长吸光度的增加，因此可用来测定物质的浓度或活性。目前利用此指示系统进行测定的临床项目有TC、TG、HDL-C、LDL-C、Glu（氧化酶法）、Cr、UA等。26精选课件检测试剂H2O2偶联的指示系统：GLU为例：R1：4-氨基安替吡啉、抗坏血酸氧化酶R2：葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、酚。

GOD葡萄糖+O2+H2O→葡萄糖酸+H2O2

POD2H2O2+4-氨基安替吡啉+酚→醌亚胺+4H2O

27精选课件检测试剂抗原抗体反应指示系统：特异性抗体与抗原(待测物质)在相应的缓冲环境下反应生成抗原抗体复合物，形成一定的浊度，导致特定波长透光率的改变。在抗体过剩的前提下，改变程度与抗原浓度成正比。目前利用此指示系统进行测定的临床项目有apoAI、apoB、Lp(a)、IgG、IgA、IgM、C3、C4、CRP等。28精选课件检测试剂抗原抗体反应指示系统：载脂蛋白为例：R1：磷酸盐缓冲液pH7.5,表面活性剂，防腐剂，稳定剂；R2：羊抗人apoAl（apoB）抗血清，防腐剂，稳定剂。抗原(血清中apoAl,apoB)+抗体(R2)

缓冲环境

>抗原抗体免疫复合物。29精选课件检测试剂其他显色反应：TP为例：蛋白质中的肽键在碱性溶液中与铜离子作用产生紫红色络合物，导致540nm吸光度的增加，增加程度与蛋白质的含量成正比。

碱性条件肽键+Cu2+→紫红色络合物

30精选课件检测试剂试剂使用注意事项：干粉试剂在干粉状态下保存时间长，复溶后一般不超过3天；配成“工作液”后保存时间很短，一般1～2天；双试剂不能擅自改成“工作液”。31精选课件检测试剂试剂失效的判定方法：通过试剂空白吸光度、颜色、PH值、查看反应曲线等来判断。通过观看以往的正常反应曲线很重要；试剂空白吸光度在试剂说明书中说明，如AST、ALT，通常应在1.5A以上等32精选课件试剂线性范围：生化试剂线性范围是指测试结果与反应度R成线性的范围，根据试剂说明书给定输入。生化试剂线性范围实际上是指该试剂所能检测到的样本最高浓度。当出现超出线性范围时，应对样本进行稀释后重新测量。检测试剂33精选课件常用生化项目按化学性质分类：酶类底物代谢类无机离子类

特种蛋白类检测试剂34精选课件常用生化项目按临床性质分类：肝功能肾功能血糖血脂心肌酶谱检测试剂胰腺炎无机离子痛风中毒前列腺疾病免疫性疾病免疫炎症反应35精选课件常见生化项目之间的关系：GLO＝TP－ALBA/G＝ALB/GLOO/P＝AST/ALTI-BIL＝T-BIL－D-BILAⅠ/B＝ApoAⅠ/ApoBCK-MM＝CK－CK-MBLDL-C＝T-CHO－HDL-C－TG/5（重量单位）

＝T-CHO－HDL-C－TG/2.2（法定单位）AG＝Na＋―Cl－―HCO3－

＝Na＋＋K＋―Cl－―HCO3－

检测试剂36精选课件检测方法生化基本原理：

Lambert-Beer定律，即吸光度与溶液的浓度和液层的厚度的乘积成正比。A=-LogT=-Log(It/I0)=ε

CL当溶液液层的厚度L，光的波长和其它条件均固定不变ε，则所得的吸光度与溶液中有色物质的浓度成正比：A=kC，k＝εL37精选课件方法：吸收光谱法：比色分析基于溶液对光的选择性吸收而建立起来的一种分析方法。

比浊法：通过监测物质对光的散射透射强度来测定的方法，比浊法是一种浊度测定，而不是比色测定。

检测方法38精选课件吸收光谱法：终点法一点终点法二点终点法动力学法（零级动力学法）固定时间法（一级动力学法）检测方法39精选课件终点法：一点终点法公式：

C样本＝(A样本－A试剂空白/A标准－A试剂空白)×C标准

F＝C标准/（A标准－A试剂空白）C样本＝（A样本－A试剂空白）×F反应度计算：R＝A样本－A试剂空白检测方法40精选课件终点法：二点终点法（样本空白法）公式：

C样本＝(A样本－A样本空白/A标准－A标准空白)×C标准

F＝C标准/（A标准－A标准空白）C样本＝（A样本－A样本空白）×F反应度计算：R＝A样本－A样本空白检测方法41精选课件动力学法：因数法：△A样本＝A样本－A试剂空白C样本＝（∆A样本/min）×F∆A样本/min：每分钟样本吸光度变化率反应度计算：检测方法42精选课件动力学法：摩尔消光系数法

：C样本＝

∆A样本/min×Vt×1000

ε×VS×dF＝

Vt×1000

ε×Vs×d＝

1000

ε×d

×(1+

)VRVSε：摩尔消光系数d:比色杯光径（cm）

Vt：总反应量

VS：样品量VR：试剂量

检测方法43精选课件固定时间法：固定时间法公式：∆A＝At4－At3C样本＝(∆

A样本/∆

A标准)×C标准

F＝C标准/∆

A标准

C样本＝∆A样本×F反应度计算：R＝（At4－At3）/（t4－t3）

检测方法44精选课件检测方法比浊法：免疫比浊法：免疫透射比浊法：是在光源的光路方向测量透射强度，用终点法测量。用于血清特种蛋白的检测。免疫散射比浊法：常用于血凝仪中。化学比浊法45精选课件校准品定标：浓度和反应度关系，找K值。

K＝C标准/（A标准－A试剂空白）决定因素：1、标准液浓度，最好是血清基质，否则可能会因为基质效应而影响定标效果。2、标准液吸光度与试剂空白吸光度要准确。吸光度受仪器状况、试剂状况的影响，如果您的仪器相当稳定，试剂是影响K值的一个主要因素。46精选课件何时定标？更换试剂厂家；同一试剂厂家但更换批号；试剂过长时间使用。校准品47精选课件校准品定标方法：

线性定标单点线性两点线性多点线性

非线性定标

SPlineLogistic-Log4P

Logistic-Log5P

Exponential5P48精选课件校准品单点线性：

49精选课件校准品两点线性：

50精选课件校准