九牛造三个品种总鞣质和没食子酸的测定

九牛造三个品种总鞣质和没食子酸的测定

九牛生产是一种常见的草药。它被鉴定为蓼科植物的四角形甲状植物。suffltimsumm.var.pergrace（h.）sam.植物和抱茎蕨p.a.mpier.d.don的根。主流品种是宝草。具散淤止血、理气止痛的功效;在四川民间还被用于壮阳,具收涩固精之效。其根和根茎中含有大黄素、大黄酸、大黄酚和鞣质等。文献报道,支柱蓼鞣质含量达20.75%(高锰酸钾法)。印度研究抱茎蓼较多,报道其根茎还含有大黄素甲醚、豆甾醇和三萜烯化合物β-榄香精。现通过TLC实验,发现三种九牛造均含有没食子酸。为研究该药材的有效成分,现分别用皮粉法和薄层扫描法测定了三种九牛造中总鞣质和没食子酸的含量。1实验部分1.1材料、试剂和仪器支柱蓼、细穗支柱蓼、抱茎蓼均系1998年7月自采于四川峨眉山,品种均经作者鉴定。日本岛津CS-930薄层扫描仪;微量注射器。皮粉(上海益民制革厂);薄层层析硅胶G(青岛海洋化工厂);没食子酸对照品(中国药品生物制品检定所);所用试剂均为分析纯。1.2水溶性部分的测定测定按文献方法(皮粉法)进行。各取三种九牛造药材粉末(过3号筛)约10g,精密称定,置锥形瓶中,加蒸馏水150ml,置水浴上加热30分钟,常水中冷却至室温后移入250ml量瓶中,水稀释至刻度,滤过,滤液作为供试液。1.2.1总水溶性部分的测定精量供试液25ml,蒸干,残渣于105℃干燥3小时,称重。1.2.2不与皮粉结合的水溶性部分的测定精密量取供试液100ml,加皮粉(干燥品)6g,振摇15分钟,滤过,精密量取滤液25ml,蒸干,残渣于105℃干燥3小时,称重。1.2.3皮粉水溶性部分的测定精密量取蒸馏水100ml,以下操作与“1.2.2”同。鞣质的含量计算按药典公式进行,结果支柱蓼细穗支柱蓼、抱茎蓼中的总鞣质含量分别为7.386%、6.265%、8.543%,三者RSD分别为2.18%、2.74%、1.21%(n=4)。1.3标准品溶液的线性参数和稳定性试验1.3.1供试液和对照液的制备精密称取三种九牛造粗粉各2g,分别加入蒸馏水40ml回流提取2小时,乙酸乙酯萃取(20ml×4),合并萃取液,回收乙酸乙酯至干,再用乙酸乙酯定容于5ml量瓶中作为供试品液。精称没食子酸对照品2.2mg,加乙酸乙酯定容于2ml量瓶中,制成对照品液。1.3.2实验条件0.3%CMC-Na的硅胶G板,室温干后于105℃活化30分钟,置干燥器中备用。展开剂为甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶1),上行展开,展距10cm。以1%三氯化铁乙醇液显色后,立即盖上同样大小的玻板,胶布固定。单波长反射法锯齿扫描,λ=585nm,线性参数SX=3(图1)。1.3.3线性关系考察用微量进样器精密吸取没食子酸对照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μl,点于同一块薄层板上,依法展开,显色,扫描测定斑点峰面积积分值。以斑点峰面积积分值为纵坐标,点样量为横坐标,求得回归方程为:Y=11139.3770X-13421.3477,r=0.9952。结果表明没食子酸在2.2~11.0μg范围内线性关系良好。1.3.4稳定性试验精密吸取对照品溶液和供试品溶液点于薄层板上,按上述条件展开,显色后20小时内峰面积基本稳定,对照品RSD为3.193%,供试品RSD为2.079%(n=4)。1.3.5精密度试验同板效应取对照品溶液和同一供试品溶液,取相同的点样量于同一薄层板上,依法显色,扫描测定,结果对照品的RSD=2.019%(n=4),供试品的RSD=1.198%(n=6)。异板效应取对照品溶液和同一供试品溶液,各取相同的点样量,点于4块薄层板上,依法显色,扫描测定,对照品的RSD=1.664%(n=4),供试品的RSD=1.890%(n=4)。1.3.6样品提取方法考察取同一采集号的支柱蓼,分别用蒸馏水回流提取3次共6小时和超声提取3次共2小时,依法展开,显色,扫描测定,结果两种方法提取没食子酸的含量分别为0.07367%、0.02765%,RSD分别为3.78%、1.48%(n=3)。说明回流提取方法优于超声提取方法。1.3.7加样回收实验精称已知含量的支柱蓼6份,分别加入适量对照品,按上述方法制备,点样,显色,测定,对照品的平均回收率为102.42%,RSD=3.39%(n=6)。1.3.8供试品测定精密吸取供试品液10μl,对照品溶液2μl和4μl,交叉点于同一薄层板上,按上述条件展开,显色,扫描,用外标两点法计算。结果支柱蓼、细穗支柱蓼、抱茎蓼中的没食子酸含量分别为0.074%、0.053%、0.061%,RSD分别为3.78%、2.62%、3.37%(n=3)。2中药九牛造的色谱结果已解决的问题2.1支柱蓼的测定结果与文献报道的高锰酸钾法测定结果20.75%相差甚大,而与皮粉法测定结果11.76%相差较小,这是否与测定方法、药材产地、采收季节及加工方法有关。确切原因有待进一步探讨。2.2通过三种药材水提、乙酸乙酯萃取液的薄层色谱,首次发现了三种九牛造均含有没食子酸。2.3薄层扫描法测定中药九牛造中没食子酸的含量,简便而迅速,所用色谱条件经反复试验,证明重复性