石杉碱甲的药理作用及机制研究进展

石杉碱甲的药理作用及机制研究进展

阿尔伯茨病（ad）也称为早老性脑瘫，是一种由多原因引起的神经退行性疾病，具有进展性记忆和认知功能缺陷的特点。我国65岁以上的北方城镇居民AD的患病率为6.9%,接近欧洲(6.4%)和日本(7.0%),AD已成为老年人群中继心血管病、恶性肿瘤、中风之后的第四大“杀手”。随着人均生存年龄的延长,AD将给社会和医疗保健系统带来沉重负担。AD的典型症状与脑内胆碱能功能缺陷有关,病理改变以老年斑(senileplaque,SP)和神经纤维缠结(neuronalfibriltangle,NFT)为特征。血管性痴呆(vasculardementia,VD)的病理改变主要为广泛性脑动脉硬化及脑梗死。AD和VD两者在流行病学、病因学、病理学、发病机制及临床表现上存在诸多交叉性。大量证据表明,AD和VD的许多共同诱因,如老龄化、脑血管病变、脑外伤、高血压、低血压、动脉粥样硬化等,都能损害或减少脑血流循环功能,导致胆碱能神经递质水平降低和某些敏感脑区神经元、突触丢失等。目前开发的治疗AD有效药物乙酰胆碱酯酶抑制剂不仅对AD患者的症状有一定的疗效,也能改善VD病人的记忆障碍。研究表明,细胞凋亡和氧化应激参与了AD和VD的病理过程,自由基引起的氧化损伤被认为是不同原因诱发神经退行性疾病的最后共同通路,这些疾病除了AD和VD,还包括动脉粥样硬化、脑缺血、癫痫、肌萎缩侧索硬化、帕金森氏症等,提示对抗细胞凋亡和氧化应激的药物有可能阻止上述疾病的病程发展。发生于胚胎期与新生儿期的脑缺血缺氧损伤的幸存患者,可产生不同程度的智力障碍、脑瘫及感觉运动功能失调等,严重影响患儿的健康生长及其家庭的生活。迄今临床实践中仍未找到有效的治疗策略。近年动物试验表明,治疗AD的药物石杉碱甲对它可能有治疗前景。目前,开发治疗AD药物是基于对AD患者脑内胆碱能神经元功能显著低下,导致中枢神经系统乙酰胆碱水平降低。理论上可有不同途径增强脑内胆碱能传递功能,目前仅乙酰胆碱酯酶抑制剂在AD的对症治疗中取得明显进展,是一类有治疗前景的药物。美国FDA已于1993、1996、2000和2002年分别批准胆碱酯酶抑制剂他克林(CognexR,tacrine),安理申(AriceptR,donepezil),艾斯能(ExelonR,rivastigmine),加兰他敏(ReminylR,galanthamine)作为AD的治疗药物。但是,已有的胆碱酯酶抑制剂还存在半衰期短、较严重的外周胆碱能系统副作用,以及他克林在治疗过程中有40%左右肝毒性发生率等缺点,它们的临床应用前景受到限制。因此,寻找作用时间长、副作用小的新一代胆碱酯酶抑制剂仍是国际各大药厂关注的热点。全世界目前正在开发研制约有40个胆碱酯酶抑制剂。石杉碱甲((-)-huperzineA)是从民间草药千层塔(蛇足石杉,Huperziaserrata)中分离到的一种新型石松类生物碱有效单体。1994年成功开发应用于治疗AD,药品商品名“哈伯因”。与其他目前开发用于治疗AD的药物相比,石杉碱甲的化学结构独特,对脑内乙酰胆碱酯酶具有极高选择性抑制,提高脑内乙酰胆碱水平作用持续达6小时,优于加兰他敏、安理申或他克林。石杉碱甲对多种实验性记忆损害均有改善作用。国内大量临床研究也已证明石杉碱甲对AD和VD等神经退行性疾病有一定的治疗作用,外周副作用甚微。本文就石杉碱甲的药理作用特征及其临床研究作一概述。1石杉碱甲的药代动力学对大鼠体外脑皮层乙酰胆碱酯酶的活力抑制作用测试表明,石杉碱甲对酶活力的抑制作用强于他克林、加兰他敏和艾斯能,稍弱于安理申。但是,石杉碱甲对血清丁酰胆碱酯酶产生抑制作用所需浓度远大于安理申、他克林、艾斯能和加兰他敏。因此,石杉碱甲对乙酰胆碱酯酶具有最大选择性抑制作用。石杉碱甲对大鼠、牛及人红细胞膜乙酰胆碱酯酶具有相似于大鼠皮层的作用强度,但是它对人血清丁酰胆碱酯酶的抑制作用较弱。大鼠整体试验表明,石杉碱甲对皮层、海马、中隔、延髓、小脑和下丘脑的乙酰胆碱酯酶活力均有明显抑制作用。石杉碱甲的抑制作用呈现明显的剂量依赖关系。按等摩尔剂量计算,口服石杉碱甲对皮层乙酰胆碱酯酶的抑制作用强度分别是安理申和他克林的24和180倍。大鼠腹腔注射或口服石杉碱甲后对乙酰胆碱酯酶的抑制作用相似。但是,腹腔注射他克林或安理申则对脑乙酰胆碱酯酶和血清丁酰胆碱酯酶产生的抑制作用强于口服的效果。侧脑室内注射石杉碱甲后,明显抑制脑内乙酰胆碱酯酶活力,其抑制强度稍弱于安理申,但比他克林强,表明石杉碱甲具有更好的口服生物利用度,且更易透过血脑屏障。口服石杉碱甲0.36mg/kg后30、60min,大鼠全脑乙酰胆碱酯酶达到最大抑制,且作用可持续达360min。石杉碱甲给药后360min,对血清丁酰胆碱酯酶的抑制作用已消失,而安理申和他克林对血清丁酰胆碱酯酶分别仍有20%和46%抑制。石杉碱甲多次给药或单次给药对酶的抑制作用没有显著性差异,表明石杉碱甲在重复给药时不会产生耐受性。大鼠红细胞膜乙酰胆碱酯酶的抑制作用双倒数作图曲线显示,不同浓度石杉碱甲的反应曲线相交于第二象限,表明石杉碱甲属于混合竞争型抑制剂。根据测得的各胆碱酯酶抑制剂的解离常数(Ki),石杉碱甲约比他克林、加兰他敏及安理申各强4、9和0.5倍。石杉碱甲对大鼠红细胞膜乙酰胆碱酯酶活力的抑制作用,并不伴随石杉碱甲与酶温育时间的延长而增强。石杉碱甲与红细胞膜乙酰胆碱酯酶复合物经反复清洗5次后,可使乙酰胆碱酯酶活力恢复到94%,石杉碱甲的作用不同于不可逆胆碱酯酶抑制剂异丙氟磷(DFP),证明石杉碱甲是一种可逆乙酰胆碱酯酶抑制剂。石杉碱甲对不同脑区内乙酰胆碱酯酶G1和G4亚型的抑制作用与他克林、安理申、毒扁豆碱及艾斯能有很大的区别。石杉碱甲和安理申对脑皮层G4亚型的抑制作用最强,而对G1作用最强的是安理申和他克林;石杉碱甲和毒扁豆碱对海马G4亚型的抑制作用最强,而对G1作用最强的是安理申和他克林;在纹状体中,石杉碱甲和安理申对G4亚型的抑制作用最强,而对G1作用最强的是安理申。尽管上述胆碱酯酶抑制剂对于不同脑区不同亚型乙酰胆碱酯酶的作用各不相同,但是石杉碱甲始终表现出对G4很强的抑制作用。在哺乳动物大部分脑区中含量最多的亚型为G4亚型,细胞外G4亚型是调节脑内乙酰胆碱含量的最主要的乙酰胆碱酯酶,石杉碱甲对于G4亚型乙酰胆碱酯酶的专一性抑制作用更有利于AD的治疗。应用电鳐乙酰胆碱酯酶-石杉碱甲复合物2.5AA分辨率的晶体结构研究证明,与其他的乙酰胆碱酯酶抑制剂如他克林及二甲铵相比,石杉碱甲与酶的连接更为紧密,特异性更高。这种精确结构确认了主要蛋白-配体间的相互作用决定了抑制剂与乙酰胆碱酯酶连接的强度。计算机辅助分子对接研究和乙酰胆碱酯酶-石杉碱甲复合体的高分辨晶体结构的数据为石杉碱甲的高选择性,以及此复合体独特的热力学稳定性提供了一个有价值的合理的解释。例如,石杉碱甲能与乙酰胆碱酯酶位点内的酪氨酸337形成一个额外的氢键,此位点仅存在于哺乳动物乙酰胆碱酯酶的同源蛋白中,而不存在于电鳐乙酰胆碱酯酶及丁酰胆碱酯酶中。这种特殊的相互作用有助于解释石杉碱甲对哺乳动物乙酰胆碱酯酶比其他类型的酶具有更强抑制特性。此外,在甘氨酸117和甘氨酸118之间起挡板作用的肽键(仅通过连接石杉碱甲而介导)可以解释为什么石杉碱甲比其他通常使用的胆碱酯酶抑制剂具有更长的作用时间。2石杉碱甲对大鼠乙酰胆碱的活性影响石杉碱甲能明显升高大鼠全脑乙酰胆碱水平,全脑乙酰胆碱水平与对照组相比的增长率呈线性增加,乙酰胆碱的升高比对乙酰胆碱酯酶的抑制出现时间稍晚。石杉碱甲提高大鼠大脑皮层乙酰胆碱水平比安理申和艾斯能更强,且作用持续的时间更长。乙酰胆碱水平的升高在给药后至少能持续6h。石杉碱甲对大鼠额叶皮层及全脑的乙酰胆碱的水平和乙酰胆碱酯酶的活力的作用呈反向关系。石杉碱甲提高乙酰胆碱水平的作用随脑区的不同而有差异:给药后60min额叶和顶叶皮层升高最明显,海马和延髓则分别在给药后30min和5min出现中等程度的升高,纹状体在给药后30min仅呈现轻微的升高。腹腔注射石杉碱甲0.1及0.3mg/kg,皮层乙酰胆碱水平分别升高54%和129%。由于AD患者大脑皮层的乙酰胆碱水平较低,石杉碱甲具有对皮层区域的选择性作用有益于本病的治疗。石杉碱甲对脑内胆碱水平及胆碱乙酰转移酶活性均无作用,提示石杉碱甲升高脑内乙酰胆碱水平的作用,不是通过增强乙酰胆碱的合成介导。石杉碱甲在1～100μM浓度对电刺激诱发大鼠离体皮层脑片的3H-乙酰胆碱释放没有影响。而他克林和毒扁豆碱则抑制其释放。石杉碱甲全身给药或微透析局部给药均能明显升高脑内去甲肾上腺素和多巴胺水平。乙酰胆碱水平的升高分别是去甲肾上腺素水平和多巴胺水平升高的10倍和6倍。已有研究证据表明,胆碱能和单胺能系统之间的相互作用参与认知过程,提示石杉碱甲调控记忆增强作用有增强去甲肾上腺素和多巴胺释放的参与。3灌流石杉碱甲的特性与损害作用石杉碱甲在1μM浓度时能增加小鼠离体单侧膈神经肌纤维波幅、峰值时间及肌纤维微终板电位的半衰期。石杉碱甲对肌纤维的静息膜电位没有影响,提示石杉碱甲的作用可能不是通过突触后的机制介导。石杉碱甲不增加终板电位的平均量子量和微终板电位的频率。因而,可排除突触前作用的可能性。与安理申和他克林相比,石杉碱甲不引发巨微终板电位和慢微终板电位,提示促进末梢处乙酰胆碱的释放不可能是非特异性作用。因此,石杉碱甲促进神经肌肉接头处乙酰胆碱的传递可能是通过抑制乙酰胆碱酯酶的作用介导。用细胞内记录技术研究蟾蜍椎旁神经节获得的结果也表明,石杉碱甲促进递质释放的非特异性机制可以被排除。在标本槽内灌注石杉碱甲后膜电位和输入阻抗没有明显的改变,表明石杉碱甲不改变突触后膜的电学性质、通道功能及受体敏感性,故其作用为非突触后机制。灌流石杉碱甲能增强节前刺激诱发的顺行动作电位的放电率和外源性乙酰胆碱电位,其作用强度与时间过程基本一致,表明石杉碱甲的促进作用没有突触前机制,上述结果与石杉碱甲不影响乙酰胆碱的合成速度以及释放的过程是一致的。石杉碱甲与其它胆碱酯酶抑制剂的作用相似,不影响卡巴胆碱电位。石杉碱甲不同于毒扁豆碱和他克林,在50或100μM高浓度时对胆碱能突触传递仍表现出增强作用,表明石杉碱甲是一种高选择性的可逆胆碱酯酶抑制剂。静脉注射石杉碱甲能激活清醒家兔的脑电图,表现为低频成分减少、皮层区的主频率功率也明显减少,同时海马主频率明显右移至θ节律。石杉碱甲的上述作用能被东莨菪碱而不能被无法透过血脑屏障的丁胺东莨菪碱(scopolaminebutylbromide)所逆转,表明石杉碱甲的上述作用具胆碱能特征。石杉碱甲对胆碱高亲和力转运有抑制作用。连续腹腔内注射石杉碱甲,可使海马脑区高亲和胆碱转运减少,但对纹状体脑区没有影响。石杉碱甲的此作用由于可随时间而被完全逆转,及不通过直接与转运体相互介导,提示可能与石杉碱甲对胆碱酯酶抑制后高亲和胆碱转运对乙酰胆碱增加反应的调控,而不是直接作用于转运体。应用3H-二苯羟乙酸喹宁酯和3H-左旋烟碱的特异性结合研究显示,石杉碱甲不同于他克林,对胆碱受体几乎没有直接作用。石杉碱甲与3H-左旋烟碱及3H-二苯羟乙酸喹宁酯特异性结合20%所需的浓度分别为20μM及160μM,表明石杉碱甲对3H-左旋烟碱比对3H-二苯羟乙酸喹宁酯的特异性结合强得多。AD患者皮层内低水平乙酰胆碱可能维持突触前烟碱受体处在活性状态而不在失敏状态。在此种状态下,烟碱受体可能对石杉碱甲的刺激更为敏感。低剂量石杉碱甲对中枢烟碱样受体具有的较强作用可能有益AD治疗。4抗氧化应激作用AD是一种有多病因因素参与的神经退行性疾病,开发新一代治疗AD药物应具有多靶点作用。对石杉碱甲药理作用的深入研究表明,它的药理作用不仅抑制胆碱酯酶和提高脑内胆碱能功能,能够对抗多种毒剂诱发的神经细胞毒性作用,例如β-淀粉样肽(β-amyloid,Aβ)、过氧化氢、去血清、缺血缺氧等诱发的氧化应激和细胞凋亡等。AD的主要病理学特征包括老年斑和神经纤维缠结,大量研究表明两者在AD病理过程中起重要作用,其中老年斑是由39～43个氨基酸的Aβ组成,它是由跨膜糖蛋白β-淀粉样前体蛋白(APP)经分泌酶水解形成的。最近的研究发现,Aβ可能是胆碱能神经系统高强度、高选择性的负性调节物,Aβ的形成和沉积被认为是AD发病的关键所在。因此,调节APP的异常代谢减少Aβ的形成或消除Aβ的毒性等策略有益于AD治疗。AD病人脑组织的尸检研究发现,脑组织内的生物大分子如蛋白质、DNA、磷脂等的氧化产物明显升高,大脑皮层额叶、枕叶、顶叶及海马等脑区蛋白质氧化产物的含量及海马、梨状核、杏仁核等脑区内脂质过氧化程度均明显升高,抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性则明显下降。已有的研究也表明,Aβ具有明显的神经毒性作用,导致氧自由基增加,损伤神经细胞膜和线粒体DNA,产生氧化应激反应,使神经元更易受到外界环境的影响,例如兴奋性氨基酸谷氨酸的刺激。近年研究发现石杉碱甲具有明显保护神经细胞对抗Aβ产生的毒性作用。Aβ25-35与大鼠PC12细胞或大鼠原代胚胎皮层细胞孵育48h后,神经细胞的存活率、谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶活性均明显降低,而丙二醛水平则明显升高。上述神经细胞与石杉碱甲预先孵育2h,然后再与Aβ孵育,可使Aβ产生的毒性明显减弱:细胞存活率及抗氧化酶活力明显上升,丙二醛水平下降。研究表明石杉碱甲对抗Aβ产生的毒性是与它提高抗氧化酶活力相关联。石杉碱甲也能明显改善老年大鼠衰老导致的氧化应激。大量证据表明氧化应激导致神经细胞退化死亡在AD发病过程中起着重要作用。应用PC12细胞研究证实,石杉碱甲明显对抗过氧化氢引起的细胞活力及抗氧化酶活性下降以及脂质过氧化产物增加等。石杉碱甲的抗氧化作用将有助于延缓、阻止AD发展,值得临床进一步研究。大鼠胚胎皮层、海马及小脑神经细胞试验表明,石杉碱甲在100μM浓度对细胞存活率没有影响,但能减少谷氨酸100μM诱发的神经细胞死亡。石杉碱甲能减少谷氨酸诱导的钙离子流动,但不影响由高钾或钙激活剂Bay-K-8644诱导的细胞内游离钙通道的增加,提示石杉碱甲对神经细胞的保护作用也可能有谷氨酸受体介导的参与。已知在成熟神经系统中,细胞凋亡参与了多种老年性疾病包括AD的发病进程。AD病人尸检的生化和形态学检查显示病人脑内许多神经元发生了凋亡,包括DNA断裂、凋亡小体以及其它的凋亡现象。老年斑的主要组成成分Aβ能使细胞内钙增加,激活细胞内蛋白激酶、磷脂酶,通过一系列的信号转导途径,诱发细胞凋亡,最终导致神经元功能衰竭。因此,开发抗凋亡为靶点的新一代药物将能影响AD的病理变化。石杉碱甲能够对抗多种介质诱导的神经细胞凋亡作用,其中包括过氧化氢、Aβ、蛋白激酶C抑制剂星形孢菌素等。石杉碱甲改善细胞凋亡作用与上调bcl-2基因水平,下调bax和p53的表达,抑制活性氧自由基水平上升和降低Caspase-3活性有关。去血清诱发的皮层原代神经元凋亡的研究发现,石杉碱甲的抗凋亡作用可能是通过抑制线粒体释放细胞色素C,进一步抑制Caspase-3活性片段的形成,阻碍细胞凋亡执行。石杉碱甲的神经细胞保护作用还表现在它对Aβ前体蛋白APP代谢的调节作用。APP是一种跨膜糖蛋白,通常有两种代谢途径:α-分泌酶途径产生非Aβ的C-末端APP和可溶性APPsα,再经γ-分泌酶水解产生三肽蛋白——P3;β-分泌酶途径产生N-末端Aβ,经过γ-分泌酶进一步水解形成39～43的多肽——Aβ。在Flemish,Swedish,British等家族性AD病人中,APP基因发生了突变,改变了APP的正常代谢,增加了Aβ产物的形成,最终导致AD病变。因此,开发具有调节APP代谢的药物有利于AD的治疗。已有研究报道,胆碱酯酶抑制剂如毒扁豆碱、敌百虫等除了对乙酰胆碱酯酶的抑制作用外,还具有调节APP的代谢的作用。大鼠侧脑室内注射Aβ后能导致分泌型APP以及PKC水平下降。石杉碱甲能明显上调PKC水平,增加分泌型APP的表达并改善Aβ引起的学习、记忆障碍。分泌型APP被认为具有神经保护作用,提示石杉碱甲的神经细胞保护作用也可能通过激活PKC,调节α-分泌酶途径,增加分泌型APP水平的环节。近年来有报道提到,谷氨酸受体过度刺激能引起神经元死亡,被认为是许多神经退行性病变如AD的最终的共同通路。因此,如果谷氨酸受体过度刺激引起的兴奋性毒性确实参与了AD的发病过程,石杉碱甲对大脑皮层NMDA受体的拮抗作用可能在疾病早期起到延缓或阻止病程发展。5改变空间学习、记忆障碍的行为,并改善记忆功能多种动物的实验性记忆障碍试验模型研究结果表明,石杉碱甲具有强效改善记忆功能作用。在不同的啮齿类动物模型,如被动电击回避操作、水迷宫方向辨别操作、八臂迷宫空间方向辨别操作[15,68,69,70,71,72]及猴的延迟反应操作,石杉碱甲0.01～0.5mg/kg均能明显地增强学习、记忆功能,石杉碱甲不仅对成年、老年啮齿类动物及老年猴有促智作用,且对东莨菪碱、电击、环己酰亚胺、亚硝酸钠或二氧化碳诱发的认知障碍的啮齿类动物、猴子,及脑内注射胆碱能选择性毒剂AF64A诱发的记忆障碍大鼠,石杉碱甲也均有改善作用。大鼠Morris水迷宫测试结果表明:侧脑室内注射Aβ1-40片段后,诱发空间学习、记忆障碍。但在侧脑室注射Aβ的同时进行腹腔内注射石杉碱甲则能明显改善大鼠的空间学习、记忆障碍。在小鸡被动回避学习模型,上纹体腹核(hyperstriatumventrale,HV)内注射石杉碱甲12.5～50ng,均能明显翻转HV内注射GABA激动剂蝇蕈碱所致的记忆障碍。用成年沙土鼠双侧颈总动脉结扎5min的模型,诱导短暂性全脑缺血,导致明显的空间记忆障碍和海马CA1区神经元缺失等病变。口服石杉碱甲0.1mg/kg,一天2次,连续14天,明显改善上述行为学和脑组织形态学变化,及升高胆碱乙酰转移酶的活性。新生7天大鼠予以左侧颈总动脉永久性结扎合并术后缺氧1h处理,5周后诱导明显的空间学习、记忆障碍,结扎侧的纹状体、皮层和海马脑组织损伤及CA1区神经元缺失。腹腔注射石杉碱甲(0.1mg/kg)连续5周后,明显改善上述行为学和形态学变化。石杉碱甲的改善学习、记忆的作用呈典型的钟形量效关系,过大剂量则损害记忆功能。与毒扁豆碱、加兰他敏及他克林相比,口服石杉碱甲对记忆保持过程的作用持续时间更长。石杉碱甲能明显改善由东莨菪碱诱发的青年猴延迟反应操作记忆障碍,且能提高老年猴操作选择的准确性。老年猴单次注射石杉碱甲10μg/kg剂量的记忆改善作用维持达24h。口服石杉碱甲的改善记忆功能作用比他克林及安理申更强。石杉碱甲对工作记忆的改善作用比对参考记忆更为显著。由于AD患者近事遗忘的表现更为突出,石杉碱甲的此作用有益于AD的治疗。石杉碱甲重复给药,其改善由东莨菪碱诱发的大鼠记忆障碍作用未产生耐受性,与它的抑制乙酰胆碱酯酶的作用相一致。已有的研究结果表明,石杉碱甲的改善认知功能作用不仅通过抑制脑内乙酰胆碱酯酶,提高脑内胆碱能功能,它对GABA能、单胺能系统以及它的神经细胞保护作用等的多环节均可能参与。6放射性活性的分布啮齿类动物和健康青年志愿者的药物动力学研究表明,口服石杉碱甲后吸收迅速,在体内分布广泛,以中等速度从体内消除。大鼠口服或静脉注射3H-石杉碱甲后的药物动力学为开放型二房室模型。口服石杉碱甲的生物利用度为96.9%。放射性活性在小鼠的肾脏和肝脏内分布最高。静脉注射3H-石杉碱甲24h后,从尿中排出量为剂量的73%。24h内放射性自粪便排出的量为剂量的2.8%。3H-石杉碱甲经体内处置后,以原型和水溶性较大的代谢产物排出。小鼠放射自显影的研究表明,3H-石杉碱甲分布在各个脑区,在皮层额顶叶、纹状体、海马及伏隔核脑区分布较为集中。青年健康志愿者口服石杉碱甲的药代动力学研究表明,以带有紫外检测器的反相高效液相色谱仪检测石杉碱甲各时程的血浆内浓度,口服石杉碱甲后的血浆浓度变化符合一室开放模型的一级动力学。石杉碱甲在体内能快速吸收,且分布广泛。石杉碱甲的半衰期比他克林或毒扁豆碱至少长4～17倍。7石杉碱甲的急性毒性石杉碱甲的急性与亚急性毒性作用分别用小鼠、大鼠、兔子及狗进行了检测。与其他的胆碱酯酶抑制剂相比较,石杉碱甲产生流涎副作用很弱。大鼠测试表明,石杉碱甲产生的外周胆碱能副反应弱于安理申和他克林,口服石杉碱甲0.48mg未见肌纤维颤搐或其他的外周胆碱能副反应。石杉碱甲的小鼠LD50剂量分别为口服4.6mg/kg,皮下注射3.0mg/kg,腹腔注射1.8mg/kg和静脉注射0.63mg/kg。阿托品对石杉碱甲产生的毒性有明显的拮抗作用。连续180天给药的亚急性毒性研究结果显示,石杉碱甲对大鼠或狗的肝、肾、心、肺及脑等脏器均未观察到明显的组织病理学改变。石杉碱甲的致突变及致畸作用试验均显示阴性。8石杉碱甲应用效果石杉碱甲(药品商品名哈伯因)于1994年获我国卫生部新药办批准应用于治疗AD及良性记忆障碍等症。石杉碱甲治疗中老年记忆减退和各种类型痴呆的疗效已被国内大量的临床研究证实。100例老年性记忆减退患者经双盲、10词提醒测试,石杉碱甲30μg肌肉注射可使记忆功能明显改善,持续达6h,无明显副作用,优于海特琴600μg肌肉注射。对老年以及老年前期者记忆障碍100例病人也得到类似的治疗效果。66例良性衰老遗忘症病人用石杉碱甲(0.15mg,bid)双盲研究观察到,用药组的记忆量表(MQ)和简易精神状态量(MMSE)表均明显增加,疗前疗末对比差异有显著性意义。轻、中度AD病人口服0.15mg石杉碱甲,也获得类似治疗结果。多发梗死性痴呆或合并老年性痴呆病人56例,老年及初老期记忆障碍患者104例经随机、配对及双盲,以韦氏记忆量表(HDS)评定疗效。石杉碱甲剂量分别为50μg和30μg,经4周和2周治疗后,记忆功能明显改善,仅极个别病人有轻度、短暂的头昏反应。石杉碱甲对50例多发梗死性痴呆的临床治疗总有效率为60%,优于吡硫醇的治疗效果。32例多发性脑梗塞患者经过石杉碱甲(0.15～0.45mg)治疗4周,总有效率为62.5%,治疗后记忆量表均有明显提高。副反应轻微,不需特殊处理,可自行消失。28例AD患者的随机、对照、双盲试验表明,石杉碱甲(200μg,bid)治疗60天后,WMS、长谷川和夫痴呆量表(HDS)、MMSE及日常生活功能量表(ADL)评定均证实治疗组比对照组有明显的提高。国内11所精神卫生中心对119例AD进行了多中心、双盲、安慰剂及平行对照评估研究,选择的患者均符合NINCDS-ADRDA及DSM-Ⅲ-RAD的AD标准。103例AD患者在连续口服石杉碱甲8周后,认知功能以及异常过氧化作用变化均有明显改善。全国15个中心对202例可能或很可能的AD患者的随机和安慰剂双盲研究也证实上述结果。石杉碱甲经12周治疗后,简易精神状态量表平均改善2.7;AD评估量表(ADAS-non-Cog)得分平均改善1.5,临床好转的患者为59.2%;ADL得分平均改善2.4;印象变化量表(CIBIplus)获1～3分的患者为70%,1～2分者为27.8%。与安慰剂组比较,两组间有显著性意义。总的不良反应率石杉碱甲组为3%,均为轻度,一过性反应。一组36例老年性痴呆患者的临床研究报道,经石杉碱甲(0.3mg)治疗8周后,病人的记忆量表、痴呆程度、精神状态、自理生活能力均有不同程度的改善,显效率为61.1%,总有效率为88.9%,均显著优于对照脑复康组,治疗中仅出现轻度外周胆碱能副作用。33例临床确诊为AD的患者经采用石杉碱甲(0.15mg,bid)口服治疗12、24和48周后,患者认知功能改善,有效率分别为50.0%、63.6%和66.7%,3者间无显著性差异,服用石杉碱甲后仅5例出现药物副作用,提示石杉碱甲对稳定患者的病情,改善患者的认知功能和行为障碍均有良好的长期作用。近年的临床研究发现石杉碱甲治疗老年血管性痴呆(VD)也有满意的效果。30例病人均符合DSM-IVR和NINCDS/AIRENVD诊断标准。MMSE评分为12～24分的轻、中度痴呆病人,缺血指数≥7分。服用石杉碱甲片剂(100μg,bid)8周后,MMSE分数明显升高与对照组有显著性差异,ADL能力评定的结果也证实石杉碱甲治疗后有明显改善。仅有2例病人出现轻度腹胀,未停药对症处理后好转。有报道提到,64例脑器质性疾病(其中VD41例,AD23例)经石杉碱甲治疗后,AD和VD两组的WMQ和MMSE得分均较治疗前有明显改善。34对主诉记忆力不佳的中学生,经口服石杉碱甲(0.1mg,bi