丹莪妇康煎膏对子宫内膜异位症模型大鼠血浆xb2、6-keo-pgf1的影响

丹莪妇康煎膏对子宫内膜异位症模型大鼠血浆xb2、6-keo-pgf1的影响

子宫内膜（iu）是一种发育性女性的常见疾病。它指的是子宫内膜中的腺体和间质位，并在子宫腔外种植和生长。盆腔疼痛为EMS主要临床症状之一,给女性带来了极大痛苦,严重影响了女性的身心健康。近年来,因其发病率逐年上升而受到医学界的关注,但其发病机理至今不明。丹莪妇康煎膏具有活血化瘀,疏肝理气,调经止痛,软坚化积功效,为临床治疗EMS的常用中成药,对EMS患者出现的经期不适、痛经等症状具有较好疗效。为观察丹莪妇康煎膏对EMS的防治作用以及其抑制EMS盆腔疼痛的作用机制,本实验采用子宫内膜自体移植法建立大鼠EMS模型,通过观察异位子宫内膜组织形态学改变,血浆血栓烷B2、6-酮-前列腺素F1α的含量变化,以期为临床应用提供参考及依据。1材料表面1.1实验动物使用许可证Wistar大鼠,清洁级,雌性,体重180~200g,由河北省实验动物中心提供,实验动物使用许可证SYXK(冀)2006-0047,动物合格证号1009075。饲养于温度20~23℃,湿度45~60%,过氧乙酸溶液消毒环境。1.2孕三烯酮、庆大霉素丹莪妇康煎膏,昆明滇虹药业有限公司,批号100404;孕三烯酮,北京紫竹药业,批号53110101;庆大霉素,石家庄制药集团有限公司,批号068100905;苯甲酸雌二醇,上海通用药业股份有限公司,批号009004。1.3放射免疫分析药物方案b和b，北京普伟业生物科技有限公司;6-酮-前列腺素F1α放射免疫分析药盒,北京普尔伟业生物科技有限公司。1.4离心公司的纺粘设备超净工作台,苏州净化设备有限公司;5417R型离心机,德国Eppendorf公司;756MC型紫外-可见分光光度计,上海精密科学仪器有限公司;全自动γ放免分析仪,北京金泉水科技有限公司。2方法2.1患者安氏双、双、三大霉素联合麻醉后异体移植工艺流程造模采用自体移植法建立EMS大鼠模型,造模前2天,大鼠每日肌肉注射苯甲酸雌二醇0.1mg/kg体重促情,假手术组肌肉注射等容量生理盐水。手术时,大鼠腹腔注射2%戊巴比妥钠0.2mL/100g体重,待麻醉后固定于操作板上。开腹找到子宫,暴露左侧子宫,在离卵巢约1cm处,分离附着于子宫肌壁的脂肪和结缔组织,两端分别用手术线结扎,剪取中间约1cm长子宫组织,纵向剖开宫腔,暴露子宫内膜,切取5mm×5mm的子宫壁块。在腹壁切口右侧的腹肌与皮下筋膜层之间打隧道,以正好能置入子宫壁块为宜,将子宫壁块平整的置入右侧隧道底部,使内膜面紧贴腹肌,常规关闭腹腔。假手术组按上述方法切取子宫组织,丢弃,关腹,其余操作同上。术后各鼠腹腔注射庆大霉素0.4万U/只,连续5d。术后次日,各鼠肌肉注射苯甲酸雌二醇0.1mg/kg体重,每隔4d1次,共3次,以促进移植内膜的生长,假手术组肌肉注射等容量生理盐水。术后每周触摸包块2次,观察是否出现包块及包块的体积变化。术后第21d,将大鼠麻醉后固定,开腹,观察异位内膜形态学变化。以游标卡尺测量异位内膜组织体积,若体积增大≥8mm3,并出现液体积聚,隆起呈透明小囊状,则为造模成功。2.2单次给药剂量及时间取造模成功的大鼠40只,随机分为模型组(MG),丹莪妇康煎膏高剂量组(DFD-H,6g/kg·d)、低剂量组(DFD-L,3g/kg·d)、孕三烯酮组(GSG,0.5mg/kg·d),每组10只。另设假手术组(SHM)大鼠10只。各组大鼠每日灌胃给药(或蒸馏水)一次,给药容量为10mL/kg体重,连续30d。末次给药后禁食12h,麻醉,开腹,腹主动脉取血。观察异位子宫内膜生长情况,以游标卡尺测量其长、宽、高,并快速剪取异位子宫内膜,以10%甲醛液固定。2.3指标检测2.3.1组织社会学的观察取异位子宫内膜组织,常规石蜡包埋,作4μm连续切片,HE染色,观察子宫内膜组织形态学变化。2.3.2统计学处理采用放免法测定血浆血栓烷,B2(TXB2)6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PG1α)含量。2.4统计学处理统计结果用(x-±s)表示,采用SPSS11.5进行分析。所有数据先行正态性和方差齐性检验,各组间比较采用单因素方差分析,样本均数间的两两比较采用LSD-t检验。3结果3.1疗效判定标准观察EMS模型大鼠腹腔内有广泛粘连,可见移植物体积显著增大,呈近圆形,囊状,表面有血管生长,内有淡黄色透明积液。经药物治疗后,腹腔内粘连减少,移植物体积显著缩小且部分萎缩,囊内液体较少或基本消失。各组异位病灶体积比较见图1。与模型组相比:**P<0.01。3.3丹不同剂量丹不同配方大鼠血浆6-keto-pgf1、txb2和5-keto-pgf1配比对血浆血栓烷B2(TXB2)、6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)含量的影响从表1结果可见,与假手术组相比,模型组大鼠血浆TXB2含量显著升高(P<0.01),6-Keto-PGF1α含量显著降低(P<0.01),TXB2与6-Keto-PGF1α比值显著升高(P<0.01)。与模型组相比,丹莪妇康煎膏各剂量组大鼠血浆TXB2含量显著降低(P<0.01);丹莪妇康煎膏高剂量组大鼠血浆6-KetoPGF1α含量明显升高(P<0.05),低剂量组也有升高趋势,但无统计学意义(P>0.05);各剂量丹莪妇康煎膏均能使大鼠血浆TXB2与6-Keto-PGF1α比值较模型组显著降低(P<0.01)。4丹不同的及其及其衍生物的基因组和作用机制子宫内膜异位症(EMS)是育龄妇女常见疾病之一,虽为良性疾病,但其引起的痛经、性交痛、不孕等对女性的生活和健康却带来了极大的影响。目前临床上尚无治愈EMS的药物,只能缓解症状或控制疼痛。近年来,中医药治疗EMS因其疗效好,不良反应低,易为患者接受,受到了医学界的广泛关注。中医认为,EMS属于痛经、癥瘕、不育等范畴,与血瘀有关。由于血瘀而致气血运行不畅,“不通则痛”;或胞宫失于濡养,“不荣则通”,而出现痛经,临床常以行气活血,化瘀止痛药进行治疗。丹莪妇康煎膏,由紫丹参、莪术、竹叶柴胡、三七、赤芍、当归、三棱、香附、延胡索、甘草组成,具有活血化瘀、疏肝理气、调经止痛、软坚化积功效,对妇女瘀血阻滞所致月经不调、痛经、经期不适、盆腔子宫内膜异位症见上述症状者均具有较好疗效。为探究丹莪妇康煎膏缓解EMS盆腔疼痛的作用机制,本实验通过观察异位子宫内膜组织形态学改变,血浆血栓烷B2、6-酮前列腺素F1α的含量变化,以期为临床应用提供参考及依据。现代研究发现,EMS痛经患者血浆血栓烷A2(TXA2)含量显著升高,前列环素(PGI2)含量显著降低。TXA2为血小板微粒体合成的血管收缩剂,能够使血小板内cAMP减少,并引起Ca2+内流,造成血小板聚集性增强。而前列环素(PGI2)则是一种抑制血小板聚集的物质,并具有扩张血管的作用。正常情况下,机体通过调节TXA2及PGI2含量保持平衡,调控血管舒缩、血小板聚集。而临床研究发现,EMS患者的TXA2、PGI2比值较正常人升高,造成血管收缩,血小板聚集性高,进而子宫平滑肌血流减少,出现痉挛性收缩,引起盆腔疼痛。由于TXA2及PGI2均不稳定,极易代谢为TXB2、6-KetoPGF1α,因此本研究对EMS大鼠血浆TXB2、6-KetoPGF1α含量进行检测。结果显示,模型组大鼠血浆TXB2含量显著升高,6-Keto-PGF1α含量显著降低,二者比值显著升高,与临床报道吻合。应用丹莪妇康煎膏进行治疗后,可见EMS大鼠腹腔内粘连减少,移植物体积显著减小;病理切片可见异位腺腔体积减小,并有部分细胞萎缩。消除异位病灶是丹莪妇康煎膏治疗EMS盆腔疼痛的根本原因。本研究还发现,丹莪妇康煎膏能够通过显著降低血浆TXB2含量,明显升高6-Keto-PGF1α含量,显著降低TXB2与6-Keto-PGF1α比值,从而改善