地中海贫血-精讲

地中海贫血(二)

长沙金域基因室杨瑶2016-10-26标题大纲大纲1大纲2地中海贫血检测试验原理

地贫初筛项目简介大纲3结果录入，批单要点大纲1地中海贫血检测试验原理1.1血液基因组DNA提取1.2β-地中海贫血基因检测（PCR-反向点杂交法）1.3

α-地中海贫血基因检测（gap-PCR）1血液基因组DNA提取回收柱采用特殊硅基质材料在一定的高盐缓冲系统下高效、专一地吸附DNA、RNA的原理,,配备设计独特的离心吸附柱式结构,使用常规台式高速离心机,即可以高效回收核酸片段.高盐、低pH值情况下吸附DNA低盐、高pH值情况下释放DNA.GDB:PH<6.4PWB:PH=7.0~7.2TB:PH=8.01血液基因组DNA提取

2β-地中海贫血基因检测（PCR-反向点杂交法）设计特异的PCR引物且其5’端用生物素进行标记，扩增获得一定长度的DAN片段，该片段包含了所要检测的各个位点。根据检测位点碱基差异，按照碱基互补配对原则，设计特异性识别某种基因型的寡核苷酸探针组合，分别固定在尼龙膜的特定位置上，制成检测膜条。PCR扩增产物与探针通过分子杂交及显色反应，观察检测膜条各位点信号的有无（信号为蓝色斑点），判断该探针是否与PCR产物杂交，从而确定检测样本的基因型。α-地中海贫血基因检测（gap-PCR）

跨越断裂点的PCR技术（也称裂口PCR，gap-PCR)为α-地贫血基因诊断提供良好的方法大纲2地贫初筛项目简介常用评价指标:血液学检查

指标

-地贫-地贫

/-地贫

-地贫MCV(80~100fL)<80<80

80

80MCH(27~32pg)<27<27

27

27HbA2(2.5~3.5%)<2.5>3.5>3.5<3.0HbF(<1.0%)<1.01-3~15-35HbVariantsHbCS,HbQSHbE──亨氏小体偶见~++++─偶见─本试验测定红细胞对各种浓度低渗溶液的抵抗力。在低渗盐水中，水分透过细胞膜，使红细胞逐渐胀大破坏。红细胞的渗透性主要取决于红细胞的表面积与体积之比。表面积大而体积小者对渗盐溶液的抵抗力较大，反之则抵抗力较小(脆性增加)。球形红细胞表面积/体积比值减少，对低渗溶液特别敏感，脆性显著增加。原理：根据带电粒子在电场中作定向运动，可将可溶性被测物的各个蛋白质进行分离，然后对分离后的凝胶进行染色扫描分析，采用琼脂糖凝胶电泳法。高效液相色谱(HPLC)原理：血色素是由四条血色素蛋白所组成，其中任一氨基酸的改变即会造成这血色素之物理性质改变(如：电荷)；这种变化就可用来区分各种不同的变异血色素。

能准确定量HbA2,HbF及异常血红蛋白的量。---HbA2定量金标准

。基因诊断GAP-PCR（跨跃断裂点PCR）PCR+RBD（反向点杂交）基因测序突出优点：1准确性高

2分型大纲3结果处理，批单要点

结果录入注意事项1.对号入座（α-地中海贫血1基因和2基因的录入位置对应）；2.纯合子/杂合子一定要看清；3.“结果录入”规范A患者为HbH病（--/-α）B患者为HbH病（--/-α）复合β地贫。?报告单批准要点1.